Latin American Journal of Pharmacy Short Communication (formerly Acta Farmacéutica Bonaerense) Received: April 14, 2009 Lat. Am. J. Pharm. 29 (2): 284-8 (2010) Accepted: September 3, 2009 Fitoquímica y bioactividad de Chiliotrichum diffusum (Astereaceae), una Especie Nativa de la Patagonia Andina Sandra M. ALCALDE 1, Carlos A. TAIRA 2, Christian HÖCHT 2, Osvaldo L. CORDOBA 3 & María L. FLORES 4* 1 Farmacología I, 3 Química Biológica II y 4 Farmacognosia. Facultad de Cs. Naturales CRIDECIT, Univ. Nac. Patagonia SJB, Km 4 9000 Comodoro Rivadavia, Argentina. 2 Farmacología, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires Junín 956, Buenos Aires, Argentina. RESUMEN. Chiliotrichum diffusum (Asteraceae), “mata negra”, habita el sur de Argentina. Se han des- cripto usos étnicos rituales y medicinales de la especie. Las partes aéreas evidenciaron la presencia de fla- vonoides, taninos, hidratos de carbono, proteínas, antraquinonas, saponinas, cianoglicósidos y esteroides. El análisis de los flavonoides demostró una importante variabilidad estructural. Los grupos de flavonoides detectados fueron principalmente flavonas y flavonoles 7-O-glicosilados, dihidroflavonoles e isoflavonas. El extracto alcohólico y sus fracciones, mostraron actividad frente al bioensayo de citotoxicidad de la Arte- mia salina. La actividad antimicrobiana fue moderada frente a Staphylococcus aureus. SUMMARY. “Phytochemistry and Bioactivity of Chiliotrichum diffusum (Astereaceae), a Native Species from the Andean Patagonian”. Chiliotrichum diffusum (Asteraceae), “mata negra”, inhabits the south of Argentina. Ethnic rituals and medicinal uses have been described for this species. Flavonoids, tannins, carbohydrates, pro- teins, anthraquinones, saponins, cyanoglycosides and steroids were detected in the aerial parts. The analysis of the flavonoid fraction demonstrated an important structural variability. The principal flavonoid groups detected were flavones and flavonol 7-O-glycosides, dihydroflavonols and isoflavones. The alcoholic extract and their fractions showed activity against Artemia salina cytotoxicity bioassay. The antimicrobial activity was moderate against Staphylococcus aureus. INTRODUCCION Chiliotrichum diffusum (G. Forst.) Kuntze Se ha encontrado descripción étnica de usos (Asteraceae), “mata negra”, “romerillo”, kóor (en rituales y medicinales en forma de tatuajes y se lengua selk’nam u ona) es un arbusto de 50 a menciona, en particular, el uso de las flores de 150 cm de alto, con follaje abundante que habi- esta especie ya que “frotadas sobre los ojos acla- ta la zona andina de América del Sur, especial- raban la vista” 4,5. Se describe además como ar- mente el sur de la Patagonia de Chile y Argenti- busto forrajero, aunque no se conocen detalles na 1,2. Evidencia un amplio predominio de estructurales de sus componentes químicos. adaptación a temperaturas bajas (entre 7 y -5 Por los aspectos señalados resultó de interés °C) y al efecto seco de los vientos fuertes y la especie para su estudio con el objetivo de constantes. Presenta características de biodiver- analizar la composición química de diferentes sidad interesantes, destacándose altos valores de partes de la planta, posibles actividades biológi- sociabilidad y de abundancia-dominancia, por cas y, a partir de este conocimiento, intentar co- lo que esta especie es considerada como indica- rrelacionar las estructuras determinadas con una dora de la potencialidad de recursos que crecen potencial aplicación farmacológica. En este tra- en este ambiente 3. bajo se describen resultados químicos y de bio- PALABRAS CLAVE: Asteraceae, Bioactividad, Chiliotrichum diffusum, Fitoquímica, Flavonoides, Flora pata- gónica, “mata negra”. KEY WORDS: Asteraceae, Bioactivity, Chiliotrichum diffusum, Phytochemistry, Flavonoids, “mata negra”, Pata- gonian flora. * Autor a quien dirigir la correspondiencia. E-mail: [email protected] 284 ISSN 0326-2383 Latin American Journal of Pharmacy - 29 (2) - 2010 actividad primaria obtenidos con extractos de cos mediante cromatografia planar bidimensio- las partes aéreas. nal (CPB) sobre papel Whatman Nº 1, usando como fases móviles: BAA (n-butanol-ácido acéti- MATERIALES Y METODOS co-agua, 3:1:1) y luego ácido acético al 15 %) Obtención del material vegetal, extracción y 7,9. screening preliminar El material se colectó en la localidad de 28 Estudios de actividad biológica primaria de Noviembre (Santa Cruz, Argentina), en el pe- Test de Artemia salina ríodo estival de 2003, en una zona de pradera. El extracto alcohólico total (Et = FA), la Frac- La identificación botánica fue realizada por la ción B (FB) y los obtenidos del fraccionamiento Prof. María Elena Arce en la Universidad Nacio- exhaustivo (E1-6), fueron analizados mediante nal de la Patagonia San Juan Bosco. Una mues- el bioensayo de citotoxicidad de la Artemia sali- tra se conserva en el Herbario Regional Patagó- na, según la técnica descripta por McLaughlin nico de la UNPSJB (HRP 5305). 10. Se ensayaron por triplicado concentraciones Las partes aéreas fueron secadas a tempera- finales de los extractos de 1000, 100 y 10 µg/ml tura ambiente, bajo techo, y molidas en un mo- en la solución de sal marina. Como control ne- linillo de paletas provisto de un tamiz de malla gativo (blanco) se usó la solución de sal marina. 20. El material seco y molido fue extraído ex- El cálculo de la concentración de extracto que haustivamente con etanol 96° a temperatura am- provoca la muerte del 50 % de los organismos biente, durante 48 h. El extracto total obtenido (LC50) se efectuó por el método estadístico des- (Et) fue fraccionado inicialmente siguiendo los cripto por Finney 11. lineamientos de la marcha fitoquímica 6-8 esque- Test de sensibilidad antibacteriana matizada en la Figura 1. Se utilizaron cepas tipificadas de Escherichia coli (ATCC 25922), Enterococcus faecalis (ATCC 29212), Psuedomonas aeruginosa (ATCC 27853) y Staphylococcus aureus (ATCC 29213), desarro- lladas en ágar nutritivo, aisladas en caldo nutriti- vo y finalmente en medio ATB Nº 1. Se empleó el método de difusión en ágar 12. Una porción del extracto alcohólico total (Et) fue llevada a seco y resuspendida en etanol de 70°, con una concentración final de 250 µg/ml. Se utilizaron como control positivo una solución de clorhi- drato de estreptomicina y como control negati- vo, etanol de 70°. Las placas se incubaron 24 h a 37 °C y se observó el halo de inhibición del crecimiento. Figura 1. Extracción y fraccionamiento preliminar de las partes aéreas de Chiliotrichum diffusum (Astera- Test de actividad antifúngica ceae). Se utilizaron cepas tipificadas de Candida al- bicans (ATCC 10231) aisladas y desarrolladas en Para el análisis químico general de las frac- ágar Saboreaud. Se empleó el método de difu- ciones obtenidas a partir de Et (FA-D, Fig. 1) se sión en ágar 13. Una porción del extracto alco- utilizaron reacciones usuales cualitativas de gru- hólico total (Et) fue llevada a seco y resuspendi- pos químicos 6-8. da en etanol de 70°, con una concentración fi- nal de 250 µg/ml. Se utilizó como control positi- Fraccionamiento del extracto alcohólico vo una solución de nistatina y como control ne- total 7,8 gativo, etanol de 70°. Las placas se incubaron 48 El fraccionamiento exhaustivo del extracto h a 37 °C y se observó el halo de inhibición del alcohólico total (Et) se efectuó con solventes de crecimiento. distinta polaridad: tetracloruro de carbono (E1), benceno (E2), éter etílico (E3), acetato de etilo RESULTADOS & DISCUSION (E4), etanol (E5) y agua (E6). Para aquellas frac- El estudio fitoquímico general de las partes ciones que evidenciaron la presencia de flavo- aéreas de Chiliotrichum diffusum evidenció la noides, se estudiaron los perfiles cromatográfi- presencia de sustancias de naturaleza fenólica 285 ALCALDE S.M., TAIRA C.A., HÖCHT C., CORDOBA O.L. & FLORES M.L. nas propiamente dichas (Tabla 1). El ensayo del Fracción Grupo Químico Resultados poder afrógeno para saponinas dio positivo, FA flavonoides ++ aunque la altura de la espuma disminuyó rápi- taninos + damente desde los 6 mm, alcanzando a los 5 lípidos - min tan solo 1 mm, lo que se mantuvo con el hidratos de carbono + tiempo. No se detectaron triterpenos en ninguna FB esteroides + de las fracciones analizadas para este grupo quí- triterpenos - mico (FB y FC). En cambio la reacción cualitati- antraquinonas + va para determinar la presencia de esteroides dímeros de antronas + resultó positiva en la Fracción B (FB, Tabla 1). FC alcaloides - Fue llamativa la rapidez de la reacción para cardenólidos - cianoglicósidos, comparable a la obtenida a par- esteroides - tir del agua de laurel cerezo. La presencia de es- tos metabolitos no había sido descripta aún para Reacciones saponinas +/- especies relacionadas, lo cual constituye un dato directas cianoglicósidos + preliminar interesante. proteínas + Dados los resultados generales obtenidos, se Tabla 1. Resultados del estudio fitoquímico general realizó un fraccionamiento exhaustivo del ex- de las partes aéreas de Chiliotrichum diffusum (Aste- tracto alcohólico total utilizando solventes de raceae). polaridad creciente a fin de separar los flavonoi- des. Estos metabolitos resultaron particularmen- como principales constituyentes (Tabla 1). De te mayoritarios en las fracciones de acetato de ellas, fueron importantes los flavonoides y tani- etilo, etanol y agua (E4, E5 y E6). Además se nos, destacándose la existencia del tipo conden- detectaron en benceno y en éter etílico, aunque sados dado que en presencia de medio ácido y en baja