UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE INSTITUTO DE SAÚDE DE NOVA FRIBURGO CURSO DE GRADUÇÃO EM BIOMEDICINA BIANCA ARAUJO CARVALHO CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE TRICHOMONADÍDEOS PRESENTES NO MICROBIOMA INTESTINAL DE PRIMATAS NÃO HUMANOS NOVA FRIBURGO 2019 BIANCA ARAUJO CARVALHO CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE TRICHOMONADÍDEOS PRESENTES NO MICROBIOMA INTESTINAL DE PRIMATAS NÃO HUMANOS Monografia apresentada à Universidade Federal Fluminense/Instituto de Saúde de Nova Friburgo, como Trabalho de Conclusão do Curso de graduação em Biomedicina. ORIENTADORA: HELENA LUCIA CARNEIRO SANTOS CO-ORIENTADORA: KARINA MASTROPASQUA REBELLO NOVA FRIBURGO 2019 ii BIANCA ARAUJO CARVALHO CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE TRICHOMONADÍDEOS PRESENTES NO MICROBIOMA INTESTINAL DE PRIMATAS NÃO HUMANOS Monografia apresentada à Universidade Federal Fluminense/ Instituto de Saúde de Nova Friburgo, como Trabalho de Conclusão do Curso de graduação em Biomedicina. Apresentada em: 26 de novembro de 2019 Banca examinadora _____________________________________________ Dra Karina Mastropasqua Rebello-IOC/ FIOCRUZ _________________________________________________ Profa Dra Aline Cardoso Caseca-Universidade Federal Fluminense _________________________________________________ Dra Thabata Lopes Alberto Duque- IOC/ FIOCRUZ ____________________________________________________ Prof. Dr Helvécio Cardoso Póvoa- Universidade Federal Fluminense NOVA FRIBURGO 2019 iii iv DEDICATÓRIA Este trabalho eu dedico à minha família, aos meus amigos, e a todos que fizeram parte da minha jornada até aqui. v AGRADECIMENTOS À minha orientadora Dr.a Helena Lucia Carneiro Santos por toda paciência e dedicação ao transmitir-me não só conhecimento, mas também a paixão pela pesquisa científica brasileira. Agradeço por cada crítica construtiva que levaram a refletir e a desenvolver um melhor raciocínio crítico e ampliando meus pontos de vista sobre cada situação. Agradeço também pelos elogios que me incentivaram e me passaram confiança. Mostrou-me que temos profissionais extremamente dedicados e competentes que fazem toda a diferença no cenário nacional e internacional. À minha co-orientadora Dr.a Karina Mastropasqua Rebello por ser um verdadeiro modelo de profissional com sua postura sempre ética, competência, didática, dedicação à pesquisa e ao estudo contínuo e sensibilidade ao próximo. Agradeço pela Raquel e Rutinha que existem nela, por todas as críticas e conselhos que me inspiram a querer ser cada vez melhor, tanto na minha vida profissional quanto na pessoal. Agradeço por me mostrar que não é fácil ir sempre além, mas que vale a pena. À minha tutora e querida Prof.a Dr.a Aline Cadoso Caseca por todo incentivo, competência e confiança. Agradeço por me inspirar a sempre pensar fora da caixinha e me passar confiança para alcançar meus objetivos. Obrigada pelos inúmeros conselhos que com toda certeza foram essenciais para chegar até aqui e que vou levar para toda vida. Obrigada por ser exemplo de mulher, mãe, cientista e professora. Aos meus pais Domigas e José, aos meus irmãos Jacson, Jacqueline e Jaqueilson, meus sobrinhos Gabriel, Vinícius, Luíza, Viktor, Beatriz e a toda minha grande família que são meus maiores apoiadores e incentivadores. Agradeço pela compreensão quando eu me ausentava para estudar e por todas as noites de pizza e churrasco que me faziam sair do quarto. Obrigada por ser esse meu grande suporte, por toda união, proteção e transmissão de valores. Obrigada por todo amor incondicional. Aos meus professores do Instituto de saúde Nova Friburgo por me inspirarem a querer ser uma profissional tão competente quanto eles. Em especial aos vi professores Dr. Leonardo, Dr.a Caroline e Dra Fabiana que buscaram ampliar nossa visão e capacidade de raciocínio, não somente durante as aulas, mas também abrindo as portas para estudos em laboratório e projetos de extensão. Aos meus colegas do Laboratório em Estudos Integrados em Protozoologia (LEIP) da Fundação Oswaldo Cruz, que me acolheram tão bem nesse processo. Obrigada por toda ajuda, pelo clima leve, conselhos e inúmeras risadas (obrigada Rhagner Bonono). Agradeço por ter conhecido profissionais tão incríveis e competentes que me fizeram sentir parte desta grande família científica. Todos foram essenciais para minha caminhada até aqui: Andreia, Amanda, Rhagner, Vítor, Sheylinha, Claudia, Júlia, Igor, Carol e Clezia. Aos meus colegas de turma, em especial a Gabriela, Jéssica, Giovana, Rodrigo e às minhas amigas de turma e de laboratório Monique e Thaís, pela amizade, diversão, ajuda e companheirismo. Obrigada por tornarem essa caminhada mais leve e por mostrarem que na ciência e na vida chegamos mais longe quando verdadeiramente buscamos cumprir nossos objetivos apoiando e torcendo uns pelos outros. À minha família do Movimento dos Focolares que esteve comigo durante toda essa jornada, sempre apoiando e caminhando junto comigo. Agradeço por toda confiança e por toda comunhão que tivemos durante os espinhos e as rosas. Obrigada por me incentivarem a buscar um mundo mais unido e mais fraterno, por meio de atitudes concretas e diárias em todos os setores da minha vida. Agradeço especialmente às focolarinas Maysa, Fátima, Vau e Lui. Aos meus queridos amigos Luana, Maria Clara, Luíz (Ribeira), Thaís, Suelen, Luan e Marcelo. Às minhas queridas irmãs de unidade: Gabriela, Carla, Rayane, Ana, Carol, Natália e Stefany. Às irmãs que ganhei em Friburgo, que construíram nosso Forninho e que me deram um apoio incondicional durante toda essa jornada: Karol, Marcela, Mariana, Luciana, Isabella e Yasmin. Aos meus amigos de infância que estão em diferentes partes do mundo, mas que são a extensão da minha família, em especial ao Francisco e toda equipe de natação dos tempos de GCC e a minha melhor amiga da vida Isabella. vii EPÍGRAFE Quem poderá descrever as infinitas belezas e descobertas, os horizontes sem limites que contempla uma alma abandonada à aventura da vontade divina? Chiara Lubich viii RESUMO Trichomonadídeos são protozoários flagelados que pertencem a superclasse Parabasália e pertencem as ordens Trichomonadida e Tritrichomonadida . São microrganismos que apresentam um ciclo de vida simples e não possuem mitocôndria. São descritos em uma vasta variedade de hospedeiros, e são encontrados no trato gastrointestinal e nas vias geniturinárias. Os primatas não humanos (PNHs) são ótimos biomodelos para pesquisas biomédicas, pois são similares em termos fisiológicos, anatômicos, assim como neurológicos. Apesar de serem ocasionalmente relatados, ainda são escassas as informações sobre estes flagelados em PNHs. O intuito deste estudo é identificar e isolar trichomonadídeos em fezes de PNHs. Para tanto, 19 amostras fecais de PNHs da colônia do Instituto de Ciência e Tecnologia em Biomodelos (ICTB/ Fiocruz) e da Fundação RioZoo foram analisadas por exame direto das fezes e coprocultura. Além disso, as culturas viáveis foram axenizadas e depositadas na coleção de protozoários da FIOCRUZ. Também foi feita a caracterização molecular destes isolados, utilizando oligonucleotídeos para amplificação dos alvos 18S e regiões ITS. Foram identificadas oito amostras de Pentatrichomonas hominis, duas de Tritrichomonas foetus, duas de Tritrichomitus batrachorum. Outras duas amostras apresentaram picos duplos no eletroferograma não sendo possível identificá-las, e uma amostra ainda não apresentou percentual de similaridade relevante com nenhuma sequência depositada no GenBank. Cinco amostras não apresentaram uma sequência de boa qualidade. O presente trabalho descreve o primeiro relato de T. batrachorum e T. foetus em fezes de PNHs, e fornece dados importantes para melhor compreensão dos trichomonadídeos em PNHs. Palavras-chave: Trichomonadídeos; Primatas Não Humanos; Tritrichomonas foetus; Pentatrichomonas hominis; Trichomitus batrachorum; ITS; 18S. ix ABSTRACT Trichomonads are flagellated protozoan that belong to the superclass Parabasalia, and belong to the orders Trichomonadida and Tritrichomonadida. The life cycle of these microorganisms are simple, and they lack mitochondria. It is a known parasite of many different animals and they are found in the urogenital tract and gastrointestinal tract. Moreover, a few studies have described the presence of those flagellates in their hosts, but there isn’t much informations about these protozoans in NHP. The purpose of this study is to identify and isolate trichomonads in NHP feces. Indead, 19 samples of NHPs from the Colony of the Instituto de Ciência e Tecnologia em biomodelos (ICTB / Fiocruz) and the Fundação RioZoo were analyzed by direct examination of the samples and by coproculture. In addition, viable cultures went to the axenization process and then deposited in the FIOCRUZ protozoan collection. Molecular characterization, was made by oligonucleotides for the targets to the 18S and ITS regions. Eight samples of Pentatrichomonas hominis, two of Tritrichomonas fetus, and two of Tritrichomitus batrachorum were identified. Two other samples showed double peaks in the electropherogram, and one had no relevant similarity percentages with any sequence deposited in GenBank. Also five samples did not display a good quality of sequence. This study describes the first report of T. batrachorum and T. fetus in NHPs and gives important datas that can help to understand trichomonadids in NHPs. Keywords: Trichomonads, Non-human primates, Tritrichomonas foetus; Pentatrichomonas hominis; Trichomitus batrachorum; ITS; 18S. x Sumário RESUMO..................................................................................................................