THÈSE Pour l'obtention du grade de DOCTEUR DE L'UNIVERSITÉ DE POITIERS UFR des sciences fondamentales et appliquées Laboratoire Signalisation et transports ioniques membranaires - STIM (Poitiers) (Diplôme National - Arrêté du 25 mai 2016) École doctorale : Biologie-santé - Bio-santé (Limoges) Secteur de recherche : Aspects moléculaire et cellulaire de la biologie Présentée par : Oualid Ayad Caractérisation fonctionnelle des cellules souches cardiaques humaines dans un but thérapeutique Directeur(s) de Thèse : Patrick Bois, Aurélien Chatelier Soutenue le 12 décembre 2017 devant le jury Jury : Président Valérie Coronas Professeur des Universités, Université de Poitiers Rapporteur Emmanuel Deval Chargé de recherche CNRS, Université de Nice-Sophia Antipolis Rapporteur Christophe Vandier Professeur des Universités, Université de Tours Membre Patrick Bois Professeur des Universités, Université de Poitiers Membre Aurélien Chatelier Maître de conférences, Université de Poitiers Membre Anne Aries Chercheur, Institut de recherche en hématologie et transplantion, Mulhouse Pour citer cette thèse : Oualid Ayad. Caractérisation fonctionnelle des cellules souches cardiaques humaines dans un but thérapeutique [En ligne]. Thèse Aspects moléculaire et cellulaire de la biologie. Poitiers : Université de Poitiers, 2017. Disponible sur Internet <http://theses.univ-poitiers.fr> THESE Pou l’otetio du Gade de DOCTEUR DE L’UNIVER“ITE DE POITIER“ (Faculté des Sciences Fondamentales et Appliquées) (Diplôme National - Arrêté du 25 mai 2016) Ecole Doctorale : Biologie-santé Secteur de Recherche : Aspects moléculaire et cellulaire de la biologie Présentée par : Oualid AYAD ************************ Caractérisation fonctionnelle des cellules souches cardiaques humaines dans un but thérapeutique ************************ Directeurs de Thèse : Pr. Patrick Bois & Dr. Aurélien Chatelier ************************ Soutenue le 12 décembre 2017 Deat la Coissio d’Eae ************************ JURY C. VANDIER Professeur, Université de Tours Rapporteur E. DEVAL CR CNRS, IPMC, Nice Rapporteur A. ARIES Chercheur, IRHT, Mulhouse Examinateur V. CORONAS Professeur, Université de Poitiers Examinateur A. CHATELIER MCU, Université de Poitiers Examinateur P. BOIS Professeur, Université de Poitiers Examinateur Sommaire SOMMAIRE TABLE DES ILLUSTRATIONS ...................................................................................................................... 8 ABREVIATIONS ....................................................................................................................................... 12 INTRODUCTION ..................................................................................................................................... 16 Chapitre I : Cellules souches et régénération tissulaire ........................................................................ 16 1 Historique ...................................................................................................................................... 16 2 Propriétés des cellules souches ..................................................................................................... 17 2.1 L’auto-renouvellement .......................................................................................................... 17 2.2 Pouvoir de différenciation en plusieurs lignages cellulaires ................................................. 18 3 Types et potentiels de différenciation des cellules souches humaines : ...................................... 19 3.1 Les cellules souches embryonnaires (CSEs) : ......................................................................... 20 3.1.1 Les cellules souches totipotentes : ................................................................................ 20 3.1.2 Les cellules souches pluripotentes : .............................................................................. 21 3.2 Les cellules souches adultes: ................................................................................................. 21 3.2.1 Les cellules souches hématopoïétiques (CSHs) ............................................................. 22 3.2.2 Les cellules souches mésenchymateuses (CSMs) .......................................................... 24 3.2.3 Les cellules souches du tissu adipeux ............................................................................ 27 3.2.4 Les cellules progénitrices endothéliales ........................................................................ 27 3.2.5 Les ellules souhes de l’pithliu itestial : ............................................................ 29 3.2.6 Les ellules souhes de l’pidee ............................................................................... 31 3.2.7 Les ellules souhes de l’pithliu puloaie .......................................................... 32 3.2.8 Les cellules souches de la cornée et de la rétine .......................................................... 33 3.2.9 Les cellules souches/progénitrices hépatiques ............................................................. 35 3.2.10 Les cellules souches neurales (CSNs) du système nerveux central ............................... 36 3.2.11 Les cellules souches musculaires squelettiques ............................................................ 39 3.2.12 Les cellules souches cardiaques .................................................................................... 41 Chapitre II : Cellules souches et progéniteurs cardiaques .................................................................... 43 1 Nature des cellules souches cardiaques ........................................................................................ 43 2 Types des cellules souches cardiaques.......................................................................................... 45 2.1 Les CSCs c-kit positives (CSC c-kit+) ........................................................................................ 45 2.2 Les CSCs Sca1 positives (CSC Sca1+) ....................................................................................... 48 2.3 Les CSCs Isl-1 positives (CSCs Isl-1+)....................................................................................... 50 2.4 Les CSCs BCRP+ positives side-population (BCRP+ SP) ........................................................... 51 1 Sommaire 2.5 Les cellules dérivées des cardiosphères (CDCs) .................................................................... 53 2.6 Les CSCs W8B2 positives (CSC W8B2+) .................................................................................. 54 3 Modulateurs de la différenciation in vitro des CSCs adultes en cardiomyocytes ......................... 56 3.1 La 5-azacytidine ..................................................................................................................... 57 3.2 Le TGF-b: ................................................................................................................................ 58 3.3 L’aide asoiue : ............................................................................................................... 59 3.4 L’aide tioïue : ................................................................................................................ 60 3.5 La dexaméthasone :............................................................................................................... 61 3.6 L’otoie: ........................................................................................................................... 61 Chapitre III : Physiologie des cellules souches /progéniteurs cardiaques ............................................. 62 1 Le calcium : .................................................................................................................................... 62 1.1 Le calcium dans les cellules souches: .................................................................................... 62 1.1.1 L’atiit aliue spotae das les ellules souhes: .............................................. 63 1.1.2 Canaux VGCC et signalisation calciques ........................................................................ 64 1.1.3 Les stocks calciques intracellulaires dans les cellules souches: .................................... 67 1.2 Le calcium dans les cellules souches/progéniteurs cardiaques: ........................................... 67 2 Les canaux ioniques : ..................................................................................................................... 70 2.1 Les canaux ioniques dans les CSEs: ....................................................................................... 70 2.2 Les canaux ioniques dans les CSMs: ...................................................................................... 71 2.3 Les canaux ioniques dans les cellules souches/progéniteurs neurales: ................................ 72 2.4 Les canaux ioniques dans les CSCs: ....................................................................................... 73 3 Rôles des canaux ioniques dans la régulation de la prolifération et/ou la différenciation des cellules souches: .................................................................................................................................... 73 3.1 Prolifération ........................................................................................................................... 73 3.2 Différenciation : ....................................................................................................................