I II III Dedico esta tese a minha mãe, Maria do Carmo Orlandi, meu porto seguro. IV “We will have to repent in this generation not merely for the hateful words and actions of the bad people,” wrote Martin Luther King , “but for the appalling silence of the good people.” "Tell me, and I will forget. Teach me, and I will remember. Involve me, and I will learn" Benjamin Franklin “Gather a shell from the strown beach And listen at its lips: they sigh The same desire and mystery, The echo of the whole sea´s speech.” Dante Gabriel Rosseti V AGRADECIMENTOS A professora doutora Shirlei Maria Recco-Pimentel por me orientar desde o mestrado, sempre proporcionado todas as condições para que a pesquisa fosse realizada com excelência. Incentivando, discutindo resultados e me estimulando a prosseguir sempre. Por ser um exemplo de seriedade, compromisso e dedicação ao trabalho. A FAPESP pela concessão da bolsa de doutorado (Proc. n o. 04/13887-4). A CAPES, entidade do Governo Brasileiro voltada para a formação de recursos humanos, pelo apoio para a realização desse trabalho. A UNITAS MALACOLOGICA, Malacological Society of London e Sociedade Brasileira de Malacologia pelos auxílios financeiros para participação em Congressos Nacionais e Internacionais. Aos professores Dr. Osmar Domaneschi in memoriam , Dr. Flávio Dias Passos e a Dra. Eliane Pintor de Arruda por tão gentilmente me auxiliarem a identificar exemplares de diversas espécies de bivalves, contribuindo de forma efetiva para o êxito de nossas análises. A Dra. Cláudia Alves de Magalhães por ter me introduzido ao universo das coletas de moluscos, por me incentivar sempre e por ser uma amiga muito especial. As pesquisadoras, do Instituto Butantan, Dra. Toshie Kawano (Laboratório de Parasitologia), Dra. Sylvia Mendes Carneiro, Dra. Marta Maria Antoniazzi VI (Laboratório de Biologia Celular) por disponibilizarem a utilização do Microscópio Eletrônico de Transmissão e aos técnicos Alexsander Seixas de Souza e Simone Jared. A todos os alunos das professoras Dra. Luciana Bolsoni Lourenço e Dra. Shirlei Maria Recco-Pimentel: Stenio, Juliana Nascimento, Cíntia, Paula, Eduardo, Maria Madalena, Andréa e tantos outros por compartilharem conhecimentos e uma parte de suas vidas durante as horas em que passamos juntos durante a pós- graduação. Aos professores doutores Ana, Odair e Luciana pelos ensinamentos e pelo exemplo de comprometimento com a pesquisa. As alunas do programa de pós-graduação com as quais tive a oportunidade de estreitar laços de amizade Carolina Carvalho, Juliana Godoy, Aline Brandão, Samantha Celi e Yeda Quinderé. A Alessandra Ferreira da Costa por participar de nosso grupo de trabalho, trazendo novas abordagens ao modo como vivenciamos o dia-a-dia no laboratório; sendo sempre gentil e solícita. A Dra. Márcia Regina Denadai e ao Dr. Alexander Turra por coletarem e me ensinarem a coletar exemplares de bivalves marinhos no norte do estado de São Paulo. Ao corpo técnico-administrativo do laboratório de Microscopia Eletrônica do Instituto de Biologia da UNICAMP: Antonia Maria Ferreira Lima, Adriane Cristina VII Sarti Sprogis, Maria Aurora Souza da Silva e Maria Aparecida Santos por sempre me auxiliarem prontamente a utilizar os equipamentos e a recorrer aos recursos disponibilizados pelo laboratório. A Dra. Mary Anne Heidi Dolder e aos seus orientados por permitirem acesso a alguns dos equipamentos sob sua responsabilidade assim como viabilizar o empréstimo de alguns materiais de consumo. Aos Professores Doutores Paulo Joazeiro e Áureo Tatsumi Yamada por permitirem a utilização do ultra-micrótomo e ao Juvani Lago Saturno pelo auxílio técnico. Ao Programa de Pós Graduação em Biologia Celular e Estrutural por todas as oportunidades e respaldo para o desenvolvimento do doutorado e á secretária Líliam Alves Senne Panagio por todo o suporte necessário as oficializações e documentações durante a minha trajetória acadêmica. Ao Doutor Eugênio Rosa, da Faculdade de Engenharia Mecânica da UNICAMP, por discutir sobre a interação entre corpos microscópicos e fluidos, permitindo o entendimento da relação entre a morfologia do espermatozóide e alguns conceitos de Física. Ao Doutor Sérgio Siqueira Júnior, pela amizade durante os anos em que estivemos na pós-graduação e pela elaboração de ilustrações de espermatozóides. VIII Ao Rogério Lupo pelas ilustrações das conchas de bivalves marinhos. Ao meu irmão Walter Introíni pelas ilustrações de células gaméticas. Durante o estágio em Portugal: A Elsa Oliveira e a Angela, técnicas do Laboratório de Biologia Celular, Instituto de Ciências Biomédicas Abel Salazar, Universidade do Porto, por terem me recebido com tanta hospitalidade durante minha permanência nas terras portuguesas. E aos professores doutores Alexandre Lobo da Cunha e Mário Manuel da Silva Leite Sousa por terem me orientado nesse período. Aos alunos de pós-graduação Maria Inês Pinho dos Santos Graça, Ana Raquel Andrade Castro Azevedo e João Garcia, por serem pessoas lindas e doces que sempre estiveram ao meu lado durante três meses. Aos meus amigos Karla, Meika, Marcelo, Ava, Hérika, Alessandro, Will, Maria, Veve, Marília e Thiago, por proporcionarem momentos inesquecíveis e agradáveis, cheios de alegria e cumplicidade. Referindo-me a minha formação durante os Ensinos Fundamental, Médio e Graduação: A todos os docentes do Externato Ofélia Fonseca, na cidade de São Paulo, assim como do curso de graduação em Ciências Biológicas da Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, campus de Rio Claro, por contribuírem para a minha formação como cidadã e bióloga, permitindo que eu me interessasse cada vez mais pela vida acadêmica. IX Em minhas horas particulares: Ao Gabriel Baptista Alves Aleixo, por ser uma das pessoas mais doces, carinhosas e responsáveis que conheci. Por conseguirmos mesmo com vidas atribuladas e repletas de atividades, preenchermos as frestas das horas com amor, respeito e admiração. Aos amigos Leandro Schlittler, Leandro Diniz e Mahayana Godoy por toda amizade, força e carinho nesses anos de convivência na cidade de Campinas. A Maria José de Resende por ser uma pessoa incrível que transborda compaixão e generosidade. Tenho orgulho em tê-la como minha amiga. A Maria Inês por toda a ajuda e amizade nos momentos difíceis e por comemorar as conquistas diárias. Ao Ângelo Primo e ao José Augusto Lopes Júnior por sempre acreditarem em mim. Ao meu pai e a minha tia Laís, in memoriam . A Simone, minha irmã, por sua cumplicidade e tolerância durante anos em que eu pedi silêncio em casa para que eu pudesse me concentrar nos estudos. Por sua irreverência e personalidade forte. Por sua amizade e incentivo. A minha querida mãe por sermos unidas sempre, compartilhando vitórias e tropeços. Por seu amor incondicional. Por ser uma pessoa altruísta e generosa. Por sempre se preocupar com a minha formação acadêmica e com a construção X de minha personalidade. Ao seu lado, inevitavelmente, encontro acalento e incentivo, força e retidão. XI 1. RESUMO ___________________________________________________________ 2 2. ABSTRACT ________________________________________________________ 4 3. INTRODUÇÃO ______________________________________________________ 6 3.1. Aspectos gerais da taxonomia dos Mollusca ______________________________ 6 3.2. Ultra-estrutura de espermatozóides de bivalves marinhos __________________ 8 3.2.1. Núcleo do Espermatozóide, tamanho do ovo e tipo de desenvolvimento _______ 12 3.2.2. Algumas Considerações sobre a terminologia empregada no estudo de espermatozóides __________________________________________________________________ 14 3.3. As famílias, as espécies estudadas e a problemática envolvida ____________ 15 3.3.1. Família Veneridae ___________________________________________________________ 15 3.3.2. Família Donacidae ___________________________________________________________ 19 3.3.3. Famíla Tellinidae ____________________________________________________________ 21 3.3.4. Família Mytilidae ____________________________________________________________ 25 3.3.5. Família Isognomonidae _______________________________________________________ 28 3.3.6. Família Ostreidae ____________________________________________________________ 31 3.4. REFERÊNCIAS _________________________________________________________ 40 4. OBJETIVOS GERAIS ________________________________________________ 53 5. ARTIGOS ___________________________________________________________ 54 Comparison of the Spermatozoan Morphology of Isognomon bicolor and Isognomon alatus (Mollusca, Bivalvia, Isognomonidae) _______________________ 55 Spermatozoan ultrastructure and detection of nuclear acid phosphatase activity in spermatids of Anomalocardia brasiliana and Tivela mactroides (Mollusca, Bivalvia, Veneridae) ________________________________________________________ 64 Comparative study of sperm ultrastructure of five bivalve species of the families Tellinidae and Donacidae ___________________________________________________ 93 Sperm ultrastructure in Crassostrea oysters from Cananéia in the Southeast of Brazil ____________________________________________________________________ 127 Ultrastructure of spermatozoa in Mytella (Bivalvia, Mytilidae) populations from distinct habitats in the southeast coast of Brazil _____________________________ 153 6. CONCLUSÕES GERAIS _____________________________________________ 168 1 1. RESUMO Aplicações de Microscopias Eletrônicas de Transmissão (TEM) e Varredura (SEM) têm contribuído para a sistemática de moluscos bivalves e classificações de táxons mais abrangentes.