Dr. Patricio Godoy Martínez Instituto de Microbiología Clínica/Australomics Universidad Austral de Chile www.pgodoy.com FUSARIUM HÁBITAT
• Común en climas templados tropicales (desiertos, áreas árticas y alpinas). • El género Fusarium está ampliamente distribuido en la naturaleza y comprende una gran cantidad de especies reconocidas como fitopatógenas.
Examen microscópico directo
1.-Utilizar KOH (10% – 20%) + tinta azul o negra permanente (3:1).
2.- Se coloca un 3.-Tiempo de clarificación (12 4.- Observa con cubreobjetos sobre horas) condicionar protegido objetiva de 10x y 40x la muestra. de la luz y en cámara húmeda en microscopio de luz. en refrigerador. Cultivo
Agar Agar Agar Sabouraud Mycosel Lactrimel
Las muestras serán sembradas con un asa en forma de L en los 3 medios.
- Preparación con Azul de Hongo Lactofenol. filamentoso - Microcultivo en agar papa, Los medios de cultivo serán avena, papa zanahoria, agar incubados a 25°C – 28°C por 7- 15 clavel. días. Extendido de material corneal fijado al calor y teñido con la Espátula de coloración de Giemsa (GRAM también puede ser ralizado). kimura Montaje directo de material corneal en KOH al 20% con tinta negra permanente. Se observan hifas tabicadas hialinas. C C Cultivos: Agar Sangre, Chocolate, Sabouraud. C C C C
Mena et al / Rev Iberoam Micol. 2015;32(2). Lesiones de piel: 77% Neumonía: 54%
Toma de muestra: biopsias Toma de muestra Hemocultivos positivos: 55%
Nucci & Anaissie. Clin Infect Dis 2002;35:909-20. .Hemocultivos .Biopsias .Secreciones respiratórias (LBA) .Directo (Gram, Giemsa, Calcofluor, KOH 20% + tinta) .Cultivo: agar Sabouraud (SAB), Agar Papa (PDA), Agar avena (OAT) .Maldi-Tof .Biología Molecular Toma de muestra: procedimiento quirúrgico 2 fragmentos, una en suero fisiológico que va para cultivo en medios comunes y otra en formalina al 10% para el examen histopatológico.
Las biopsias de tejido subcutáneo pueden ser lavadas con solución antibiótica de CAF por 10´ en una placa de Petri y cortadas con bisturí, cada pedazo debe ser sembrado en mínimo cuatro tubos de agar Sabouraud con CAF, incubados en estufa bacteriológica a una temperatura de 25 a 28°C.
H&E G&C PAS
Cultivos: -Agar Sabouraud 2% dextrosa -Agar avena (OAT) MICROMORFOLOGÍA
Macroconídio
Mesoconídio
Microconídio
Clamidoconídio
De Hoog et al. - Atlas of Clinical Fungi. 2000. FUSARIUM SOLANI (ES UN COMPLEJO) F. oxysporum F. dimerum F. verticillioides Muestra Microbiológica (1) Plato muestras MALDI-TOF (2)
Voyager Spec #1=>AdvBC(32,0.5,1.0)=>SM 7[BP = 6124.1 , 8 1 1 ]
6124.17 100 810.8
5939.78
90
80
8337.73 70
5787.20 60
50 6568.23
8381.69
% Intensity %
40 6885.21
11237.04
7682.30 30
8027.42
7436.85
10031.69 20
5993.13
8736.06
11025.28
6258.37
8206.17
7626.57
9074.78
9727.03
7025.52
4990.87
10 4813.56
0 4807.0 6878.6 8950.2 11021.8 13093.4 15165.0 Mass (m /z) Identificación Fúngica Banco de datos SARAMIS o Bruker (4) Espectro de masa MALDI-TOF (3)
1. Aislamiento y crecimiento de la muestra de hongo (tiempo?); 2. Transferir el material biológico directamente de la placa de Petri para el plato de muestras del MALDI, adición de solución matriz; 3. Secar y transferir para el MALDI-TOF espectrómetro de masa y MALDI-TOF MS medida; 4. Editar el espectro (corrección línea base, suavizar, detectar el pico), exportar la lista de picos e importar la lista de picos para el software.
Santos, C., Lima, N. (2010) A Identificação de Fungos pela Espectrometria de Massa Através da Técnica de MALDI-TOF ICMS. Proceedings of Cong. Bras. Micol. (Eds.: J.C. Dianese, L.T.P. Santos), CD-Rom, pp. 566-574. . Para el secuenciamiento, normalmente son utilizadas las secuencias parciales de los siguientes genes:
. RPB2 – RNA polimerasa subunidad II . EF-1 - Factor de elongación . LSU – Subunidad mayor del gene ribosomal . ITS –α Espaciador interno transcrito . D1/D2 –Dominios variables del LSU
O’Donnell et al. 2007. JCM, 45:2235-2248. O’Donnell et al. 2008. JCM 46:2477-2490. G. fujikuroi
F. oxysporum
F. incarnatum-equiseti
F. chlamydosporum
F. solani (representa el mayor grupo)
F. dimerum O’Donnell et al. 2007. JCM, 45:2235-2248. SCEDOSPORIUM / LOMENTOSPORA . Es un género que hace parte de los Microascales, que contienen otros géneros como agentes potenciales de enfermedad para los humanos como son Scopulariopsis. . Scedosporium se encuentra frecuentemente en los suelos, plantas, agua y sedimentos observándose con más frecuencia en climas templados que en trópicos. Ramirez-Garcia A, et al. Scedosporium and Lomentospora: an updated overview of underrated opportunists. Med Mycol. 2018;56(suppl_1):102-125 Danila Seidel et al. (2019) Prognostic factors in 264 adults with invasive Scedosporium spp. and Lomentosporaprolificans infection reported in the literature and FungiScope®, Critical Reviews in Microbiology, 45:1, 1-21. Danila Seidel et al. (2019) Prognostic factors in 264 adults with invasive Scedosporium spp. and Lomentosporaprolificans infection reported in the literature and FungiScope®, Critical Reviews in Microbiology, 45:1, 1-21. C.-H. Chiang et al. / Dermatologica Sinica 32 (2014) 29e32. Fadzillah et al. Case Rep Ophthalmol Caso Clínico Valdivia Med. 2013;2013:413953. . Hemocultivos . Biopsias . Secreciones respiratórias (LBA) . Directo (Gram, Giemsa, Calcofluor, KOH 20% + tinta) . Cultivo: agar Sabouraud (SAB), Agar Papa (PDA), Agar avena (OAT) . Maldi-Tof . Biología Molecular
Scedosporium Pseudoallescheria apiosperma (Scedosporium apiospermum) Lomentospora prolificans
Colonias planas, oliva-gris por la abundante conidiogénesis, 30ºC. Ramirez-Garcia A, et al. Scedosporium and Lomentospora: an updated overview of underrated opportunists. Med Mycol. 2018;56(suppl_1):102-125. Ramirez-Garcia A, et al. Scedosporium and Lomentospora: an updated overview of underrated opportunists. Med Mycol. 2018;56(suppl_1):102-125. (Pseudallescheria boydii) Scedosporium boydii
(Pseudoallescheria apiosperma) Scedosporium apiospermun
Scedosporium aurantiacum
Lomentospora prolificans (Scedosporium prolificans) Lomentospora valparaisensis sp. nov.
Tortorano et al 2014: Clin Microbiol Infect 3: 27-46 Tortorano et al 2014:Álvarez Clin E 2018;Microbiol Personia Infect 40(1):718 3: 27-46 Revista Chilena de Infectología. 2018. 35 (4): 363-370. Revista Chilena de Infectología. 2018. 35 (4): 363-370. Revista Chilena de Infectología. 2018. 35 (4): 363-370.
Sarocladium kiliense
Curso de Taxonomía de Hongos filamentosos de Importancia Clínica – enero - 2022 Muchas Gracias www.pgodoy.com