APROXIMACIÓN AL ESTADO REPRODUCTIVO DE MURCIÉLAGOS EN DOS REGIONES DEL EJE CAFETERO: UTILIZACIÓN DE CITOLOGÍAS VAGINALES COMO INDICADOR DE ETAPA ESTRAL

Laura Pérez Pabón

TRABAJO DE GRADO Presentado como requisito parcial Para optar por el titulo de

Bióloga

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS CARRERA DE BIOLOGÍA Bogota, D.C. 2007

Articulo 23 de la Resolución Nº 13 de Julio de 1946

"La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en sus trabajos de tesis. Sólo velará porque no se publique nada contrario al dogma y a la moral católica y por que las tesis no contengan ataques personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo de buscar la verdad y la justicia"

APROXIMACIÓN AL ESTADO REPRODUCTIVO DE MURCIÉLAGOS EN DOS REGIONES DEL EJE CAFETERO: UTILIZACIÓN DE CITOLOGÍAS VAGINALES COMO INDICADOR DE ETAPA ESTRAL

Laura Pérez Pabón

APROBADO

______Jairo Pérez-Torres, Ph.D.

______Tomas Bolaños Hela Osma de Bonilla

APROXIMACIÓN AL ESTADO REPRODUCTIVO DE MURCIÉLAGOS EN DOS REGIONES DEL EJE CAFETERO: UTILIZACIÓN DE CITOLOGÍAS VAGINALES COMO INDICADOR DE ETAPA ESTRAL

Laura Pérez Pabón

APROBADO

______Ángela Umaña, M.Phil. Andrea Forero B. Sc. Decana Facultad Ciencias Directora Carrera Biología

AGRADECIMIENTOS

Quisiera agradecer a algunas personas y entidades por hacer posible este trabajo.

-A COLCIENCIAS que por medio del Centro de Excelencia: Centro de Investigación y Estudios en Biodiversidad y Recursos Genéticos (CIEBREG) financió la mayor parte de este trabajo. Proyecto: Valoración de los bienes y servicios de la biodiversidad para el desarrollo sostenible de paisajes rurales colombianos: Complejo ecorregional de los Andes del Norte.

-A Parques Nacionales Naturales de Colombia y a Jorge Lotero como jefe de programa, por permitir mi estadía y el desarrollo de este trabajo en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya, Risaralda.

-A Germán Darío Gómez, administrador de la reserva natural La Montaña del Ocaso, por permitir mi ingreso y estadía en la reserva.

-Al Laboratorio de Ecología Funcional por su ayuda económica, préstamo de equipos y bibliografía.

-A Jairo Pérez por su constante apoyo y paciencia durante varios años y sobre todo por su ayuda para realizar este trabajo de grado y su permanente confianza en mí.

-A Carolina Valdespino por sus valiosas enseñanzas, por ayudarme a descubrir mi interés por la reproducción en mamíferos y sobre todo por su invaluable amistad.

-A Vladimir Rojas por sus sabios consejos y su gran ayuda en el trabajo de campo.

-A Natalia Cortés por facilitarme la información de algunos de los datos de su trabajo de grado.

-A mis incondicionales compañeras de campo, Marcela Carrera y Caterine Forero por su gran compañía y apoyo.

-A mis ayudantes de campo Lorena Marín, Javier Palacio y Daniel Rodríguez por su compañía, paciencia y colaboración en campo.

-A mis amigos por su valiosa amistad y su apoyo a lo largo de toda la carrera.

-A Alejandro León por su apoyo incondicional y su ayuda durante estos años.

-A mis papás por apoyarme siempre y creer en mí, aun en los momentos en que yo no lo hacía.

v TABLA DE CONTENIDO 1 INTRODUCCIÓN ...... 13 2 MARCO TEÓRICO ...... 14 2.1 Características reproductivas en mamíferos ...... 14 2.2 Aspectos reproductivos de los murciélagos ...... 17 2.3 Factores que influyen en el estado reproductivo de murciélagos ..... 20 2.4 Aproximaciones metodológicas al estado reproductivo ...... 21 2.5 Transformación y degradación del hábitat en el eje cafetero ...... 26 3 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIÓN ...... 27 3.1 Problema ...... 27 3.2 Justificación ...... 29 4 OBJETIVOS ...... 30 4.1 Objetivo general ...... 30 4.2 Objetivos específicos ...... 30 5 MATERIALES Y MÉTODOS ...... 31 5.1 Diseño de Investigación ...... 31 Población de estudio y muestra ...... 31 5.2 Métodos ...... 31 5.2.1 Área de estudio ...... 31 5.2.2 Metodología ...... 34 5.2.2.1 Fase preliminar ...... 34 5.2.2.2 Fase de campo ...... 35 5.2.2.2.1 Captura de individuos ...... 35 5.2.2.2.2 Determinación del estado reproductivo ...... 36 5.2.2.2.3 Citologías vaginales ...... 36 5.2.2.3 Etapa de laboratorio ...... 36 5.2.2.4 Protocolo Citologías Vaginales ...... 37 5.3 Recolección de la información ...... 38 5.4 Análisis de Información ...... 38 6 RESULTADOS ...... 41 6.1 Estructura y composición ...... 41 6.2 Éxito de captura ...... 47 6.3 Proporción de sexos ...... 47 6.3.1 Odds ratio ...... 50 6.3.1.1 Odds ratio de la región de la reserva La Montaña del Ocaso………...... 50 6.3.1.2 Odds ratio en el Santuario de Fauna y Flora Otún- Quimbaya...... 55 6.4 Estado Reproductivo de las hembras ...... 59 6.4.1 Preñez ...... 63

vi 6.5 Estado reproductivo de los machos ...... 64 6.6 Citologías vaginales y etapa estral ...... 66 6.6.1 Etapas estrales individuales ...... 71 7 DISCUSIÓN ...... 76 7.1 Estructura y composición ...... 76 7.2 Proporción de sexos ...... 79 7.3 Estado reproductivo de machos ...... 81 7.4 Estado reproductivo de las hembras ...... 82 7.4.1 Preñez ...... 82 7.4.2 Etapas reproductivas de las hembras ...... 82 7.5 Citologías vaginales ...... 87 7.5.1 Etapas estrales individuales ...... 89 8 CONCLUSIONES ...... 92 9 RECOMENDACIONES ...... 94 10 BIBLIOGRAFIA...... 96 11 ANEXOS ...... 107 Anexo1. Fotos de cada tipo de célula epitelial vaginal………………107 Anexo 2. Fotos de las células epidérmicas…………………………...108 Anexo 3. Formato de libreta de campo………………………..………111 Anexo 4. Radios de probabilidad de cinco especies del la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso, Quindío……….…………112 Anexo 5. Radios de probabilidad de tres especies del Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya, Risaralda…………………………….114

vii LISTA DE FIGURAS

Figura 1. Distribución de las abundancias de especies encontradas en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso…………...... …….43

Figura 2. Curva de acumulación de especies para los murciélagos de la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso, ajustada al modelo de Dependencia lineal y al modelo de Clench……………………..………………44

Figura 3. Distribución de las abundancias de las especies encontradas en el Santuario de Fauna y Flora Otún Quimbaya, Risaralda.....……………...... 46

Figura 4. Curva de acumulación de especies de murciélagos encontradas en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya ajustada a los modelos de Dependencia lineal y el modelo de Clench…………………..…………………46

Figura 5. Proporción de sexos de la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso……..…………………………………………………………………….49

Figura 6. Proporción de sexos del Santuario de Fauna y Flora Otún- Quimbaya.………………………………………………………………………….49

Figura 7. Radios de probabilidad de encontrar machos y hembras respecto a Carollia perspicillata ……………………………………………………………….51

Figura 8. Radios de probabilidad de encontrar machos y hembras respecto a Artibeus jamaicensis ………………………………………………………………52

Figura 9. Radios de probabilidad de encontrar machos y hembras respecto a Artibeus phaeotis …………………………………………………………….…….53

Figura 10. Radios de probabilidad de encontrar machos y hembras respecto a Artibeus lituratus …………………………………………………………………54

Figura 11. Radios de probabilidad de encontrar machos y hembras respecto a Glossophaga soricina ………………………………………………………...…54

Figura 12. Radios de probabilidad de encontrar machos y hembras respecto a Sturnira ludovici ………………………………………………………………….55

Figura 13. Radios de probabilidad de encontrar machos y hembras respecto a Carollia brevicauda……………………………………………………... ………58

Figura 14. Radios de probabilidad de encontrar machos y hembras respecto viii a Artibeus lituratus …………………………………………………………………58

Figura 15. Estado reproductivo de hembras a lo largo de todos los muestreos…………………………………………………..………………………59

Figura 16. Estado reproductivo de Carollia perspicillata a lo largo de todos los muestreos……………………………...………………………………….………..60

Figura 17. Estado reproductivo de Artibeus lituratus a lo largo de todos los muestreos……………………………………………………………………..……60

Figura 18. Estado reproductivo de hembras en marzo, abril, mayo, agosto del año 2006 en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso y enero del año 2007en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya……………..62

Figura 19. Maternidad de hembras encontradas en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso...... 63

Figura 20. Maternidad de hembras encontradas en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya……...... 64

Figura 21. Estado reproductivo de machos en el mes de agosto del 2006 en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso...... 65

Figura 22. Estado reproductivo de machos en el mes de enero del 2007 en el Santuario de Fauna y Flora de Otún Quimbaya….…...... 66

Figura 23. Etapa estral de las hembras encontradas en el mes de marzo del 2006 en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso…….…...... 67

Figura 24. Etapa estral de las hembras encontradas en el mes de mayo del 2006 en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso…….…..……68

Figura 25. Etapa estral de las hembras encontradas en el mes de agosto del 2006 en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso…….….…….69

Figura 26. Etapa estral de las hembras encontradas en el mes de enero del 2007 en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya…………...…………70

Figura 27. Porcentaje de células epidérmicas vaginales de Artibeus lituratus en los meses de marzo, mayo, agosto y enero………………………………..72

Figura 28. Porcentaje de células epidérmicas vaginales de Carollia perspicillata en los meses de marzo, mayo, agosto y enero…………………72 ix LISTA DE TABLAS

Tabla 1. Ciclos reproductivos de murciélagos neotropicales………………...19

Tabla 2. Relación de las células epiteliales vaginales y el ciclo estral en hembras de mamífero………………………………………………………….…25

Tabla 3. Número de individuos capturados por especie en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso, Quindío………….…………………..42

Tabla 4. Número de individuos capturados por especie en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya……………………………………………..…….45

Tabla 5. Proporción de sexos de seis especies de este trabajo y cinco estudios realizados previamente……..………………………………………….79

x RESUMEN

El desarrollo y uso de técnicas para describir los ciclos reproductivos de murciélagos bajo condiciones naturales son importantes para un mejor entendimiento de su dinámica poblacional. Factores como el clima, la temperatura, la altitud y las variaciones de disponibilidad de alimento, afectan la estacionalidad reproductiva. En este estudio el estado reproductivo del ensamblaje de murciélagos fue evaluado describiendo la proporción de sexos, el estado reproductivo de machos (inmaduro, inactivo y activo sexualmente) y hembras (inactiva, preñada, lactante y postlactante), y el número de hembras que ya habían tenido crías. Sumado a esto, la técnica de frotis vaginales fue estandarizada y tomada como evidencia de las etapas estrales. Los datos fueron tomados en los meses de marzo, abril, mayo y agosto del 2006 en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso (Quindío) y en enero del 2007 en el Santuario de Fauna y Flora Otún- Quimbaya (Risaralda). Los estados reproductivos reportados coinciden con otros estudios realizados anteriormente en Colombia; también se realizó un protocolo para la realización de las citologías vaginales en murciélagos. Los resultados muestran que esta técnica que no necesita de intervención quirúrgica es fácil de usar y es útil para determinar las etapas estrales y describir los ciclos y así aumentar el conocimiento de la reproducción.

ABSTRACT

Development and use of techniques to describe bat reproductive cycles under natural conditions are crucial for a better understanding of their population dynamics. Variables such as climate, temperature, altitude and temporal fluctuations of food availability influence reproduction seasonality. In this study, reproductive status of a bat assemblage was evaluated by describing sex proportions, male (immature, sexually active or inactive) and female reproductive stages (inactive, pregnant, lactating and post lactating) and proportion of pregnancy. In addition, vaginal smears were standardized and applied to evidence the estral stage. Data was collected from March to May of 2006 in the reserva natural La Montaña del Ocaso (state of Quindío) and on January of 2007 in the Santuario de Fauna y Flora Otún Quimbaya (state of Risaralda). The identified reproductive stages coincided with previous reports for other studies in Colombia; moreover, a protocol was developed to perform vaginal cytologies on bats. The results showed that this non-invasive technique is easy to use, affordable and reliable to determine estral stages and describe estral cycles.

1 INTRODUCCIÓN

En Colombia los bosques andinos han sido fuertemente afectados. Como consecuencia de esto, actualmente sólo quedan el 8% de los bosques andinos originales. Desde la colonización, las zonas naturales del eje cafetero han sufrido cambios constantes hacia agroecosistemas, lo que ha impactado fuertemente su conformación y dinámica, afectando a su vez las especies animales y su permanencia. Varios estudios muestran que los cambios en la composición del ecosistema afectan diferentes aspectos ecológicos de las especies de vida silvestre. Se han evidenciado efectos sobre la diversidad, riqueza, abundancia, comportamiento, estructura poblacional y reproducción, entre otros. La reproducción depende, tanto de factores poblacionales como ambientales. Poblacionalmente es importante la relación de sexos. El éxito reproductivo depende de la cantidad y calidad de alimento disponible en el momento del parto y la lactancia. Ya que estas actividades necesitan de grandes cantidades de energía. Múltiples factores como el clima, la temperatura, la altitud, el estrés y la temporada de las precipitaciones inciden en la estacionalidad de la reproducción. El objetivo de este trabajo fue realizar una aproximación al estado reproductivo de los murciélagos. Este se evaluó a partir de la proporción de sexos, estado reproductivo de los machos y la determinación de etapas estrales y reproductivas de las hembras. Se utilizó la técnica de citologías vaginales en los murciélagos para determinar la etapa estral.

13 2 MARCO TEÓRICO El estado reproductivo de una población animal, puede variar dependiendo de las condiciones ambientales en las que se encuentre, ya que depende de numerosos factores. Dada la importancia ecológica de los murciélagos, es importante estudiar su reproducción e implementar nuevas técnicas que faciliten el conocimiento de ésta.

2.1 Características reproductivas en mamíferos Los mamíferos se dividen en las subclases Prototheria y Theria. Los mamíferos pertenecientes a Prototheria muestran reproducción ovípara, depositando los huevos en nidos donde éstos continúan su desarrollo antes de eclosionar (Kardong 1999). La subclase Theria es vivípara, donde la cría se desarrolla dentro de la madre. Está conformada por las infraclases Metatheria y Eutheria. Los Metatheria (marsupiales) presentan un corto desarrollo dentro de la madre, el cual es completado fuera dell cuerpo materno (Kardong 1999). Permanecen dentro de una bolsa en el vientre (llamada marsupio) de la madre. Los Eutheria son los placentados, las crías se desarrollan en el útero materno y se nutren a través de un órgano llamado placenta (Nowak 1999 y Vaughan 1986). En los mamíferos se presentan dos ciclos reproductivos, influenciados por hormonas y por el sistema nervioso: el ciclo menstrual y el ciclo estral (Asa 1996). El ciclo menstrual se caracteriza por la hemorragia periódica que se origina en el útero con la descamación del endometrio y es acompañada por el óvulo no fecundado (Vaughan 1986). Este ciclo se encuentra en algunos primates, en la musaraña arbórea y la musaraña elefante. El ciclo estral, se caracteriza por presentar una etapa llamada estro, o comúnmente llamada celo, en la cual la hembra se encuentra en ovulación y se halla fisiológica y comportamentalmente apta para el apareamiento (Ramírez 2006).

14 El ciclo estral presenta cuatro etapas: Anestro o Diestro, Proestro, Estro y Metestro. En el Anestro o Diestro las vías genitales y el ovario generalmente se encuentran inactivos; éste contiene muchos folículos pequeños: Los folículos terciarios se hacen mas grandes y las células granulosas más numerosas. Las células lúteas endocrinas empiezan a rodear formando el cuerpo lúteo. Se encuentra en un estado de latencia donde las hormonas esteroides sexuales están inactivas (Nelson 1994 y Ramírez 2006). En el Proestro empieza la actividad: algunos folículos ováricos inician el crecimiento y se inicia el engrosamiento de las paredes uterinas, especialmente del endometrio. Se forma la teca externa y los folículos aumentan de tamaño, para formar los folículos de Graff. En esta etapa el cuerpo lúteo se encuentra totalmente formado y se presentan altos niveles de estrógeno (Nelson 1994 y Ramírez 2006). En el Estro los folículos alcanzan su crecimiento máximo (folículo de Graff): los óvulos son liberados por el ovario (el número depende de la especie), el endometrio se encuentra en su punto máximo de engrosamiento. Hormonalmente, disminuye el nivel de estrógeno y aumenta el de progesterona. Comportamentalmente, la mayoría de las hembras cambian de posición el dorso de forma característica, buscan a los machos, incitan a la cópula, son más atractivas para el macho, se encuentran más receptivas a las señales masculinas y los machos las captan más fácilmente por señales químicas, de olor y comportamiento. El cuerpo lúteo retrocede, a menos que se lleve a cabo la cópula (Nelson 1994 y Ramírez 2006). En el Metestro baja el nivel de hormonas esteroides: el comportamiento va volviendo a la normalidad y se da el adelgazamiento del endometrio. Después de la ovulación los folículos se rompen, se empiezan a formar los folículos terciarios, y se induce la formación de la teca interna (Nelson 1994 y Ramírez 2006).

15 El éxito de la reproducción depende principalmente de que las condiciones ambientales durante la época de partos, o comúnmente llamada pico reproductivo, sean favorables (Taddei 1976). Muchos factores medioambientales afectan el momento de reproducción en los mamíferos: el fotoperiodo, la energía, la temperatura, y la nutrición. Esta última es muy importante, ya que la gestación y sobre todo la lactancia necesitan de grandes cantidades de energía (Lee et al. 1998). La reproducción se presenta de manera estacional y sincrónica. La estacionalidad se refiere a la ocurrencia de cierta etapa reproductiva durante una época del año y se repite a través de los años. La sincronía se refiere a la relación de una etapa del ciclo reproductivo con una época climática (p.e., húmeda, seca) o fenológica (p.e, fructificación o floración). La sincronía se puede presentar sin darse la estacionalidad (Heideman 1995). Debido a que el alimento se presenta por estaciones en las zonas templadas y por temporadas en las zonas tropicales, los nacimientos se sincronizan con éstas, cuando presenta el mayor incremento en la oferta de alimento (Bergallo et al. 1999). Es por esto que los mamíferos de zonas templadas tienen sus crías en la primavera o iniciando el verano (Bergallo et al . 1999 y Nowak 1999). Los mamíferos de las regiones tropicales han evolucionado hacia la sincronización de sus máximos períodos de reproducción con las épocas de precipitación o de sequía, dependiendo de lo requerido por su hábito alimentario. Cuando disminuye la oferta de alimento disminuye también el número de crías, lo que se traduce en una reducción de la población. Por ejemplo, la ardilla Spermophilus townsendi generalmente tiene sus crías a principios de la primavera. Sin embargo, una fuerte sequía en 1977, en Idaho, produjo un descenso en la densidad del follaje que afectó la tasa reproductiva de esta especie, generando una disminución en su densidad poblacional (Vaughan 1986).

16 El estudio realizado por Lee et al. (1998) en monos ( Cercopithecus aethiops ) en Kenya, reveló que la abundancia disminuía a medida que su principal fuente alimentaria decrecía por efecto antrópico. Bergallo et al. (1999) estudiaron la relación entre la reproducción y los factores ambientales de las especies de roedores Nectomys squamipes , Orysomys intermedius y Akodon cursor (Sigmodontinae) en Brasil. Encontraron que la época principal de nacimientos no se relacionaba con la precipitación, la temperatura y la longitud del día, sino con la época de máxima oferta de alimento. Nectomys squamipes y Orysomys intermedius presentaron patrones reproductivos similares, donde su mayor tasa reproductiva fue durante las épocas de lluvia y la menor en las épocas de sequía y de bajas temperaturas, cuando la disponibilidad de frutos e insectos era menor (Bergallo et al. 1999). La reproducción, además de estar influenciada por la cantidad de alimento, también depende de su calidad nutricional. En un estudio realizado en ratones silvestres de la especie Microtus montanus se encontró que después de ingerir 6-MBOA (un componente extraído de una planta juvenil que se encontraba en crecimiento) su actividad reproductiva se activó de inmediato (Vaughan 1986).

2.2 Aspectos reproductivos de los murciélagos El orden Chiróptera después del orden Rodentia es el grupo de mayor diversidad y distribución en Colombia (Alberico et al. 2000). Además, es de gran importancia ecológica por su variedad de gremios alimentarios y su papel en la dispersión de semillas, la polinización y el control de plagas (Ceballos et al. 2005, Pineda et al. 2005 y Fenton et al. 1992). Se ha propuesto su utilización como indicador del estado del ecosistema, ya que es muy sensible a los cambios ambientales (Pineda et al. 2005). Por lo anterior, es importante conocer su estado reproductivo para evaluar su situación poblacional y proponer acciones encaminadas a su conservación. 17 La reproducción de los murciélagos es similar a la del resto de mamíferos placentados. El embrión se desarrolla dentro de la madre (Wilson 1997). El promedio de gestación es de dos meses y de acuerdo con los diferentes ciclos reproductivos que presentan y algunas diferencias fisiológicas, este tiempo puede variar entre cuarenta días y seis meses (Kunz 1982, Racey et al . 2000 y Altringham 1996). En las zonas templadas la reproducción de los murciélagos se sincroniza con las estaciones. Cuando las condiciones son desfavorables (frío y escasez de alimento) durante el invierno pueden migrar a lugares con mejores condiciones o bien, pueden hibernar (Ceballos et al. 2005). El apareamiento de muchas especies se produce en el otoño, justo antes de las bajas temperaturas y la baja oferta alimentaria del invierno. Durante la primavera siguiente la hembra ovula y se realiza la fecundación, los nacimientos se producen al final de esta estación o principios del verano (McNab 1974, Wilson 1997 y Nowak 1994). Los murciélagos neotropicales, a diferencia de los de las zonas templadas, presentan varios tipos de ciclos reproductivos (Tabla 1), los cuales se diferencian de acuerdo con la estacionalidad del ambiente y la disponibilidad de alimento (Wilson 1973 y Ceballos et al. 2005). El patrón reproductivo poliestral no estacional se presenta en la especie Desmodus rotundus; probablemente es el resultado de los hábitos alimentarios no estacionales de estos hematófagos. El incremento de la ganadería y la presencia de otros animales domésticos le proveen alimento durante todo el año. Las especies con ciclo monoestral estacional en su mayoría son insectívoras, por lo que la abundancia de insectos puede ser un factor limitante. Se desconoce el mecanismo que le permite a Myotis nigricans presentar el ciclo de poliestría estacional . Los patrones de poliestría bimodal de varios frugívoros parecen ser causados por la temporalidad en la abundancia de frutos (Wilson 1973 y Ceballos et al. 2005).

18 Tabla 1. Ciclos reproductivos de murciélagos neotropicales (Wilson 1973). Ciclo Explicación Ejemplo Poliestral no estacional Apareamientos continuos durante el Desmodus rotundus año Poliestral estacional Apareamientos continuos durante la Myotis nigricans mayoría del año, pero con un periodo de inactividad sexual Poliestral bimodal Temporada restringida de Phyllostomidae : Artibeus, Carollia, apareamientos con dos temporadas Glossophaga, Uroderma, Sturnira, de nacimientos. Chiroderma, Vampyrops. Monoestral estacional Una temporada restringida de Noctilio labialis, Pteronotus apareamiento parnellii, Saccopterix bilineata.

Los murciélagos de la familia Phyllostomidae sincronizan su reproducción con la temporada de fructificación y floración, de tal manera que la época de nacimientos sucede cuando la oferta de alimento es mayor (Heideman 1995, Mares et al. 1971 y Porter 2001), ya que la lactancia es un proceso que necesita gran cantidad de energía. Se ha encontrado que la mayoría de nacimientos de los murciélagos frugívoros ocurren en la época húmeda (cuando se da la fructificación), mientras que la de los nectarívoros sucede en la época seca (cuando se da la floración) (Gram 1989 y Wilson 1973). Sin embargo, las especies nectarívoras del género Glossophaga tienden a ser más omnívoras, por lo que no dependen exclusivamente de la fructificación y la floración para reproducirse, ya que pueden alimentarse también de insectos (Ceballos et al. 2005, Rasweiler 1975 y Reid 1997). Después del primer parto del año, algunas especies que presentan ciclo bimodal estacional entran inmediatamente en etapa de estro. Cuando ocurre el segundo parto, no entran en estro, inician un estado de quiescencia. Este estado usualmente se sincroniza con la temporada de lluvia más fuerte. Sin embargo, Artibeus jamaicensis puede repetir el estro durante la segunda época reproductiva (August 1982 y Wilson 1997).

Aunque la nutrición es el factor más importante para la reproducción

19 exitosa en los murciélagos, ésta también es sensible a factores como la ovulación, la fertilización e implantación retardada, el desarrollo retardado del embrión y la proporción de sexos, entre otros.

2.3 Factores que influyen en el estado reproductivo de murciélagos La ovulación inducida y la fertilización e implantación retardada son características usuales en murciélagos de zonas templadas. Algunos murciélagos tropicales con amplia distribución también pueden presentarlas (Altringham 1996, Porter 2001 y Racey et al. 2000). Artibeus jamaicensis presenta el desarrollo retardado del embrión, cuando el desarrollo del embrión se detiene después de implantarse en el útero y se mantiene en un estado de dormancia aproximadamente de diez semanas (Altringham 1996). El ciclo de Artibeus jamaicensis y posiblemente de otras especies de este género, es único. Después del parto entre julio y agosto entran nuevamente en estro, se realiza la implantación a finales de agosto o principios de septiembre, se detiene el desarrollo y continúa a mediados de noviembre, finalmente los nacimientos ocurren entre marzo y abril (Nowak 1994 y Fleming 1971). Una situación similar se presenta en Minipterus schreibersii (Vespertilionidae) que se desarrolla lentamente durante el invierno (Fleming 1971). Los cambios en la estructura poblacional, entendida como proporción de sexos y de rangos de edad (adultos, subadultos y juveniles), afectan directamente su dinámica. Si cambia la relación de sexos, la proporción de rangos de edades o disminuye el número de individuos, se afectan los eventos reproductivos por disminución en la probabilidad de apareamientos (Ortega 2002). De acuerdo con la importancia del macho en la crianza y su capacidad para defender y cuidar a más de una hembra, los murciélagos presentan 3 sistemas de estructura de grupos: monogamia, harem y grupos de varios machos (Altringham 1996). 20 La monogamia sucede cuando un macho se relaciona con sólo una hembra durante la temporada de apareamiento (Nowak 1994). Este sistema es poco común en mamíferos. En murciélagos se presenta en Vampyrum spectrum , Lavia frons , Hipposideros beatus , Pteropus samoensis y Rhinolophus sedulus (Altringham 1996 y Nowak 1994). El harem es el sistema predominante en murciélagos (p.e., Saccopterix bilineata , Artibeus jamaicensis y Phyllostomus hastatus ). En este sistema un macho tiene acceso exclusivo a un grupo de hembras (Nowak 1994). Cuando hay un único macho en el harem, defiende su puesto alrededor de tres años y luego sus hijos se dispersan para formar nuevos grupos. En algunas especies (p.e, Phyllostomus hastatus ) además del macho dominante, pueden haber más machos en el grupo que compiten por la dominancia durante la temporada de apareamiento. Según Altringham (1996), Artibeus jamaicensis presenta grupos de sólo un macho y un pequeño grupo de hembras (4-11), aunque ese número puede variar. En un estudio realizado en Costa Rica se encontró que mientras la proporción de sexos de Carollia y Glossophaga era 1:1, en especies como Artibeus jamaicensis el número de hembras era mayor (Mares et al. 1971). El sistema de grupos de varios machos , se da en numerosas especies de colonias grandes, con múltiples parejas y compañeros. Particularmente en los Vespertilionidae de las zonas templadas (p.e., Myotis lucifugus ) (Nowak 1994). En los tres sistemas de estructura de grupos los machos cuidan y defienden a las hembras. Si el número de hembras aumenta demasiado, algunas pueden ser transferidas a poblaciones pequeñas adyacentes (Altrigham 1996).

2.4 Aproximaciones metodológicas al estado reproductivo La estructura poblacional se establece mediante la cuantificación de la relación de sexos y del porcentaje de individuos juveniles, subadultos y 21 adultos activos y no activos sexualmente. Es muy complicado determinar la etapa estral en la que se encuentra una hembra de murciélago, debido a que es difícil observar el cambio en el comportamiento durante el estro, y no es evidente el sangrado que se da en otras especies en esta etapa. A principios del siglo XX se sugirió que el comportamiento del animal se relacionaba con su etapa en el ciclo estral y se empezaron a desarrollar técnicas para comprobarlo. Se extraían los ovarios y se observaba que el comportamiento sexual se detenía, por lo que se concluyó que el comportamiento reflejaba la función ovárica. En investigaciones posteriores se observaba el comportamiento sexual e inmediatamente se extraían los ovarios para hacer cortes y observarlos al microscopio. Las estructuras encontradas se relacionaban con el comportamiento (Nelson 1994). La primera innovación técnica en el estudio del ciclo sexual femenino que no implicaba el sacrificio de individuos fue el uso de marcadores externos no inactivos que reflejaban la actividad ovárica. El primer experimento en citología vaginal fue el de Stokard y Papanicolaou en 1917, quienes utilizaron conejillos de indias, ratones y ratas. Posteriormente, estos investigadores continuaron con numerosas especies (Nelson 1994, Felipe et al. 2001 y Touma et al. 2001). Los estrógenos estimulan la proliferación, diferenciación y descamación de las células epiteliales vaginales (Sato et al. 1997), por lo cual se realiza un frotis o lavado vaginal de las células epiteliales y se observan al microscopio. Se reconoció que esta técnica es una buena herramienta para relacionar los comportamientos de cortejo y cópula con un tipo específico de célula vaginal. De esta forma, se puede evidenciar la función ovárica estimando la duración del ciclo estral en diferentes especies sin intervención quirúrgica (Felipe et al. 2001); además es un procedimiento fácil y rápido de tomar (Nelson 1994). En la actualidad se utilizan otras técnicas sin intervención quirúrgica para determinar la etapa estral. Se han desarrollado pruebas basadas en

22 exámenes en sangre (Chang et al. 2004 y Valdespino et al. 2002), pelo (Koren et al. 2002), saliva (Nelson 1994), orina (Lasley et al. 1991) y heces (Dloniak, et al. 2003 y Valdespino et al. 2002). Estos exámenes miden los niveles de hormonas esteroides, ya que se ha encontrado que estos reflejan el estado de la etapa estral (Felipe et al. 2001). Sin embargo, debido a que algunas especies no muestran variaciones evidentes en sus niveles hormonales entre algunas etapas del ciclo estral, se requiere hacer primero una validación de la técnica. Para esto, se sigue de manera directa el ciclo completo y se compara con la técnica de frotis vaginales o con alguna de las mencionadas anteriormente (Nelson 1994). Las citologías vaginales han sido de gran utilidad para conocer el ciclo de diferentes especies como el castor (Myocastor coypus ) (Felipe et al. 2001), el wombat ( Vombatus ursinus ) (West et al. 2004), el lemur ( Lemur fulvinus mayottensis ) (Cranz et al. 1986), la comadreja ( Galea musteloides ) (Touma et al. 2001), el zorro ( Vulpes zerda ) (Valdespino et al. 2002), el dromedario iraní ( Camelus dromedarios ) (Ahmadi et al. 2005), el zorro plateado ( Vulpes vulpes ) (Boue et al. 2000) y el puercoespín ( Atherurus africanus ) (Mayor et al. 2003). En investigaciones realizadas en murciélagos usualmente se ha determinado el estado reproductivo de las hembras mediante caracterización morfológica, palpación y disección (Wilson 1979 y Fleming 1971). Las citologías vaginales en murciélagos han sido utilizadas en Colombia con objeto de observar espermatozoides para evidenciar la cópula (Rasweiler 1975 y de Bonilla et al. 1985) y para determinar la etapa estral el individuos de la especie Carollia perspicillata (de Bonilla et al. 1988) y Molossus molossus (Castiblanco 1989). Hasta el momento no se conocen publicaciones que muestren el uso de esta técnica para establecer la etapa estral en otras especies. A lo largo del ciclo estral la temperatura (West et al. 2004), el grado de abertura de la membrana vaginal (Touma et al. 2001) y la coloración y

23 consistencia del flujo (Felipe et al. 2001) cambian, por lo que son empleados como indicadores adicionales de la etapa estral. Estas características pueden verse en animales a los cuales se les lleva un seguimiento para poder observar los cambios de su ciclo estral. Para este trabajo se escogió la citología vaginal, porque además de ser una de las mejores técnicas disponibles, es económica y se ajusta a los tiempos establecidos para el muestreo. En la citología vaginal se observan diferentes tipos celulares: células parabasales, intermedias, superficiales nucleadas y superficiales anucleadas (Felipe et al. 2001, Nelson 1994 y West et al. 2004). El contenido de leucocitos varía considerablemente durante el ciclo, disminuyendo o desapareciendo durante el estro (Cranz et al. 1986). Las células superficiales (características del proestro y estro vaginal) generalmente son de forma poligonal y presentan un citoplasma de color claro. Cuando la célula superficial es anucleada es de mayor tamaño que la nucleada y esta última presenta núcleo de forma oval o de forma no definida. Las células intermedias (características del anestro o diestro II vaginal) son de forma oval o poligonal con su núcleo usualmente en el centro. En las células parabasales o profundas (características del metestro o diestro I vaginal) el núcleo se observa bien teñido y ocupa la mayoría del citoplasma (Felipe et al. 2001) (Anexo 1). El estro vaginal se evidencia por la predominancia de células cornificadas o células superficiales anucleadas con forma de “cornflakes”. En el diestro vaginal (este estado se divide en metestro y diestro) aparecen células epiteliales nucleadas y un bajo número de células anucleadas y de leucocitos. El proestro vaginal se caracteriza por presentar numerosas células epiteliales nucleadas y gran reducción o desaparición de leucocitos. Morfológicamente esta última etapa se reconoce por la abertura del canal vaginal y la desaparición de la membrana vaginal. Comportamentalmente se

24 refleja por el cortejo y la cópula (Nelson 1994). Es posible relacionar el ciclo ovárico con la forma de las células epiteliales vaginales (ciclo estral vaginal) para identificar en qué etapa del ciclo estral se encuentra la hembra (Cranz et al. 1986, Felipe et al. 2001, Nelson 1994, Touma et al. 2001 y West et al. 2004) (Tabla 2). Boling y colaboradores en 1941 y Feder en 1981 relacionaron los cambios en las células vaginales con los cambios ováricos en roedores. Encontraron que el estro vaginal se relacionaba con la presencia de folículos rotos recientemente después de la ovulación y la inducción de la formación de la teca interna (metestro). En el diestro I vaginal los folículos terciarios se comienzan a agrandar, las células granulosas aumentan en número y las células lúteas rodean la cavidad fluida para la posterior formación del cuerpo lúteo. En el diestro II el cuerpo luteo se encuentra totalmente formado, el tejido conectivo rodea la teca interna para formar la teca externa y se forman los folículos de Graff. En el proestro vaginal se da el crecimiento de los folículos de Graff para el rompimiento y ovulación, los folículos que no van a ovular y el cuerpo lúteo son reabsorbidos, a menos que se de un estimulo por penetración (Nelson 1994). El porcentaje de cada tipo de célula encontrado en el conjunto de las células epiteliales vaginales refleja la etapa estral en la que se encuentra la hembra (Tabla 2).

Tabla 2. Relación de las células epiteliales vaginales y el ciclo estral en hembras de mamífero (Nelson 1994).

CICLO ESTRAL CICLO VAGINAL (células epiteliales) Anestro o Diestro Diestro I o Metestro Proestro Diestro II Estro Proestro Metestro Estro

25 La caracterización del ciclo estral, empleando la técnica de citologías vaginales combinándola con la descripción de la estructura poblacional, muestra una descripción detallada del estado reproductivo de la población. Cuando los ambientes naturales son transformados, también cambian las condiciones ambientales (p.e, luz, humedad y temperatura), la estructura de la vegetación, la disponibilidad de alimento y de lugares de percha (Altringham 1996, Kunz 1982, Racey et al. 2000 y Touma et al. 2001) y la altura disponible para forrajeo (Pérez-Torres 2004). Para el caso de los murciélagos, lo anterior puede traer como consecuencia que los eventos reproductivos de las poblaciones se alteren, lo que a su vez puede afectar negativamente la dinámica poblacional y amenazar su estabilidad.

2.5 Transformación y degradación del hábitat en el eje cafetero La expansión de la ganadería y la agricultura en Colombia ha hecho que los ecosistemas naturales se pierdan o se transformen. La extensión de los bosques se ha reducido, han cambiado las propiedades físicas y químicas del suelo, se ha transformando la composición vegetal y las poblaciones animales se han afectado (Murgueitio 2003). Por ejemplo, actualmente persisten apenas el 8% de los bosques andinos principalmente como fragmentos donde se encuentra el 59% de las especies de murciélagos (Castaño et al . 2004, Murgueitio 2003). Entre 1985 y 1995 se transformaron 547.940 ha. de bosques y las sabanas y los agroecosistemas llegaron a 84.567 y 866.355 ha., respectivamente (MinAmbiente 2002). Los ecosistemas de la ecorregión del eje cafetero han sido fuertemente afectados por la actividad antrópica desde el sigo XIX, momento en que se produjo la colonización antioqueña y el auge de la agricultura. Esto causó la ocupación de nuevos territorios en Caldas, Risaralda, Quindío, norte del Tolima, norte del Valle del Cauca, Chocó y el sur de Antioquia principalmente (López 2004). El Quindío fue colonizado en la segunda etapa 26 del siglo XIX. Se desarrolló la explotación del caucho, la cría de cerdos y el cultivo del café (CARDER 2004). Una cantidad considerable de bosque natural ha sido reemplazada por fincas dedicadas a la ganadería para leche y carne y diferentes tipos de cultivos de ciclo corto, lo que ha afectado las fuentes de agua, la biodiversidad y el clima (Alameda 2003). Estos cambios ambientales son considerados como tensionantes, puesto que en la mayoría de los casos producen efectos negativos sobre la fauna asociada a dichos ambientes. Se han evidenciado efectos sobre la diversidad de especies (Numa 2002 y Estrada 2005), la estructura y composición de comunidades (Pérez- Torres 2001), la distribución espacial (Herrera et al. 2004 y Numa 2002), el comportamiento (Kirkpatrik 1987), la dinámica poblacional (Forys et al. 1996 y Temples et al. 1998), la estructura poblacional (Buckley et al. 1996 y Nupp et al. 1996) y la reproducción (Temples et al. 1988). De éstos, la reproducción es de los factores más sensibles para el mantenimiento de la población, ya que se puede presentar disminución en el número poblacional y causar extinción local (Lee et al. 1998). Por lo anterior, es importante encontrar y aplicar técnicas para evaluar el estado reproductivo de las poblaciones. La caracterización del ciclo estral, utilizando la técnica de citologías vaginales, se combinó con la descripción de la proporción de sexos y el estado reproductivo, con lo cual se logró hacer una aproximación al estado reproductivo de las poblaciones en dos regiones del eje cafetero.

3 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIÓN

3.1 Problema El orden Chiróptera es el segundo grupo de mamíferos más diverso y con mayor distribución en Colombia, presentando 9 familias y 178 especies

27 (Alberico et al. 2000). La gran variedad de gremios alimentarios, como frugívoros, nectarívoros, insectívoros, algunos carnívoros y hematófagos, los hace un grupo importante en la dispersión de semillas, la polinización y el control de plagas (Pineda et al. 2005 y Fenton et al. 1992). Igualmente, los Chirópteros son un buen indicador del estado del ecosistema por su sensibilidad frente a cambios ambientales (Pineda et al. 2005 y Fenton et al. 1992). Algunos estudios han mostrado que la transformación del ecosistema incide directamente sobre factores ecológicos en animales. Entre éstos se encuentra la diversidad, la riqueza, el comportamiento y la reproducción, entre otros (Numa 2002, Kirkpatrik, 1987, Forys et al. 1996, Temples et al. 1998, Buckley et al. 1996, Nupp et al. 1996, Estrada 2005, Pérez-Torres 2004 y Cortes-Delgado 2006). La reproducción, además de ser un factor de gran sensibilidad, es un buen indicador del estado de las poblaciones (Kunz 1989 y Racey et al . 2000). El saber la proporción de sexos, el estado de preñez, lactancia y postlactancia y si las hembras han tenido crías o no, son características importantes para saber cómo se encuentra una población. Los estudios sobre reproducción son de gran importancia, ya que muestran una aproximación al estado reproductivo de una población y como será la dinámica de ésta a largo plazo. Una aproximación metodológica de gran importancia, es identificar las etapas estrales de las hembras de murciélago por medio de citologías vaginales. Esta técnica permite saber en qué momento las hembras se encuentran aptas para la cópula y en un futuro poder realizar seguimientos para establecer el ciclo en las diferentes especies. En la medida que se conozca éste, se podrán determinar exactamente los ciclos reproductivos de los murciélagos y al realizar estudios, poder utilizar esta información como prueba de los estados y dinámicas poblacionales. Este trabajo tiene por objetivo describir y así realizar una aproximación

28 al estado poblacional de dos ensamblajes de murciélagos a partir del estado reproductivo y la etapa estral.

3.2 Justificación

Dada la magnitud de los procesos de transformación y pérdida del hábitat en la ecorregión del eje cafetero, es importante evaluar el estado de las poblaciones animales. Determinar los aspectos reproductivos permite hacer inferencias sobre la viabilidad y probabilidad de supervivencia de las poblaciones. Anteriormente en Colombia se han realizado estudios sobre reproducción enfocados a comportamiento, estados reproductivos (inactividad, preñez, lactancia y postlactancia) y su temporalidad (Bonilla 1985 y Wilson 1979). Se han encontrado pocos estudios que hablen sobre el ciclo estral a partir de citologías vaginales (De Bonilla et al. 1988 y Castiblanco 1989) y esta información es de gran importancia para realizar trabajos que den información sobre el estado y dinámica poblacional a largo plazo, sin necesidad de intervención quirúrgica. Una búsqueda en el ISI Web of knowledge reveló que entre los años 1993 y 2006 se han publicado 2123 artículos sobre Chiróptera, de los cuales 121 (5.7 %) se han enfocado en sus aspectos reproductivos. De estos, 20 (16.6 %) son latinoamericanos. Por lo anterior, es necesario incrementar los estudios sobre la reproducción y así poder relacionarla con factores ecológicos los cuales pueden ser importantes para la conservaci{on de estos animales. El presente trabajo de grado se realiza con el objeto de caracterizar y realizar una aproximación al estado reproductivo en murciélagos, utilizando la técnica de citología vaginal para establecer la etapa estral, la cual es de gran ayuda para que en estudios posteriores se puedan realizar seguimientos para determinar la época exacta de la etapa estral y poder determinar el ciclo exacto en diferentes especies. Esta técnica presenta

29 varias ventajas: la facilidad de su utilización, su economía y la ausencia de intervención quirúrgica al animal, entre otras. Este es un aporte importante, ya que a partir de este trabajo y del protocolo propuesto, se puede emplear esta técnica para continuar el estudio de los ciclos estrales y su utilización a futuro para estimar el estado de las poblaciones a largo plazo.

4 OBJETIVOS

4.1 Objetivo general

Describir el estado reproductivo de dos ensamblajes de murciélagos en el eje cafetero, utilizando la técnica de citología vaginal para determinar la etapa estral

4.2 Objetivos específicos Objetivo 1 1. Describir la estructura poblacional de las especies de murciélagos encontradas en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso, Quindío, y en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya, Risaralda.

¿Cual será la estructura poblacional de las especies de murciélagos encontradas en dos regiones del eje cafetero?

Objetivo 2 2. Determinar la etapa del ciclo reproductivo de las hembras de las especies de murciélagos encontradas en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso, Quindío, y el Santuario de Fauna y Flora Otún- Quimbaya, Risaralda.

¿Cuál será la proporción de hembras de las especies de murciélago que se encuentren en la misma etapa reproductiva en dos regiones del eje cafetero? 30

Objetivo 3 3. Determinar la etapa del ciclo estral de las hembras de las especies de murciélagos encontradas en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso, Quindío, y el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya, Risaralda.

¿Cual será la proporción de hembras de las especies de murciélagos en cada etapa estral, encontradas en dos regiones del eje cafetero?

5 MATERIALES Y MÉTODOS

5.1 Diseño de Investigación Investigación de tipo descriptiva

Población de estudio y muestra Población: Los Chirópteros encontrados en la zona de la reserva natural La Montaña del Ocaso, Quindío, y en el Santuario de Fauna y Flora Otún Quimbaya, Risaralda.

Muestra: Los individuos capturados en diez redes de niebla durante 35 noches en la región de la reserva La Montaña del Ocaso, y 18 noches en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya.

5.2 Métodos

5.2.1 Área de estudio El muestreo realizado en el Quindío, se llevó a cabo en dos bosques subandinos (El Ocaso y Veraguas) en la zona de la reserva natural La

31 Montaña del Ocaso. El muestreo realizado en Risaralda se llevo a cabo en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya.

-Región de la reserva natural La Montaña del Ocaso Es parte del valle interandino del río Cauca, ubicado entre la cordillera Central y la cordillera Occidental. El bosque hace parte de la microcuenca baja del río Roble y se encuentra en la confluencia de este río con el río La Vieja. Al norte limita con la Hacienda La Cascada, El Dobaide y La Floresta, al sur con el Río Roble, al oriente con la Hacienda La Española y al occidente con el río de La Vieja (Agudelo et al. 2001). Se ubica geográficamente a 4º 34'08” N y 75º 51'03” W. La precipitación promedio anual es de 1691 mm/año, con una temperatura promedio de 24º C y una humedad relativa promedio del 76% (Agudelo et al. 2001). Presenta un bosque secundario intervenido y el paisaje esta dominado por terrenos planos y zonas onduladas en las que los suelos están ocupados por cultivos, pastizales para la ganadería extensiva, parches de vegetación dominados por guadua y un bosque natural mixto (Agudelo et al. 2001). El bosque el Ocaso se formó hace 120 años. Se encuentra a 1056 metros de altitud y tiene un área de 65 hectáreas. Aunque hace 10 años no ha sido afectado por intervención y se encuentra en recuperación, rodeado de pastizales y guaduales. La vegetación se caracteriza por la presencia de arrayán ( Myrcia popayanensis ), balso ( Ochroma pyramidale ), cachimbo (Erythrina poeppigiana ), cafetillo ( Lacistema aggregatum ), carbonero (Calliandra pittieri ), cascarillo ( Labenbergia oblongifolia ), caspi o manzanillo (Toxicodendron striatum ) y caucho ( Ficus sp.), entre otros. La altura de los árboles oscila entre 10-15 metros (Agudelo et al. 2001). El bosque Veraguas tiene un área de 40 hectáreas y se ubica a 1047 metros de altitud aproximadamente y se encuentra bajo permanente intervención antrópica. Es un bosque secundario que ha sido plantado.

32 La región de la reserva natural La Montaña del Ocaso posee más de 10 especies de mamíferos terrestres, posee cerca de 100 especies de aves, gran variedad de arañas y artrópodos, mantiene en interacción gran variedad de hongos y microorganismos, presenta gran variedad de peces y se han determinado alrededor de 30 especies de murciélagos, en su mayoría del gremio frugívoro representados por los géneros Artibeus y Carollia y representando al gremio nectarívoro gran número de individuos del género Glossophaga (Cortés-Delgado 2007 y Agudelo et al. 2001).

-Santuario de Flora y Fauna de Otún Quimbaya Se encuentra en la vertiente occidental de la cordillera Central dentro del sistema montañoso que conforma la cuenca del río Otún, la cual abastece de agua a la ciudad de Pereira. El cual se localiza en la vereda la Suiza, en el corregimiento de La Florida, municipio de Pereira, departamento de Risaralda. Se encuentra ubicado geográficamente a 4º45' latitud Norte y 75º 46' longitud Oeste (Cifuentes 2003 y PNNC 2004). La zona presenta un ciclo de precipitación bimodal con un pico de marzo a julio y otro de septiembre a noviembre. La temperatura media es de 26º C. La humedad relativa presenta los valores más altos entre mayo y junio y octubre y diciembre (Aguilar et al. 1994 & PNNC 2004). Presenta una extensión aproximada de 489 ha. entre el rango altitudinal de 1800 y 2200 metros de elevación (Cifuentes 2003 & PNNC 2004). La vegetación del SFFOQ se enmarca en bosque muy húmedo montano bajo (bmh-MB) según el sistema de Holdridge (Aguilar et al. 1994). La cobertura de la cuenca media y alta del río Otún es producto de años de presión antrópica sobre los recursos naturales de la zona y la introducción de especies como estrategia de restauración (p.e., uruapan, roble) que han modificado el paisaje original (Galeano 1994 y Cifuentes 2003). En gran parte del área existe vegetación natural en buen estado de 33 conservación, en donde se encuentran aproximadamente 598 especies pertenecientes a 113 familias. Las familias con mayor número de géneros son Compositae, Orchidiaceae, Rubiaceae y Solanacea. Las familias con mayor número de especies son Solanaceae, Orchidiaceae, Compositae, Melastomataceae y Rubiaceae (Galeano 1994). En la cuenca media del río Otún se han reportado un poco más de 200 especies de aves. Entre éstas existe una de las pocas poblaciones y tal vez la más numerosa de la pava caucana ( Penelope perspicax). Posee numerosos géneros de mariposas y se calculan alrededor de 200 especies. En cuanto a los anfibios, se han registrado 28 especies de ranas y una especie de salamandra ( Bolitoglossa sp.). En el área del Santuario se han encontrado 42 de las 58 especies de mamíferos reportadas para la cuenca del río Otún, entre herbívoros de mediano tamaño, omnívoros como el armadillo común, los marsupiales como la zarigüeya y algunos carnívoros. Se han reportado 26 especies de murciélagos (Alfonso et al. 1994), siendo los frugívoros dispersores de semillas, representados por Sturnira brevicauda , Sturnira ludovici y Carollia brevicauda , los que constituyen el gremio frugívoro predominante seguido de los insectívoros (PNNC 2004).

5.2.2 Metodología

5.2.2.1 Fase preliminar En la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso (RRNMO) se hizo una salida en diciembre del año 2005 para el reconocimiento del lugar y escoger la ubicación de las redes. Se realizó una clave taxonómica artificial con las especies potenciales a ser encontradas en la región. Durante los muestreos en El Ocaso se elaboró una colección de referencia para la exitosa identificación de las especies. Para los muestreos hechos en el Santuario de Flora y Fauna Otún

34 Quimbaya, se realizó una salida en Octubre del 2006 con el objeto de reconocer el lugar y ubicar los sitios para colocar las redes de niebla. Se tomaron las primeras citologías vaginales con la intención de estandarizar la forma de hacerlo. Se ensayaron varias opciones con respecto a la cantidad de solución salina y la forma de manipular el individuo. En el laboratorio también se buscaron posibles tinciones para la muestra y se escogieron los reactivos más prácticos y económicos.

5.2.2.2 Fase de campo En la RRNMO se muestrearon 12 noches durante el mes de marzo, 8 noches en abril y mayo, y 6 noches en el mes de agosto del año 2006. En el SFFOQ se muestrearon 18 noches entre enero y febrero del 2007. En estos muestreos se registró información para posteriormente describir el estado reproductivo. Los registros realizados en marzo, abril y mayo, fueron tomados paralelamente con Natalia Cortés, ya que también hicieron parte de su trabajo de grado, titulado "Relación entre el tipo de hábitat en el borde con la dispersión potencial de semillas hacia áreas abiertas en la reserva natural La Montaña del Ocaso (Quimbaya-Quindío)". Al estar colaborando con los muestreos del trabajo de grado anteriormente mencionado, durante los muestreos de marzo, abril y mayo no se registró la actividad sexual de los machos, el estado abierto o cerrado de la sínfisis púbica de las hembras, y no se realizaron citologías vaginales a hembras en estado de preñez ni durante el muestreo del mes de abril.

5.2.2.2.1 Captura de individuos Se utilizaron 10 redes de niebla de 3x6 metros, colocando 6 de piso, y 4 elevadas (> 4 m) en RNMO y dejando las diez de piso en el SFFOQ. Éstas se revisaron cada hora, desde las 18 00 horas hasta las 06 00 horas del día siguiente. Cada individuo capturado fue colocado en una bolsa de tela, pesado, sexado, y se le tomaron las correspondientes medidas (Kunz 1988)

35 (longitud total, antebrazo, oreja, trago, hoja nasal, pata con uña y sin uña, y envergadura) utilizando un calibrador Spi 2000. Se determinó la especie a la que pertenecía cada individuo capturado utilizando claves taxonómicas (Timm et al. 1998, Fernández et al. 1998, Contreras 2000 y Alberico “no publicada”). A las hembras se les realizó una citología vaginal. Antes de proceder a la liberación se marcaron, colocándoles en el antebrazo derecho un brazalete de aluminio codificado con un número.

5.2.2.2.2 Determinación del estado reproductivo A los machos se les observaron los testículos para saber si se hallaban escrotados o no, para determinar si se encontraban activos sexualmente. Para establecer si las hembras se encontraban en estado de preñez se les palpó el vientre. También se les examinaron y presionaron los pezones para determinar si se encontraban en estado de lactancia o postlactancia y se tocó la sínfisis púbica para saber si habían tenido crías (Kunz 1988).

5.2.2.2.3 Citologías vaginales Para realizar los frotis vaginales, el cuerpo de la hembra se mantuvo dentro de la bolsa de tela y sus patas y su zona genital por fuera. Con una micropipeta marca Socopex (0.1-2 l) se succionaron 2 l de solución salina e inocularon en la vagina de la hembra. Después de tres segundos, con la misma punta de la micropipeta, se succionó la gota de la vagina y se extendió a lo largo de una lámina portaobjetos. La lámina con la muestra se dejó secar a temperatura ambiente y se le agregó una gota de alcohol industrial con una punta de micropipeta distinta para fijar la muestra. Finalmente se dejó secar a temperatura ambiente.

5.2.2.3 Etapa de laboratorio En el Laboratorio de Ecología Funcional de la Pontificia Universidad 36 Javeriana se tiñeron las muestras de las citologías vaginales con la tinción de Gram y se realizó el posterior conteo de las células epidérmicas vaginales. Las láminas se tiñeron con cristal violeta durante un minuto y se lavó con agua el exceso de colorante. Luego, se cubrieron con lugol durante un minuto y se lavó con agua el exceso de éste. Posteriormente, se decoloró con alcohol-acetona durante treinta segundos y se lavó con abundante agua para eliminar el resto de disolvente. Por último, se tiñó con fucsina por un minuto y se lavó con agua para eliminar el colorante de contraste. Las láminas se dejaron secar a temperatura ambiente. Las citologías se observaron en un microscopio de contraste de fases (Nikon Eclipse E400) y se estableció el porcentaje de células por tipo (parabasales, intermedias, superficiales y anucleadas) para determinar la etapa estral. Las células parabasales se identificaron como células redondas de núcleo muy pigmentado. Las células intermedias se identificaron como células redondeadas de citoplasma amplio. Las células superficiales se identificaron como células de forma poligonal con un citoplasma más amplio. Las células características del estro vaginal (células anucleadas) presentan casi el mismo tamaño que las superficiales (Mayor et al . 2003). Se tomaron registros fotográficos de las muestras de las citologías con una cámara Nikon (Digital Sight DS-5M) (Anexo 2).

5.2.2.4 Protocolo Citologías Vaginales Se realizó una pasantía en el Instituto de Ecología A. C. en Xalapa, Veracruz, México, donde se recibió capacitación con la Dra. Carolina Valdespino, sobre la posible forma de tomar las citologías y la técnica de conteo al microscopio. Posteriormente, en la región cafetera, se realizaron unos premuestreos para estandarizar la forma de tomar la muestra, la forma de guardar las láminas y la tinción a utilizar. Se realizó un protocolo para las citologías vaginales en murciélagos; el proceso se describe desde la captura del murciélago hasta la observación al microscopio. 37 5.3 Recolección de la información Los datos fueron consignados en una libreta de campo (Anexo 3). Al realizar los conteos de las células, se guardó la información en una base de datos en Excel para su posterior análisis.

5.4 Análisis de Información -Abundancia

Se realizaron 2 gráficas de abundancia por especie especificando el gremio alimentario, una por región de muestreo. Con el software Estimates versión 6.0b1, se realizó la gráfica de acumulación de especies de los datos observados y con el software Statistica versión 6.0 se ajustó la curva al modelo de dependencia lineal y al modelo de Clench.

-Esfuerzo

Se estableció el esfuerzo de muestreo para cada región. Para calcularlo se utilizaron las siguientes fórmulas:

Rxt Em Nm Donde: Em = Esfuerzo de muestreo R= Número de redes utilizadas t= Horas de mustreo Nm = Noches totales de muestreo

El esfuerzo total para las noches de muestreo de la región de la reserva natural la Montaña del Ocaso fue de 407,5 horas con 10 redes de niebla, lo que resultó en un esfuerzo de muestreo (Em ) de 119.9 red hora/noche. En el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya el esfuerzo de muestreo ( Em ) fue de 110.5 red hora/noche.

38 N Ec Em

Ec = Éxito de captura N= Número total de individuos capturados Em = Esfuerzo de muestreo

Se calcularon índices de riqueza, dominancia, equidad, para describir la estructura de las especies de murciélagos encontradas en la región de la reserva natural la Montaña del Ocaso y en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya. Para determinar si en el ensamblaje se presentó dominancia por parte de una o varias especies se utilizó el índice de dominancia de Simpson. Este índice presenta una baja sensibilidad al tamaño de la muestra, es fácil de calcular y ha sido ampliamente utilizado (Moreno 2001):

Donde, pi= Abundancia proporcional de la especie i, es decir, el número de individuos de la especie i dividido por el número total de individuos de la muestra.

Para expresar la uniformidad y equidad de las especies se utilizó el índice de Shannon, ya que presenta una marcada sensibilidad a los cambios en las especies raras y es ampliamente utilizado (Magurran 1988 y Moreno 2001):

Donde, pi= Probabilidad de que un individuo capturado pertenezca a la especie i.

39 s= Número de especies en la muestra.

Para estimar la riqueza de especies en cada bosque, se utilizó el índice de riqueza especifica alfa ( α) de Fisher, el cual se basa en el modelo de log serial (Moreno 2001). Está correlacionado positivamente con la riqueza de especies, es independiente del tamaño de la muestra, es sensible a los cambios de abundancia de las especies intermedias, tiene buena sensibilidad para discriminar pequeñas diferencias y es aplicable a datos que no se ajusten al modelo log serial (Magurran 1988 y Segnini 1992):

Donde, S= Número de especies N= Número total de individuos.

El cálculo de los índices fue realizado con el software PAST, Versión 1.68.

Posteriormente, los datos de las proporciones de sexos fueron agrupados por especie, en cada lugar de muestreo. Con el propósito de comparar las proporciones se utilizaron los odds ratios o radios de probabilidad (Montgomery et al. 1996):

Donde, P= probabilidad de la ocurrencia de cada sexo, en un lugar de muestreo determinado. Al realizar la comparación de radios de probabilidad es posible

40 establecer la probabilidad de encontrar cada sexo de cada especie en cada lugar de muestreo. Al comparar los radios de probabilidad cualquier valor diferente de uno establece una diferencia en la probabilidad, mientras que el valor de uno significa que no existen diferencias Los datos del número de hembras y machos colectados, el estado reproductivo en el que se encontraron machos y hembras y la etapa estral en la que se encontraron las hembras, se colectaron en una base de datos en Excel. De éstos datos se realizaron gráficas, las cuales se mostrarán y explicarán a continuación.

6 RESULTADOS Debido a la naturaleza descriptiva de este trabajo, en los resultados mostrados a continuación se hace un estudio descriptivo de los datos sin compararlos estadísticamente, ya que se realizaron en lugares, de condiciones ambientales, y días de muestreo diferentes.

6.1 Estructura y composición -Región de la reserva La Montaña del Ocaso Se capturaron 274 individuos de la familia Phyllostomidae de seis subfamilias y 22 especies, y 2 individuos de la familia Emballonuridae de la especie Saccopteryx bilineata, para un total de 23 especies . La subfamilia más abundante fue Stenodermatinae con 8 especies y 162 individuos. La especie más abundante fue Artibeus lituratus , representando un 21.7% de los individuos, seguida por Artibeus phaeotis y Carollia perspicillata con un 17.8%, después Artibeus jamaicensis con un 14,1% y Glossophaga soricinia con 11.6% (Tabla 3 y Figura 1). El orden de las abundancias muestra que Artibeus lituratus presentó la mayor abundancia (60 individuos), seguida por Carollia perspicillata y Artibeus phaeotis , con 49 individuos cada una, luego Artibeus jamaicensis y 41 Glossophaga soricina con 39 y 32 individuos respectivamente. Las otras especies presentaron muy pocos individuos (Figura 1).

Tabla 3. Numero de individuos capturados por especie en la región de la reserva natutral La Montaña del Ocaso, Quindío. M=machos y H=hembras. Familia Subfamilia Especies M H Total Phyllostomidae Glossophaginae Glossophaga s p. 1 2 3 Glossophaga soricina 17 15 32 Glossophaga longirostris 4 4 8 Choeroniscus godmani 3 0 3 Carollinae Carollia sp . 1 1 2 Carollia brevicauda 4 2 6 Carollia perspicillata 20 29 49 Carollia castanea 0 1 1 Stenodermatinae Artibeus sp. 4 0 4 Artibeus jamaicensis 25 14 39 Artibeus phaeotis 21 28 49 Artibeus lituratus 17 43 60 Artibeus glaucus 0 2 2 Vampyressa pusilla 1 3 4 Platyrrhinus helleri 1 1 2 Chiroderma salvini 1 0 1 Chiroderma trinitatum 1 0 1 Sturnirinae Sturnira lilium 0 1 1 Sturnira luisi 1 1 2 Phyllostominae Phyllostomus discolor 1 0 1 Mimon crenulatum 0 2 2 Desmodontinae Desmodus rotundus 2 0 2 Emballonuridae Emballonurinae Saccopteryx bilineata 1 1 2 126 150 276

Se presentó una dominancia del gremio de los frugívoros de un 81.20%, seguido por un 16,6 % de los nectarívoros (Glossophaga soricina, Glossophaga longirostris, Choeroniscus godmani ) y sólo 4 individuos insectívoros de las especies Mimon crenulatum y Saccopteryx bilineata representando el 1,5% y dos hematófagos de la especie Desmodus rotundus (0,7%) (Figura 1). La curva de acumulación de especies mostró que para 34 noches de muestreo se identificaron 23 especies de murciélagos en la región de la 42 reserva La Montaña del Ocaso. De acuerdo con los ajustes de los datos observados al modelo de dependencia lineal y el modelo de Clench en el programa Statistica, se mostró que de acuerdo al modelo de dependencia lineal con un R casi del 100% (R=0,988), y un intervalo de confianza del 95% se alcanzó la totalidad de las especies esperadas. Por otro lado, de acuerdo al modelo de Clench, con un R casi del 100% (R=0,995) de acuerdo con un intervalo de confianza de 95% se alcanzó a muestrear un 80% de las especies esperadas, ya que según este modelo se esperarían 6 especies más de las encontradas (Figura 2).

Figura 1. Distribución de las abundancias de especies encontradas en la región de la Reserva Natural la Montaña del Ocaso. (A. li= Artibeus lituratus , A. ph= Artibeus phaeotis , C. pe= Carollia perspicillata , A. ja= Artibeus jamaicensis , G. so= Glossophaga soricina , G. lo= Glossophaga longirostris , C. br= Carollia brevicauda , A. sp= Artibeus sp., V. pu= Vampyressa pusilla , G. sp.= Glossophaga sp. C. go= Choeroniscus godmani , A. gl= Artibeus glaucus , P.he= Platyrrhinus helleri , S. bi= Saccopteryx bilineata , S. lu= Sturnira luisi , M. cr= Mimon crenulatum , D. ro= Desmodus rotundus , C. ca= Carollia castanea , C. sa= Chiroderma salvini , C. tr= Chiroderma trinitatum , S. li= Sturnira lilium , P.di= Phyllostomus discolor ).

43 25

20

15 Obs Dep lineal 10 Clench

No. de especies 5

0 0 10 20 30 40 Noches de muestreo

Figura 2. Curva de acumulación de especies para los murciélagos de la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso, ajustada al modelo de Dependencia lineal y al modelo de Clench. Obs=Número de especies encontrado para cada noche de muestreo.

-Santuario de Flora y Fauna Otún-Quimbaya Se capturaron 67 individuos pertenecientes a 18 especies. Los ejemplares pertenecieron a las familias Phyllostomidae y Vespertilionidae. De la primera familia se presentaron 4 subfamilias y 15 especies. De la familia Vespertilionidae se encontraron dos subfamilias y 3 especies. Las subfamilias con mayor número de especies fueron la Stenodermatinae y la Sturnirinae con seis especies cada una. La especie más abundante y dominante con un 31.4% ( Sturnira ludovici ) pertenece a esta última subfamilia. Seguida a ésta se encontraron Artibeus lituratus y Carollia brevicauda , que estuvieron representados con un 13.4% y 12%, respectivamente. De las especies restantes sólo fueron capturados de 1 a 4 individuos (Tabla 4). La mayor abundancia se encontró en la especie Sturnira ludovici (21 individuos), ésta fue seguida por las especies Artibeus lituratus y Carollia brevicauda . Se presentó una dominancia del gremio de los frugívoros 44 representado por un 86,6%, siendo el segundo grupo mas abundante el insectívoro (Eptesicus furinalis, Eptesicus brasilensis y Myotis keaysi ) con un 10,4% y solo dos individuos nectarívoros de la especie Glossophaga soricina (3%) (Figura 3).

Tabla 4. Numero de individuos capturados por especie en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya.M= machos y H= hembras.

Familia Subfamilia Especies M H Total Phyllostomidae Glossophaginae Glossophaga soricina 1 1 2 Carollinae Carollia brevicauda 6 2 8 Carollia perspicillata 2 1 3 Stenodermatinae Platyrrhinus sp. 0 1 1 Artibeus cinereus 3 1 4 Artibeus lituratus 1 8 9 Artibeus jamaicensis 0 1 1 Vampyressa pusilla 0 1 1 Uroderma magnirostrum 1 1 2 Sturnirinae Sturnira sp. 2 1 3 Sturnira ludovici 7 14 21 Sturnira bogotensis 1 0 1 Sturnira bidens 1 0 1 Sturnira mordax 0 2 2 Sturnira erythromos 0 1 1 Vespertilionidae Vespertilioninae Eptesicus brasilensis 1 2 3 Eptesicus furinalis 1 0 1 Myotinae Myotis keaysi 2 1 3 29 38 67

45

Figura 3. Distribución de las abundancias de las especies encontradas en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya, Risaralda. ( S. lu= Sturnira ludovici , A. li= Artibeus lituratus , C. br=Carollia brevicauda , A. ci=Artibeus cinereus , E. br= Eptesicus brasilensis , M. ke = Myotis keaysi, S. sp.= Sturnira sp., C. pe= Carollia perspicillata , S. mo= Sturnira mordax , G. so=Glossophaga soricina , U. ma= Uroderma magnirostrum , E. fu= Eptesicus furinalis , S. bo= Sturnira bogotensis , S. bi = Sturnira bidens , S. er= Sturnira erythromos , P. sp.= Platyrrhinus sp., A. ja=Artibeus jamaicensis , V. pu= Vampyressa pusilla ).

25

20

15 Sobs Dep lineal 10 Clench 5 Númeroespecies de 0 0 5 10 15 20 Noches de muestreo

Figura 4. Curva de acumulación de especies de murciélagos encontradas en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya, ajustada a los modelos de Dependencia lineal y el modelo de Clench. Obs=Número de especies encontrado para cada noche de muestreo. 46 La curva de acumulación de especies mostró que para 18 noches de muestreo se identificaron 18 especies de murciélagos en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya. De acuerdo a los ajustes de los datos observados al modelo de dependencia lineal y el modelo de Clench en el programa Statistica, se mostró que de acuerdo al modelo de dependencia lineal con un R casi del 100% (R=0,999), y un intervalo de confianza del 95% se alcanzó el 86% de las especies esperadas, estimando tres especies más de las encontradas. Por otro lado, de acuerdo al modelo de Clench, con un R casi del 100% (R=0,999) de acuerdo con un intervalo de confianza de 95% se alcanzó a muestrear un 58% de las especies esperadas, estimando 13 especies mas de las encontradas (Figura 4). -Estructura De acuerdo al índice de riqueza alfa de Fisher, se encontró una mayor riqueza en el SFFOQ con un 8,071 mientras que en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso fue de 5.965. El índice de dominancia de Simpson no reflejó diferencias entre los dos lugares, ya que los dos presentaron λ= 0,883 y λ= 0.853 respectivamente. Para expresar la equidad se utilizó el índice de Shannon donde se encontró en H`=2,229 en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso y H´= 2,365 en el SFFOQ.

6.2 Éxito de captura El éxito de captura para la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso fue de 2,30 ind/ Em, mientras que en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya hubo un éxito de captura de 0.606 ind/ Em .

6.3 Proporción de sexos En las 5 especies donde se capturaron numerosos individuos en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso es más evidente la

47 proporción de sexos. En general se encontraron proporciones similares y en algunos casos mayor número de hembras como en Carollia perspicillata (proporción de machos contra hembras 0,7:1), Artibeus phaeotis (0,75:1) , Artibeus lituratus (0,39:1). La especie Artibeus jamaicensis muestra un mayor número de machos (1:0,56). La especie de Glossophaga soricinia presenta una proporción casi similar entre machos y hembras (1:0,88). Si bien de 13 especies se colectaron muy pocos individuos, hay mayor número de especies donde las hembras se presentan en mayor proporción de machos (10 especies) y hay 8 especies donde los machos se presentan en mayor número que las hembras. En 5 especies se presentó una proporción de sexos de 1:1 (Figura 5). Aunque cada especie tuvo muestras de diferente tamaño, en general de la proporción de sexos de toda la muestra en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso fue de 0,84:1 (Figura 5). En general, las especies encontradas con varios individuos en el SFFOQ mostraron un mayor número de hembras que de machos, exceptuando Carollia brevicauda (proporción de machos contra hembras 1:0,33) y Artibeus cinereus (1:0,33). Sturnira ludovici presentó una proporción de 0,5:1 y Artibeus lituratus presentó una proporción de 0,12:1. Aunque se presentaron 7 especies con sólo un individuo, en general se encontraron 6 especies con mayor número de hembras, mayor número de machos en 6 especies y 2 especies presentaron una proporción 1:1(Figura 6).

48 60

40

20 No. de individuos

0 A. li A . ph C. p A. ja G. so G. lo C. br A. sp. V. pu G. sp. C. go P . hel S. bi S. lu C. sp. D. ro A. gl M . cr C. ca S. li C. sa C. tr P. di Especies

Figura 5. Proporción sexos región de la reserva natural La Montaña del Ocaso. De color blanco se encuentran las hembras y de color negro los machos. Las especies se encuentran abreviadas como se especificó en la Figura 1.

60

40

20 N o. de individuos

0 S. lu A . li C. br A . ci E. br M . ke S. sp. C. pe S. mo G. so U. ma E. fu S. bo S. bi S. er P . sp. A. ja V. pu Especies

Figura 6. Proporción sexos Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya. De color blanco se encuentran las hembras y de color negro los machos. Las especies se encuentran abreviadas como se especificó en la Figura 3.

49 Aunque cada especie tuvo muestras de diferente tamaño, en general de la proporción de sexos entre machos y hembras de toda la muestra en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya fue de aproximadamente 0,8:1.

6.3.1 Odds ratio 6.3.1.1 Odds ratio de la región de la reserva La Montaña del Ocaso. Se calcularon los radios de probabilidad de encontrar hembras y machos de diferentes especies respecto a las especies más abundantes. La posibilidad de encontrar hembras de Carollia perspicillata, Artibeus jamaicensis, Artibeus phaeotis, Artibeus lituratus y Glossophaga soricina en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso es de 16 a 60 veces mayor que encontrarlas de 6 especies ( Carollia castanea, Platyrrhinus helleri, Saccopteryx bilineata, Sturnira lilium, Sturnira luisi y Carollia sp.). Y entre 2 y 29 veces mayor que encontrar hembras de 6 especies ( Carollia brevicauda, Glossophaga longirostris, Vampyressa pusilla, Glossophaga sp ., Artibeus glaucus y Mimon crenulatum ). De seis de las especies no se encontraron hembras para establecer la probabilidad ( Choeroniscus godmani, Chiroderma salvini, Chiroderma trinitatum , Phyllostomus discolor, Desmodus rotundus y Artibeus sp.) (Anexo 4). La posibilidad de encontrar machos de Carollia perspicillata, Artibeus jamaicensis, Artibeus phaeotis, Artibeus lituratus y Glossophaga soricina es de 20 a 60 veces mayor que encontrar machos de 9 especies ( Platyrrhinus helleri, Glossophaga sp., Sturnira luisi, Chiroderma salvini, Vampyressa pusilla, Saccopteryx. bilineata, Chiroderma trinitatum, Phyllostomus discolor y Carollia sp .) y entre 2 y 12 veces mayor que encontrar machos de 5 especies ( Carollia brevicauda, Glossophaga longirostris, Choeroniscus godmani, Desmodus rotundus y Artibeus sp.). De 4 de las especies no se encontraron machos para establecer la probabilidad (Carollia castaneda, Sturnira lilium , Artibeus glaucus y Mimon crenulatum ) (Anexo 4).

50 Carollia perpicillata

4,000

3,000

2,000

Odds ratio 1,000

0,000 C. pe A ja A. ph A. li G. so Especies

Figura 7. Radios de probabilidad de encontrar machos y hembras respecto a Carollia perspicillata . Hembras se muestran de color blanco y los machos de color negro. Especies abreviadas igual que la Figura 1.

La probabilidad de encontrar hembras de Carollia perspicillata es 1,32 y 1.20 veces mayor que encontrar hembras de Artibeus jamaicensis y Glossophaga soricina respectivamente, y casi igual probabilidad de encontrarlas de Artibeus phaeotis . Mientras que es 40% más probable encontrar hembras de A. lituratus que de C. perspicillata. La posibilidad de encontrar machos de Carollia perspicillata es 20% mayor que encontrar de Artibeus lituratus y Glossophaga soricina . Hay casi igual probabilidad de encontrar machos de Artibeus phaeotis . Hay un 30% de probabilidad más pequeña de encontrar machos Carollia perspicillata que de Artibeus jamaicensis (Figura 7).

51 Artibeus jamaicensis

4,000

3,000

2,000 Odds ratio 1,000

0,000 C. pe A ja A. ph A. li G. so Especies

Figura 8. Radios de probabilidad de encontrar machos y hembras respecto a Artibeus jamaicensis . Hembras se muestran de color blanco y los machos de color negro. Especies abreviadas igual que la Figura 1.

La probabilidad de encontrar hembras de Artibeus jamaicensis es casi igual a la de Glossophaga soricina. Mientras que es 80% más probable encontrar hembras de Artibeus lituratus y 60% más probable encontrar hembras de Carollia perspicillata y Artibeus phaeotis que de Artibeus jamaicensis. La posibilidad de encontrar machos de Artibeus jamaicensis es 60% mayor que encontrar de Artibeus lituratus y Glossophaga soricina . Igualmente es 30% y 20% más probable encontrar machos de Artibeus jamaicensis que de Carollia perspicillata y de Artibeus phaeotis respectivamente. (Figura 8). La probabilidad de encontrar hembras de Artibeus phaeotis es 1,23 y 1vez mayor que encontrarlas de Artibeus jamaicensis y Glossophaga soricina respectivamente y es casi igual a la probabilidad de encontrar hembras de Carollia perspicillata .

52 Artibeus phaeotis

4,000

3,000

2,000

Odds ratio 1,000

0,000 C. pe A ja A. ph A. li G. so Especies

Figura 9. Radios de probabilidad de encontrar machos y hembras respecto a Artibeus phaeotis . Hembras se muestran de color blanco y los machos de color negro. Especies abreviadas igual que la Figura 1.

La probabilidad de encontrar hembras de Artibeus phaeotis es 40% menor que encontrarlas de Artibeus lituratus. La probabilidad de encontrar machos de Artibeus phaeotis es 30% mayor que encontrarlos de Artibeus lituratus y Glossophaga soricina y es casi igual que encontrar machos de Carollia perspicillata . Mientras que hay una probabilidad 20% menor de encontrar machos de Artibeus phaeotis que encontrar machos de Artibeus jamaicensis (Figura 9). La probabilidad de encontrar hembras de Artibeus lituratus es 3, 2,6 veces, 75%, 70% mayor que encontrarlas de Artibeus jamaicensis, Glossophaga soricina, Artibeus phaeotis y Carollia perspicillata respectivamente.

53 Artibeus lituratus

4,000

3,000

2,000

Odds ratio 1,000

0,000 C. pe A ja A. ph A. li G. so Especies

Figura 10. Radios de probabilidad de encontrar machos y hembras respecto a Artibeus lituratus . Hembras se muestran de color blanco y los machos de color negro. Especies abreviadas igual que la Figura 1.

Glossophaga soricina

4,000

3,000

2,000

O dds1,000 ratio

0,000 C. pe A ja A. ph A. li G. so Especies

Figura 11. Radios de probabilidad de encontrar machos y hembras respecto a Glossophaga soricina . Hembras se muestran de color blanco y los machos de color negro. Especies abreviadas igual que la Figura 1. 54 La probabilidad de encontrar machos de Artibeus lituratus es igual que encontrarlos de Glossophaga soricina, mientras que hay una probabilidad 40% mayor de encontrar machos de Artibeus jamaicensis y 20% mayor de encontrar Carollia perspicillata y Artibeus phaeotis que encontrar machos de Artibeus lituratus (Figura 10). La probabilidad de encontrar hembras de Glossophaga soricina es casi igual a la de Artibeus jamaicensis. Mientras que es 70%, 60% y 50% mas probable encontrar hembras de Artibeus lituratus, Artibeus phaeotis y Carollia perspicillata. La posibilidad de encontrar machos de Glossophaga soricina igual a la de encontrar Artibeus lituratus. E s 40% 30% y 20% más probable encontrar machos de Artibeus jamaicensis, Artibeus phaeotis y Carollia perspicillata que encontrar machos de Glossophaga soricina . (Figura 11).

6.3.1.2 Odds ratio en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya

Sturnira ludovici

9,000

6,000

Odds ratio 3,000

0,000 S. lu C. br A. li Especies

Figura 12. Radios de probabilidad de encontrar machos y hembras respecto a Sturnira ludovici . Hembras se muestran de color blanco y los machos de color negro. Especies abreviadas igual que la Figura 3.

55 La posibilidad de encontrar hembras de Sturnira ludovici, Carollia brevicauda y Artibeus lituratus en el Santuario de Fauna y Flora Otún- Quimbaya es entre 1y 22 veces mayor que encontrar hembras de 10 especies (Myotis keaysi, Sturnira sp., Sturnira erythromos, Glossophaga soricina, Carollia perspicillata, Platyrrhinus sp., Artibeus cinereus, Artibeus jamaicensis, Vampyressa pusilla y Uroderma magnirostrum ). La probabilidad de encontrar hembras de S. ludovici es 10 veces mayor que encontrar hembras de 2 especies ( Eptesicus brasilensis, Sturnira mordax ). De 3 de las especies no se encontraron hembras para establecer la probabilidad (Eptesicus furinalis, Sturnira bogotensis y Sturnira bidens ) (Figura 12 y Anexo 5). La probabilidad de encontrar hembras de Sturnira ludovici es 1 vez mayor que encontrar hembras de Artibeus lituratus y 9 veces mayor que encontrarlas de la especie Carollia brevicauda (Figura 12). La posibilidad de encontrar machos de Sturnira ludovici es 8 veces mayor que encontrar machos de 7 especies ( Eptesicus brasilensis, Eptesicus furinalis, Sturnira bogotensis, Sturnira bidens, Glossophaga soricina, Artibeus lituratus y Uroderma magnirostrum) y entre 2 a 3 veces mayor que encontrar machos de 4 especies (Myotis keaysi, Sturnira sp., Carollia perspicillata y Artibeus cinereus ).De 5 de las especies no se encontraron machos para establecer la probabilidad ( Sturnira mordax, Sturnira erythromos, Platyrrhinus sp., Artibeus jamaicensis y Vampyressa pusilla ) (Figura 12 y Anexo 5). La probabilidad de encontrar machos de Carollia brevicauda es 22% mayor que encontrarlos de Sturnira ludovici . Hay igual probabilidad a encontrar hembras de 2 especies ( Eptesicus brasilensis, Sturnira mordax ) que de Carollia brevicauda (Anexo 5). La probabilidad de encontrar hembras de Sturnira ludovici es 90% mayor que de Carollia brevicauda , mientras que hay un 80% de probabilidad mayor de encontrar una hembra de Artibeus lituratus que de Carollia brevicauda.

56 La probabilidad de encontrar machos de Carollia brevicauda es 5 veces mayor que encontrarlos en 7 especies ( Eptesicus brasilensis, Eptesicus furinalis, Sturnira bogotensis, Sturnira bidens, Glossophaga soricina, Artibeus lituratus y Uroderma magnirostrum) y de 1 a 2 veces mayor que encontrar machos en 4 especies ( Myotis keaysi, Sturnira sp., Carollia perspicillata y Artibeus cinereus ). Mientras que hay un 15% de probabilidad mayor de encontrar machos de Sturnira ludovici que de Carollia brevicauda (Figura 13 y Anexo 5). La probabilidad de encontrar hembras de Artibeus lituratus y de 48 veces mayor que encontrar hembras de 3 especies ( Eptesicus brasilensis, Sturnira mordax y Carollia brevicauda ) (Figura 14 y Anexo 5) Mientras que es 55% más probable encontrar hembras de Sturnira ludovici que de Artibeus lituratus (Figura 14). La posibilidad de encontrar machos de Artibeus lituratus igual a la de 6 especies ( Eptesicus brasilensis, Eptesicus furinalis, Sturnira bogotensis, Sturnira bidens, Glossophaga soricina, y Uroderma magnirostrum. Mientras es 90% más probable encontrar machos de 6 especies (Myotis keaysi, Sturnira sp., Carollia perspicillata, Artibeus cinereus, Sturnira ludovici y Carollia brevicauda) que de Artibeus lituratus (Figura 14).

57 Carollia brevicauda

9,000

6,000

Odds ratio 3,000

0,000 S. lu C. br A. li Especies

Figura 13. Radios de probabilidad de encontrar machos y hembras respecto a Carollia brevicauda . Hembras se muestran de color blanco y los machos de color negro. Especies abreviadas igual que la Figura 3.

Artibeus lituratus

9,000

6,000

Odds ratio 3,000

0,000 S. lu C. br A. li Especies

Figura 14. Radios de probabilidad de encontrar machos y hembras respecto a Artibeus lituratus . Hembras se muestran de color blanco y los machos de color negro. Especies abreviadas igual que la Figura 3.

58 6.4 Estado Reproductivo de las hembras Durante los meses marzo, abril, mayo y agosto del 2006 en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso y en enero del 2007 en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya, el mayor número de hembras preñadas y lactantes se encontró hacia los meses de marzo y abril y el mayor número de hembras postlactantes en los meses de mayo, agosto y enero. El número de hembras en un estado sexualmente inactivo se mantuvo dominante en todos los muestreos (Figura 15).

80

60

40

20 No. de hembras de No.

0 Marzo Abril Mayo Agosto Enero Meses de muestreo

Inactivas Preñadas Lactantes Postlactantes

Figura 15. Estado reproductivo de hembras de murciélago a lo largo de todos los muestreos.

Carollia perspicillata , reflejó gran cantidad de hembras en estado inactivo a lo largo de todos los muestreos. El mayor número de preñadas se encontró en mayo y agosto. El mayor porcentaje de hembras lactantes y postlactantes de ésta especie se encontró en agosto (Figura 16). Artibeus lituratus presentó el mayor numero de hembras preñadas en abril, el mayor número de lactantes en agosto y el mayor número de postlactantes en mayo y enero. En general fue muy variable a lo largo de los 5 muestreos (Figura 17).

59

100

80

60

40

20 No. de hembras

0 Marzo Abril Mayo Agosto Enero

Meses de muestreo Figura 16. Estado reproductivo de Carollia perspicillata a lo largo de todos los muestreos . Inactivas Preñadas Lactantes Postlactantes

Figura 16. Estado reproductivo de Carollia perspicillata a lo largo de todos los muestreos.

70 60 50

40 30 20

No. dehembras 10 0 Marzo Abril Mayo Agosto Enero

Meses de muestreo

Inactivas Preñadas Lactantes Postlactantes

Figura 17. Estado reproductivo de Artibeus lituratus a lo largo de todos los muestreos .

60 La mayoría de hembras muestreadas en marzo (figura 18a.), se encontraban en estado inactivo sexualmente. Carollia perspicillata presentó un 20% de sus hembras en estado de preñez, Artibeus phaeotis un 45% de hembras preñadas y Artibeus lituratus un 25%. Artibeus jamaicensis y Glossophaga soricinia presentaron hembras lactantes en un 40% y 30% respectivamente. En todas las hembras sólo se presentaron dos en estado postlactante. Durante el muestreo realizado en el mes de abril (figura 18b.) se encontraron dos especies con varios individuos, Artibeus jamaicensis presento un 70% de hembras preñadas y 30% de lactantes, Artibeus lituratus un 50% de hembras preñadas, 25% de hembras lactantes y el otro 25% de hembras inactivas. Las otras 6 especies muestreadas únicamente presentaron uno o dos individuos, sin embargo estás evidenciaron un estado inactivo sexualmente. El muestreo de mayo (figura 18c.) fue de pocos individuos. De acuerdo con las hembras muestreadas, de 9 especies encontradas, solamente tres presentaron estado de preñez y una hembra por especie. No se encontró ninguna en estado de lactancia, pero se hallaron tres en estado de postlactancia. Durante el mes de agosto (figura 18d.) se observaron numerosas hembras en estado postlactante y algunas lactantes. En la especie de Artibeus phaeotis se presentó un 40%, en Artibeus lituratus un 20% y en Carollia perspicillata un 40% en estado postlactante. De nueve especies, 3 presentan preñez durante el muestreo en agosto y el mayor número se encuentra en Artibeus lituratus (3 hembras, 60% de las colectadas de su especie).

61 a. b.

25 25 20 20 15 15 10 10

No.de Hembras 5 5 0 C. pe C. ca A. ja A. ph A. li G. so G. lo V. pu P. he S. bi 0 C. pe A. ja A. li A. ph V. pu G. so G. lo S. li

c. d.

25 25

20 20

15 15

10 10 No.Hembras de

5 5

0 C. pe C. br A. ja A. li A. ph G. sp. G. so G. lo S. lu 0 A.ph A. li A. gl A.ja C. sp. C.pe V. pu G. sp. M.cr e.

25

20

15

10 No. De hembras De No. 5

0 E. br E. fu M . ke S. sp. S. lu S. bo S. bi S. mo S. er G. so C. br C. pe P . sp. A. ci A. li A . ja V. pu U. ma Especies

Figura 18. Estado reproductivo de hembras en marzo(a), abril (b), mayo(c), agosto (d) del año 2006 en la region de la reserva natural La Montaña del Ocaso y enero(e) del año 2007en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya.

62 En enero, en el santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya, a diferencia de los meses antes descritos se evidencia una ausencia total de hembras lactantes. También se ve una disminución de hembras preñadas y predomina el estado de inactividad. Sólo se encontraron dos hembras con preñez incipiente de las especies Sturnira ludovici y Artibeus lituratus (Figura 18 e) .

6.4.1 Preñez A partir de la palpación de la sínfisis púbica se estableció si ya habían tenido crías (sínfisis abierta) o no (sínfisis cerrada) (Figuras 19 y 20). En las hembras encontradas en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso la mayoría presentaba la sínfisis púbica abierta; sin embargo, el 15% de la especie Artibeus phaeotis , el 10% de C. perspicillata y la única hembra muestreada de Artibeus jamaicensis se encontraron con la sínfisis púbica cerrada (Figura 19).

15

10

5 No. de hembras

0 A. ph A.li A.gl A.ja C. sp. C. pe V. pu G. sp. M.cre Especies

Figura 19. Maternidad de hembras encontradas en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso. En color blanco el las hembras que han tenido crías y en color negro las hembras que aún no han tenido crías. Abreviatura de las especies igual que Figura 1.

63 15

10

Individuos 5

0 E. br E. fu M. ke S. sp. S. lu S. bo S. bi S. mo S. er G. so C. br C. pe P. sp. A. ci A. li A. ja V. pu U. ma Especies

Figura 20. Maternidad de hembras encontradas en el Santuario de Fauna y Flora Otún- Quimbaya. Se presenta color blanco las que ya han tenido crías y de negro las que no. Abreviaturas de las especies igual que Figura 3.

En el Santuario de Fauna y Flora Otún Quimbaya se encontró dominancia de hembras que ya han tenido cría. De las especies con mayor número de individuos capturados el 64% y el 100% de las hembras de Sturnira ludovici y Artibeus lituratus respectivamente, se encontraron con la sínfisis pubica abierta. De las 13 especies restantes con sólo uno o dos individuos, se encontró un 56% de hembras con la sínfisis abierta. Aunque fueron pocas hembras del gremio insectívoro, las encontradas presentaron la sínfisis púbica cerrada (Figura 20).

6.5 Estado reproductivo de los machos En agosto, en su mayoría se encontraron machos maduros sexualmente. En los individuos del género Artibeus no identificados hasta especie se encontró un 75%, en la especie Artibeus phaeotis se encontró un 47% y en Artibeus lituratus un 40% de machos sexualmente activos. Los machos maduros sexualmente pero inactivos al momento del muestreo son

64 el segundo estado mas común, como se presentó en los individuos no identificados hasta especie del género Artibeus (25%) y de la especie Artibeus phaeotis (20%). En las especies Artibeus lituratus y Carollia perspicillata, este estado fue el mas común, con un porcentaje de 60% y 75%, respectivamente. No se encontró ningún patrón que siguieran entre gremios (Figura 21). Durante el mes de enero la proporción de los estados de actividad sexual de los machos estuvieron similares. En las especies Carollia brevicauda y Artibeus cinereus no se encontraron machos sexualmente activos y se halló un mayor número de machos con testículos inguinales (maduros pero inactivos), 60% las dos especies. La especie Sturnira ludovici presentó un 43% de machos sexualmente activos, y un 28% de machos inactivos pero maduros y 28% de machos inmaduros sexualmente. Las 10 especies restantes con sólo uno o dos individuos, presentaron los tres estados sin seguir ningún patrón. Aunque únicamente fueron 4 individuos del gremio insectívoro, éstos no presentaron machos en estado maduro pero inactivo sexualmente (Figura 22).

15

10

Individuos 5

0 A. sp. A. li A. ph C. pe C. br V. pu G. sp. G. so Especies

Figura 21. Estado reproductivo de machos en el mes de agosto del 2006 en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso. Los machos sexualmente activos se encuentran de color negro (testículos escrotados), los inactivos se encuentran en blanco (testículos inguinales) y los inmaduros sexualmente se encuentran a rayas diagonales (testículos impalpables). Las abreviaturas de las especies se encuentran igual que figura 1. 65 15

10 Individuos 5

0 E. br E. fu M. ke S. sp. S. lu S. bo S. bi S. mo S. er G. so C. br C. pe P. sp. A. ci A. li A. ja V. pu U. ma Especies

Figura 22. Estado reproductivo de machos en el mes de enero del 2007 en el Santuario de Fauna y Flora de Otún-Quimbaya. Los machos sexualmente activos se encuentran de color negro (testículos escrotados), los inactivos se encuentran en blanco (testículos inguinales) y los inmaduros sexualmente se encuentran a rayas diagonales (testículos impalpables). La abreviatura de las especies es igual a la Figura 3.

6.6 Citologías vaginales y etapa estral Al realizar los conteos de los cuatro tipos celulares característicos de cada etapa estral, se establecieron porcentajes. A continuación se expresarán los datos de las etapas estrales del la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso. En su mayoría, las hembras capturadas en marzo se encontraban con mayor número de células superficiales, intermedias y parabasales y muy pocas anucleadas. Se encontraron hembras en tres etapas: anestro, proestro y estro. En las hembras de la especie Carollia perspicillata se encontraron 4 hembras en anestro y 4 en estro. Una de las dos hembras de Artibeus jamaicensis se encontró en proestro y la otra en estro. Las hembras de Artibeus phaeotis se encontraron en estro.

66

100

80

60

40 No. de cèlulas

20 67

0 A. lit A. lit A. lit A. lit A. ja A. ja S. bil C. pe C. pe C. pe C. pe C. pe C. pe C. pe C. pe P. hel A. ph A. ph A. ph G . so G . so G . so G . so G . so G. lon C. cas (P)A. lit (P)A. lit (L) G . so (L) G . so Especies

Figura 23. Etapa estral de las hembras encontradas en el mes de marzo del 2006 en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso. Se encontró el porcentaje de cada tipo celular. (Pr)= Preñada, (L)= Lactante y (P)=Postlactante. Las abreviaturas de las especies se presentan igual que en Figura 1.

Las de Artibeus lituratus se encontraron en estado de proestro y estro. En general las hembras de gremio nectarívoro se encontraron en estado de proestro, menos 4 hembras, entre estas dos lactantes que se hallaron en estado de anestro. La única hembra del gremio insectívoro se encontró en estado de estro (Figura 23). No se tienen datos de citologías de abril, ya que en este mes no se realizó esta técnica durante la salida de campo.

100

80

60

40 No de células 20

0 C. br C. pe C. pe C. pe C. pe G. so G. so G. sp. (P)A. li Especies

Figura 24. Etapa estral de las hembras encontradas en el mes de mayo del 2006 en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso. (Pr)= Preñada, (L)= Lactante y (P)=Postlactante. Las abreviaturas de las especies se presentan igual que en figura 1.

En las pocas citologías tomadas en mayo, se evidencia mayor número de células parabasales e intermedias, reflejando su etapa de anestro y proestro. En la especie Carollia perspicillata se encontraron dos hembras en estado estral, una en proestro y una en anestro. La hembra postlactante de

68

100

80

60

40 No. de células

69 20

0 A. li A. gl A. ja C . pe C . pe A. ph A. ph A. ph A. ph A. ph A. ph (L)A. li (L)A. li (P)A. li (P)A. li (Pr)A. li (P)A. gl (P)C . pe (P)C . pe (P)C . pe (L)A. ph (P)A. ph (P)A. ph (P)A. ph (P)A. ph (P)C. sp. (Pr)C . pe Especies

Figura 25. Etapa estral de las hembras encontradas en el mes de agosto del 2006 en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso. (Pr)= Preñada, (L)= Lactante y (P)=Postlactante. Las abreviaturas de las especies se presentan igual que en Figura 1.

100

80

60

40 No. de células células de No. 20 70

0 A. li A. li A. li A. S. lu S. lu S. lu S. lu S. lu S. lu S. lu S. lu S. lu S. A. ci A. ja A. C. br C. C. pe C. V. pu V. (P) A.li (P) A.li (P) A.li (P) A.li (P) (P)S. lu (P)S. lu (P)S. (Pr)A. li (Pr)A. (Pr)S. lu (Pr)S. (P)S. sp. (P)S. (Pr)P. sp. (Pr)P. Especies

Figura 26. Etapa estral de las hembras encontradas en el mes de enero del 2007 en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya. (Pr)= Preñada, (L)= Lactante y (P)=Postlactante. Las abreviaturas de las especies se presentan igual que en figura 3.

Artibeus lituratus se encontró en estado de proestro. Las hembras de gremio nectarívoro ( Glossophaga ) se hallaron en anestro (Figura 24). En el mes de agosto se encontraron hembras en los tres estados estrales, menos en metestro. Las hembras de Artibeus phaeotis se encontraron en su mayoría en estro. Sin embargo, las 3 hembras de esta especie que estaban en estado postlactante se encontraron en estado de proestro. Las hembras de la especie Artibeus lituratus se encontraron en estro sin importar su estado de lactancia o postlactancia. Sin embargo, la hembra preñada se encontró en proestro. Las otras especies, Artibeus glaucus , Artibeus jamaicensis , y Carollia perspicillata se hallaron en proestro y estro, independientemente de su estado inactivo o postlactante (Figura 25). Las hembras encontradas en enero y principios de febrero en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya, presentaron las tres etapas estrales menos el metestro. Sin embargo, de los cuatro meses muestreados, en enero se vio un mayor número de células anucleadas características de esta etapa (Figura 26). Las hembras de la especie Sturnira ludovici se encontraron en su mayoría en el estado de estro, menos la hembra preñada que se halló en anestro. Las hembras del género Carollia se encontraron en estro. Las de Artibeus lituratus , en proestro, sin importar si estaban en estado inactivo o postlactante. Sin embargo, la hembra preñada si estaba en estado de anestro. Las especies restantes se encontraron en estro ( Artibeus cinereus, Artibeus jamaicensis y Vampyressa pusilla ). Las tres hembras preñadas presentaron un alto número de células parabasales, lo que indica el estado de anestro.

6.6.1 Etapas estrales individuales Sin tomar en cuenta el estado reproductivo en el que se están

71 Marzo Agosto 2% 12% 23%

37% 49%

39%

38%

Mayo0; 0% Enero 1% 0; 0% 25% 32% 38; 38%

62; 62%

42%

Parabasales Intermedias Superficiales Anucleadas

Figura 27. Porcentaje de células epidérmicas vaginales de Artibeus lituratus en los meses de marzo, mayo y agosto en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso y enero en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya. Marzo Mayo 2% 3% 11% 27% 36%

47%

39%

35%

Agosto Enero 0% 5% 6% 19%

40% 51% 43%

36%

Parabasales Intermedias Superficiales Anucleadas Figura 28. Porcentaje de células epidérmicas vaginales de Carollia perspicillata en los meses de marzo, mayo, agosto en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso y enero en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya.

72 las hembras de Artibeus lituratus , en marzo se encontró el mayor porcentaje de hembras en estado de estro (49%), seguido por el proestro (39%). El muestreo de mayo se realizó en una sola hembra, la cual se hallaba en proestro. En agosto se encuentran en igual proporción de estro y proestro. En enero la mayoría de las hembras se encuentra en proestro (42%). En el mes de agosto es donde se ve mayor número de células, características del estado de anestro (Figura 27). Sin tomar en cuenta el estado reproductivo en el que se encontraron las hembras de Carollia perspicillata , durante los cuatro meses muestreados se mantuvo la predominancia del estado estral. En marzo se observó que las proporciones entre etapas estrales son equitativas, el mayor porcentaje de hembras se encontró en estado de estro (36%), seguido por el proestro (35%). El muestreo de mayo reflejó un mayor porcentaje de hembras en estro (47%) y se vio una disminución de células de la etapa de anestro. En agosto se observó también la dominancia del estado estral y se encontró un aumento en las células de la etapa de anestro nuevamente. En enero sólo se halló una hembra a la que se le realizó la citología vaginal y mostró un decrecimiento en las células características del anestro y un 51% de células características del estro (Figura 29).

6.7 Protocolo Citologías Vaginales Se desarrolló un protocolo para las citologías vaginales en hembras de murciélagos.

1. Captura de murciélagos por medio de redes de niebla 2. Guardar murciélago en bolsa de tela 3. Se sostiene la hembra dentro de la bolsa de tela, con las patas y zona genital por fuera.

73 4. Con ayuda de una micropipeta que presente una media de 2 microlitros, se succiona una gota de solución salina (Se utilizó de marca Socopex). Para especies de murciélagos grandes como Artibeus jamaicensis , o Artibeus lituratus se utilizan 2 microlitros, para los de menor tamaño como Glossophaga soricina es mejor utilizar de 1 a 1.5 microlitros. 5. Se inocula la gota de solución salina en la vagina del individuo, sin introducir la punta dentro de la vagina. 6. Después de tres segundos, con la misma punta, se succiona la gota de la vagina y se extiende a lo largo de una lámina. 7. La lámina con la muestra se deja secar a temperatura ambiente, dentro de una caja portaobjetos de madera, la cual proteje a la lamina de factores contaminantes y es de fácil utilización en campo. 8. Después de seca, se le agrega una gota de alcohol industrial con otra punta, para fijar la muestra y nuevamente se deja secar a temperatura ambiente. Posteriormente en un laboratorio, 9. Etiquetar las laminas con los datos de campo necesarios. 9. Se tiñe la muestra con la tinción de Gram. 1-Teñir con cristal violeta 1min. 2-Lavar con agua el exceso de colorante. 3-Cubrir con lugol 1min. 4-Lavar con agua el exceso de lugol. 5-Decolorar con alcohol-acetona 30 segundos. 6-Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente. 7-Teñir con fucsina 1 minuto. 8-Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste. 10. Se deja secar a temperatura ambiente. 11. Con ayuda de un microscopio, realizar el conteo celular: Se establece cuantas células hay de cada tipo (parabasales intermedias, superficiales y

74 anucleadas) en cien células, para establecer un porcentaje. 12. A partir del porcentaje, establecer en que etapa estral se encontró la hembra.

MATERIALES Y REACTIVOS Redes de niebla Bolsas de tela Micropipeta con capacidad para 1 y 2 microlitros. Puntas para la micropipeta de 1.1 a 5 microlitros. Laminas Cajas portalaminas Microscopio Alcohol industrial Solución salina Cristal violeta Lugol Alcohol acetona Fucsina.

Se realizó una colección de referencia de citologías vaginales de murciélagos, la cual estará disponible en el Museo de Historia Natural de la Pontificia Universidad Javeriana.

75 7 DISCUSIÓN 7.1 Estructura y composición En la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso se han realizado pocos estudios referentes a murciélagos, sólo se tiene conocimiento del trabajo de Cortés-Delgado 2007. En la región de la reserva se encontró una especie no registrada en el trabajo mencionados anteriormente ( Mimon crenulatum ). Sin embargo, sí fue reportada en el departamento del Quindío en dos trabajos (Numa 2002 y Pérez-Torres et al . 2006). No se encontraron 11 especies que fueron registradas en el trabajo de Numa en 2002, realizado también en el Quindío. Hubo problemas con la identificación hasta especie de algunos individuos de los géneros Glossophaga , Carollia y Artibeus , por lo cual se dejaron determinadas hasta género sp.. La curva de acumulación de especies de la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso (Figura 2), alcanzó levemente la asíntota. El modelo de dependencia lineal mostró que se alcanzó la totalidad de las especies esperadas, mientras el modelo de Clench, mostró que se alcanzó un 80% de las especies esperadas para la reserva, por lo cual los días y horas de muestreo y la distribución de redes fueron buenos. De las especies registradas por Numa (2002) en el Quindío, no fueron capturadas 11 especies durante este estudio. En el estudio de Numa las 11 especies fueron capturadas en bajo número, y en general no se encontraron en bosques (donde fue realizado este trabajo de grado), sino en cafetal o guadual. Otras posibles razones para no haber capturado mayor número de especies son: que las poblaciones de éstas sean pequeñas en estos lugares, ya que es posible que los parches de bosque donde se realizaron los muestreos no puedan ofrecer las características óptimas para su estancia y presenten poca conectividad con otros bosques. También se puede deber a que detecten las redes de niebla con mayor facilidad o que algunas especies

76 nómadas, como las del género Platyrrhinus , no se encontraran en los momentos de muestreo. En el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya se han realizado varios trabajos sobre murciélagos (Alfonso y Cadena 1994, López 2003 y Estrada 2005). Durante los muestreos realizados en enero y febrero del 2007, se encontraron seis especies que no se registraron en el inventario realizado por Alfonso y Cadena (1994), siete especies no encontradas en el estudio de Estrada (2005) y 13 especies no halladas en el estudio de López (2003). Las siguientes tres especies no fueron capturadas por ninguno de los tres estudios citados anteriormente Vampyressa pusilla, Uroderma magnirostrum, Eptesicus furinalis, lo que se constituye en una ampliación de las especies reportadas para el Santuario. Al incluir los nuevos reportes a los inventarios realizados por Alfonso y Cadena en 1994, López 2003 y Estrada 2005, la lista para el SFFOQ sería de 29 especies. De las especies Vampyressa pusilla y Eptesicus furinalis se tiene registro a lo largo de todo el país (Alberico et al . 2000). Mientras que Uroderma magnirostrum y aunque están registrados para la zona andina, no se encuentran registrados para el departamento de Risaralda (Alberico et al . 2000). Hubo problemas con la identificación hasta especie de algunos individuos de los géneros Sturnira y Platyrrhinus en campo. Posiblemente al ser identificados hubieran pertenecido a las especies Platyrrhinus dorsalis o Platyrrhinus vittatus ya que estas dos especies han sido reportadas en los tres estudios mencionados anteriormente, realizados en el Santuario. La curva de acumulación de especies del Santuario de Fauna y Flora Otún Quimbaya (Figura 4) no alcanzó la asíntota. El modelo de dependencia lineal mostró que alcanzó el 86% de las especies esperadas en el Santuario y según el modelo de Clench, se alcanzó el 58% de las especies esperadas

77 para la reserva. De las especies registradas por Alfonso y Cadena (1994), López (2003) y Estrada (2005) que no fueron capturadas durante este estudio y/o las 13 especies faltantes según el modelo de Clench, puede deberse a varias razones. Las poblaciones de estas especies pueden ser poco numerosas. Al colocar todas las redes de piso y por los senderos, ya que no estaba permitido abrir camino por el bosque, es posible que varias especies presentaran hábitos de forrajeo a mayores alturas (Pérez-Torres 2004). También se pudo deber a que detectaran las redes de niebla con mayor facilidad o que algunas especies nómadas, como las del género Platyrrhinus y Artibeus , no se encontraran en los momentos del muestreo. Otro factor influyente en el bajo número de especies fue que se capturaron muy pocos individuos durante los tres muestreos del mes de enero y principios de febrero (67), lo cual se pudo deber a las altas temperaturas diarias y bajas temperaturas nocturnas que se presentaron durante comienzos de este año. En los muestreos del santuario, el mayor éxito de captura, casi en un 100%, se obtuvo antes de las 12 de la noche, ya que a partir de este momento la temperatura bajaba y la humedad se incrementaba. Las alas de los murciélagos presentan una proporción superficie volumen alta, lo cual los hace más sensibles a cambios climáticos, como las bajas temperaturas (Stones et al. 1965 y Aguirre-Mendi 2003). Encontrar en mayor medida murciélagos de gremio frugívoro, se explica ya que su relación con los bosques tropicales es muy estrecha por su capacidad de dispersar semillas (Soriano 2000). También es importante, que aunque presenten una dependencia hacia la disponibilidad de alimento (Fleming 1986 y Fenton et al. 1992) y preferencias por un género o especie de planta, el bosque tropical ofrece diversa oferta alimentaria a lo largo de todo el año, por lo cual el trópico ha beneficiado al gremio frugívoro como gremio dominante entre numerosos mamíferos (Bolaños 2000).

78 7.2 Proporción de sexos En general en este estudio se presentó un mayor número de hembras que de machos. Sin embargo, al observar la proporción de cada especie se hallaron proporciones muy variables. Estos datos son similares a los encontrados por diferentes autores en trabajos anteriores. Las especies con mayor número de individuos en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso, presentaron una relación de machos respecto a hembras de la siguiente manera: Carollia perspicillata (0,7:1), similar a lo encontrado por Taddei en 1976 y a Muñoz en 1990. En las especies Artibeus phaeotis (0,75:1) y en Artibeus lituratus (0,39:1), las proporciones encontradas en trabajos anteriores difieren, ya que se halló mayor número de machos (Tabla 5). Lo anterior sugiere que estas poblaciones forman grupos sociales en harems, como las cataloga Rasweiler (1975). Este autor reporta que pueden presentar entre 1 y 3 machos y de 5 a más de 10 hembras en Artibeus lituratus y más de 20 hembras en Carollia.

Tabla 5. Proporción de sexos de seis especies de este trabajo y cinco estudios realizados previamente. M=macho, H=hembra y P=proporción. Las especies se encuentran abreviadas igual que en la Figura 1.

Pérez-Pabón 2007 Tamsitt et al . 1964 Taddei 1976 Muñoz 1986 Muñoz 1990 Pérez-Torres2004 RRNMO SFFOQ M H P M H P M H P M H P M H P M H P M H P A. ja 25 14 1:,6 0 1 0:1 46 54 ,8:1 14 21 ,6:1 67 33 1:,5 A. li 17 43 ,3:1 1 8 ,1:1 76 93 ,8:1 10 8 1:,8 51 49 1:,9 0 1 0:1 A. ph 21 28 ,7:1 4 3 1:8 60 40 1:,6

C. br 4 2 1:,5 6 2 1:,3 6 5 1:,6 58 42 1:,7 3 6 ,5:1 C.pe 20 29 ,7:1 2 1 1:,5 48 66 ,7:1 73 47 1:,6 39 61 ,6:1 G.so 17 15 1:,9 1 1 1:1 35 65 ,5:1 239 222 1:,9 2 0 2:0 59 41 1:,7 La especie de Glossophaga soricina presentó una proporción de sexos casi similar (1:0,88), mientras que en trabajos anteriores se encontraron proporciones variando de 2:0 a 0.5:1. Aunque Glossophaga

79 soricina se ha reportado como una especie que se socializa en harems (Rasweiler 1975), el que pocos machos se encarguen de cuidar a un gran número de hembras es muy costoso energéticamente. Se conocen casos de Carollia y Glossophaga que se comportan como gregarios (Rasweiler 1975, Porter 1979 y Morrison & Morrison 1981), lo que explicaría porque en los diferentes estudios su proporción de sexos es variable. Las proporciones encontradas en estudios previamente hechos de las diferentes especies varían, pero generalmente hay mayor número de hembras (Tabla 5). La especie A. jamaicensis presentó mayor cantidad de machos que de hembras, (1:0,56). Sin embargo, las proporciones encontradas en estudios previamente realizados son variables y generalmente hay mayor número de hembras. Artibeus jamaicensis es en su mayoría de grupos sociales de harems, generalmente uno o dos machos, con aproximadamente 15 hembras y sus crías (Ortega et al. 2001). Sólo se encuentran pequeños grupos de murciélagos (3 individuos) juveniles inmaduros sexualmente (Ortega et al. 2001). Registrar un mayor número de machos en las especies que han sido clasificadas como grupo social de harem puede deberse a que las hembras fueron menos activas en los momentos de muestreo, o también a que los individuos capturados hayan sido en su mayoría juveniles, ya que en estos muestreos no se realizó la prueba de observar las falanges para determinar el estado de madurez. En las especies con más individuos en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya, Sturnira ludovici (0,5:1) y Artibeus lituratus (0,12:1), se evidenció dominancia de hembras. Esto coincide con lo reportado, ya que estas dos especies se caracterizan por agruparse en harems (Rasweiler 1975). Carollia brevicauda (1:0,33) presentó mayor cantidad de machos, lo cual se puede explicar, ya que también se pueden encontrar en poblaciones

80 gregarias o deberse al bajo número de individuos capturados. La variabilidad en las proporciones en este estudio y los citados en la Tabla 5, podría explicarse por la forma de muestreo. Por un lado, es poco probable capturar a todos los individuos del mismo grupo social; también es posible que algunas capturas hayan sido de juveniles, los cuales todavía no se encuentran ubicados en ningún harem. Otra razón es que se haya muestreado pocas noches. En los estudios en los que reportan los números de machos y hembras, no discuten las diferencias entre éstas; por lo cual es importante empezar a buscar posibles explicaciones de la variación en la proporción de sexos. Los radios de probabilidad son útiles, ya que a partir del éxito de captura, permite sugerir que sexo de cada especie es mas probable encontrar. Por ejemplo, aquí se evidencio que en el la region de la Montaña del Oscaso es mas probable encontrar 5 especies de murciélagos y entre éstas Carolllia perspicillata , Artibeus phaeotis , y Artibeus lituratus presentan mayor probabilidad de presentar hembras que machos. Lo anterior hace de éste un buen lugar de muestreo para realizar este tipo de estudios en estas tres especies, ya que el estado reproductivo de las poblaciones se monitorea principalmente en hembras.

7.3 Estado reproductivo de machos El estado reproductivo de los machos no se registró durante los meses de marzo, abril, y mayo. En agosto, en su mayoría se encontraron machos activos sexualmente. Los machos maduros sexualmente pero inactivos al momento del muestreo son el segundo estado mas común. Durante el mes de enero la proporción de los estados de actividad sexual de los machos estuvieron similares, sin ninguna predominancia. Estudios realizados anteriormente, que midieron el tamaño de los

81 testículos, muestran que los machos aunque se pueden encontrar activos a lo largo del año, también presentan picos y se encuentran activos sexualmente inmediatamente antes que las hembras entren en estro, lo cual sería en estos casos en el pico reproductivo de marzo-abril (Taddei 1976, Wilson 1979, Ortega et al. 2001 y Hosken et al. 1998). En el estudio realizado por Taddei (1976) en Brasil, se encontró un 90% de machos sexualmente activos en Artibeus jamaicensis y 70% en Glossophaga soricina . Los picos reproductivos coincidían con el de las hembras, reportando el mayor número de preñadas entre agosto y octubre.

7.4 Estado reproductivo de las hembras 7.4.1 Preñez La mayoría de hembras encontradas en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso, así como las encontradas en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya, presentaron la sínfisis púbica abierta. Esto sugiere que la mayoría de las especies, aunque presentan dos picos reproductivos, se encuentran aptas para dar crías a lo largo de todo el año. Lo anterior, junto con el hecho que alrededor de los 9 meses (dependiendo de la especie) de vida las hembras ya están aptas para tener crías, resulta en un bajo número de hembras que aun no han tenido crías (sínfisis púbica cerrada) (Laska 1990, Ortega et al. 2001).

7.4.2 Etapas reproductivas de las hembras Encontrar durante todos los muestreos un mayor porcentaje de hembras en estado inactivo, implica que no todas las hembras de una población se hallan en estado de preñez al mismo tiempo y que hay hembras en estado inmaduro sexualmente. El momento de mayor número de hembras preñadas se evidenció entre marzo y abril, aunque en abril y agosto se dio el

82 máximo de lactantes. Aunque no se tienen datos de lo ocurrido en el mes de julio, al presentarse mayor cantidad de hembras lactantes y postlactantes en agosto, esto sugiere que hacia el mes de julio se presentó un alto número de hembras en estado de preñez. Esto concuerda con otros estudios que han encontrado que, en general, para los frugívoros los momentos de mayor actividad reproductiva se observa entre marzo y abril y julio y agosto (Wilson 1973). Aunque hubo un momento de mayor número de hembras preñadas y de lactantes, los cuatro estados se presentaron en los muestreos durante los cinco meses. Esto se debe a que los ciclos estrales son cortos, duran entre 20 y 30 días, por lo que pueden quedar preñadas en cualquier mes del año (Porter 1979, Ortega et al. 2001 y Álvarez et al . 1991). Sin embargo, las épocas de mayor actividad reproductiva se encuentran relacionadas con la alta oferta alimentaria ya que el parto y la lactancia necesitan de grandes cantidades de energía (Mares et al. 1971, Taddei 1976, Emlen et al. 1977, Wilson 1979, Laska 1990, Heideman 1995, Ortega et al. 2001 y Porter 2001). De pocas especies se realizaron numerosas capturas como para analizar y discutir los porcentajes de cada etapa reproductiva. A continuación se hablará sobre los porcentajes del estado reproductivo de hembras de Carollia perspicillata , Artibeus lituratus , Artibeus jamaicensis , Glossophaga soricina y Sturnira ludovici.

Carollia perspicillata Presentó mayor número de hembras preñadas en marzo (20%) y agosto (40%) y el mayor número de lactantes en agosto. Esta especie muestra sus épocas de máxima actividad reproductiva entre febrero y mayo y entre junio y agosto. En los muestreos de Thomas 1972, Tamsitt y Valdivieso 1964, Tamsitt y Valdivieso 1965 y Arata y Vaughn 1970, citados en el trabajo de Wilson de 1979, se reportó el mayor porcentaje de preñadas en agosto

83 con un 40% también y un 20 % de lactantes. En estos estudios también se encontró un alto índice de preñadas en septiembre y enero, pero en la presente investigación no se tienen datos de esta especie en el mes de septiembre y se capturaron pocos individuos en enero. Aunque no es una especie exclusivamente frugívora, sí predomina su alimentación por frutos de Cecropia , Solanum y Piper (Muñoz-Saba et al . 1997, Clautier et al . 1992 y Cortés-Delgado 2007). Esto puede hacer que ésta especie se comporte de forma poliéstrica bimodal, ya que en las épocas de mayor fructificación se encuentra el mayor número de hembras en estado reproductivo activo (Wilson 1973).

Artibeus lituratus Según los reportes, esta especie presentó estados de preñez a lo largo de los cinco meses muestreados. Artibeus lituratus en Colombia muestra un patrón reproductivo continuo. Aunque Thomas 1972, en un estudio realizado en Colombia confirmó el ciclo continuo, sus datos indican dos picos de actividad hacia diciembre y mayo. En el muestreo de abril se encontró mayor número de hembras preñadas (50%) y en agosto (20%), sin embargo, no se tienen datos de diciembre. En el trabajo de Wilson 1979 donde se agruparon los estudios de Thomas 1972, Tamsitt & Valdivieso 1964, Tamsitt & Valdivieso 1965, Arata &Vaughn 1970, se encontró mayor número de lactantes en junio y enero. Mientras que lo encontrado en la región cafetera en este estudio muestra en mayor número de lactantes en mayo y agosto, sin embargo no se tienen datos de junio y en enero no se encontró ningún individuo lactante. A principios del mes de agosto, una hembra de Artibeus lituratus tuvo su cría mientras se encontraba en la bolsa de tela. El patrón continuo de esta especie se explica de tal forma que presenta buena oferta alimentaria a lo largo de todo el año en Colombia, ya

84 que al no ser especialista puede alimentarse de recursos que estén disponibles como partes de flores e insectos (Muños-Saba et al. 1997).

Artibeus jamaicensis Al igual que las dos especies anteriores, en Colombia esta especie presenta un patrón reproductivo continuo. Sin embargo, las épocas de mayor actividad reproductiva se dan entre marzo- abril y julio- agosto. Esto se debe a que presentan un estro posparto (Ortega et al. 2001, Wilson 1979), al igual que las otras especies de murciélagos de la familia Phyllostomidae. La primera cópula posparto se da aproximadamente 2 días después del primer parto del año, teniendo las crías hacia julio-agosto. Artibeus jamaicensis es la única especie neotropical conocida que durante el segundo parto del año vuelve a quedar en estro (Mena et al . 2000 y Kunz 1982). El óvulo fecundado se implanta, pero queda en estado de dormancia por aproximadamente 2 meses y medio, reanudando el desarrollo hacia noviembre-diciembre, y así tienen sus crías nuevamente entre marzo y abril (Ortega et al. 2001, Wilson 1979). De acuerdo a los resultados, durante los meses de marzo y abril se presentaron los mayores porcentajes de hembras preñadas y lactantes. Sin embargo, los muestreos de agosto y enero presentaron muy pocos individuos de esta especie para poder establecer una relación entre el estado reproductivo y lo encontrado en artículos citados anteriormente. El desarrollo retardado es usual en murciélagos de las zonas templadas, ya que durante las bajas temperaturas del invierno usan la energía en mantener el calor y en acumular grasa corporal para el desarrollo gestacional (Kunz 1982). Así tienen las crías en primavera donde encuentran la mejor oferta alimentaria. No se sabe a que se deba el segundo estro posparto de Artibeus jamaicensis y se cree que es un indicador genético (Mena et al. 2002). Si este evento fuese genético, se explicaría el desarrollo retardado como un

85 mecanismo útil para poder tener las crías hacia marzo y abril, donde se presenta la primera época de precipitación del año y mejor oferta alimentaría. Glossophaga soricina Las pocas hembras capturadas de esta especie se encontraban lactantes en marzo, mayo y agosto. Esto concuerda con el trabajo de Taddei de 1976 en Colombia, donde reportó que el ciclo reproductivo de Glossophaga soricina es acíclico y se pueden encontrar numerosos partos a lo largo de todo el año. Es una especie de patrón reproductivo variable dependiendo de donde se encuentre geográficamente, ya que su gremio alimentario no es del todo especialista y puede alimentarse no sólo de polen, sino de insectos, los cuales puede encontrar con mayor facilidad a lo largo del año (Wilson 1979, Ceballos et al. 2005, Rasweiler 1975 y Reid 1997).

Sturnira ludovici En los muestreos realizados en enero sólo se encontró un 5% de hembras preñadas, y ninguna lactante, pero no se puede hacer una relación ya que únicamente se tienen datos de un mes. Esta especie presenta un patrón bimodal poliestral, pero en Colombia es menos sincrónico (Wilson 1979). En general, se puede decir que las especies de murciélagos muestran una dependencia directa de la oferta alimentaria (Fleming 1986 y Fenton et al. 1992). Así en algunos países, como Costa Rica y Panamá, donde los picos de lluvias y fructificación y/o sequía y floración son un poco más marcados que en Colombia, las épocas de máxima actividad reproductiva se ven más evidentes (Tamsitt et al . 1964 y Wilson 1979). Los patrones reproductivos de los murciélagos pueden variar según el área geográfica donde se encuentren y en este caso la región cafetera en Colombia les puede estar ofreciendo una continua oferta alimentaría a lo largo de laño que les permite que sus patrones reproductivos sean menos sincrónicos.

86 7.5 Citologías vaginales A continuación se tratará el tema de las citologías vaginales, su utilización y beneficio. En otros estudios citados anteriormente, las citologías vaginales fueron teñidas con diferentes colorantes para mostrar las estructuras principales de las células. Se utilizaron los reactivos Giemsa (Ahmadi et al . 2005), Harris Shorr (Boue et al . 2000, Felipe et al . 2001), el Diff-Quick (Mayor et al. 2003, West et al . 2004) y Papanicolaou (De Bonilla et al. 1988). Sin embargo, al cotizar estos reactivos, se salían del presupuesto, por lo cual se buscó otra tinción para teñir las células epiteliales vaginales. La secuencia de la tinción de Gram, diferenció claramente la forma y tamaño del núcleo y la célula, lo cual es necesario para la clasificación de las células vaginales para determinar la etapa estral (Nelson 1994 y Mayor et al . 2003). Por lo cual se escogió esta secuencia de colorantes como óptima para teñir las citologías vaginales y se incluyó en el protocolo. La forma de tomar la muestra y la tinción utilizada, permitió diferenciar claramente los cuatro tipos de células epiteliales para determinar la etapa estral en la que se encontraban las hembras. Además, se pudo relacionar con su estado reproductivo sin necesidad de tomar muestras invasivas de tipo hormonal o de sacrificar el animal. Se encontraron las tres etapas estrales en cada mes de muestreo. Esto indica que las hembras pueden encontrarse en cualquier etapa estral en diferentes épocas del año. De hecho, el mayor porcentaje de hembras en la mayoría de los meses muestreados se encontró en proestro y estro. Esto implica que las hembras se encuentran aptas para ser copuladas a lo largo del año, de acuerdo a las diferentes fuentes alimentarías que se pueden encontrar fácilmente en Colombia. El no encontrar durante los muestreos hembras en etapa de metestro, puede deberse a que esta etapa es muy corta en comparación de las otras tres, por lo cual es más complicado

87 encontrar hembras en esta etapa. Otra explicación es que la época del año de noviembre a febrero, donde se cree que se encuentra en general la etapa de menor actividad reproductiva por no presentar altos niveles de precipitación, no haya sido muestreada. Las hembras que se encontraron en estado de lactancia en marzo, (dos Glossophaga soricina ), presentaron mayor número de células epiteliales vaginales características de la etapa de anestro, lo cual se explica dados los altos niveles de prolactina deteniendo el proceso del ciclo ovárico (Asa 1996). Posiblemente la hembra se encontraba ya en una etapa intermedia de lactancia. Hacia el inicio de la lactancia lo más posible es que haya presentado el estro posparto y haya quedado preñada nuevamente, por lo cual también se encontrarían en anestro y es posible que la preñez aún sea incipiente para determinarla (Altrigham 1996 y Asa 1996). Sin embargo, las tres hembras encontradas en agosto en etapa lactante (dos Artibeus lituratus y una Artibeus phaeotis ) presentaron mayor número de células epiteliales vaginales características de la etapa del proestro, lo cual indica que se encontraban ya en una etapa terminal de la lactancia y estaban entrando en estro. Esto sugiere, como se ha venido mencionando, que la población, aunque puede presentar épocas de mayor actividad reproductiva, tiene potencial para que cualquier hembra pueda quedar preñada en cualquier época del año. Las hembras preñadas a las que se les tomó la citología, revelaron mayor número de células características de la etapa de anestro. Esto se explica por los altos niveles de progesterona y prolactina generados por el útero durante la preñez (Asa 1996). Durante el muestreo de marzo, en la citología tomada a una hembra de Glossophaga soricina, se evidenciaron espermatozoides, lo cual implica que en esta época después del parto, esta hembra entró en el estro posparto, dando paso a su segunda preñez anual para tener la cría en la

88 segunda época de mayor actividad reproductiva, la cual coincide con la mayor oferta alimentaria. Las hembras en estado inactivo o estado postlactante no presentaron diferencias importantes que evidencien un patrón relacionado con el estado reproductivo, ya que las hembras en estado postlactante ya se encuentran con los niveles hormonales normales, al igual que las inactivas. No se encontró ningún patrón de acuerdo al gremio alimentario, lo cual sugiere que la no especialidad de hábito alimenticio de las diferentes especies no afecta directamente el patrón reproductivo, ya que pueden nutrirse de varios alimentos. Otra posible explicación es que se capturaron pocos individuos de hábitos nectarívoros e insectívoros, por lo cual no se pudo establecer un patrón.

7.5.1 Etapas estrales individuales Sin considerar la relación con el estado reproductivo, los datos de las citologías vaginales de Artibeus lituratus y Carollia perspicillata muestran que en los cuatro meses muestreados hubo un mayor número de hembras en estado de proestro y estro, lo cual se había explicado anteriormente, ya que pueden encontrarse en cualquier etapa a lo largo del año. Sin embargo, por no tener muestreos de varios meses, es posible que no se estén evidenciando algunas etapas estrales o que los valores máximos y mínimos cambien. Sin embargo, los resultados muestran que la utilización de la técnica de citología vaginal es útil para la descripción de las etapas estrales y su relación con el estado reproductivo. Este trabajo permite continuar una línea de investigación para entender la dinámica reproductiva de los murciélagos. Los estados reproductivos y las etapas estrales se presentan en las hembras durante varias épocas del año, lo cual está relacionado con la constante oferta alimentaria en los sistemas tropicales colombianos. 89 Sin embargo, como se mencionó anteriormente, pueden presentar unos picos reproductivos sincronizados con las épocas de lluvias. Aunque hay una disponibilidad más permanente de alimento, sí es factible que en las épocas de floración y fructificación, el alimento sea más abundante e incluso puede ser mas nutritivo, siendo éste un factor importante para las hembras al momento de la preñez y la lactancia (Wilson 1973 y Asa 1996). Las dos regiones del eje cafetero donde se realizó este estudio parecen ofrecer una buena oferta alimentaría a los murciélagos. En la región natural La Montaña del Ocaso se vio el mayor número de hembras en estado de preñez hacia las épocas de mayor precipitación (marzo a julio): En el Santuario de Otún- Quimbaya, por muestrear sólo un mes y realizar pocas capturas, no se puede hacer una relación con las épocas de precipitación. Es importante mencionar que el ciclo reproductivo y los resultados pudieron ser afectados por otros factores: la temperatura es de gran importancia, ya que las bajas temperaturas obligan a las hembras a entrar en dormancia o invernar durante esta estación y las altas temperaturas están relacionadas con la baja calidad del esperma en machos y decrecimiento en los niveles de gonadotropina, lo que incide en una baja capacidad de las hembras para quedar preñadas (Asa 1996). Otro factor es la duración del día y la noche (aunque esto es más factible en zonas templadas), donde los partos se dan al durar más el día que la noche (primavera). También pueden influir en la variación de los ciclos reproductivos, la sincronización por feromonas, o por estrés (Asa 1996). Se cree que las dos regiones muestreadas deben ofrecer una buena disponibilidad alimentaría y de protección para las poblaciones de murciélagos, ya que según este estudio, estas poblaciones se encuentran en un buen estado reproductivo. Esto se evidencia con el alto número de hembras, lo que sugiere una estructura social de tipo harem, y que aunque se evidenció una época de mayor actividad reproductiva que coincide con la

90 primera temporada de precipitación, se encontraron algunas hembras en estado activo reproductivamente (preñez y lactancia) a lo largo de todos los meses muestreados. Encontrar mayor número de hembras que ya han tenido crías podría ser también un indicador del buen estado reproductivo. Tener una capacidad reproductiva con tal continuidad da a los murciélagos capacidad de resistencia para el mantenimiento de las poblaciones en la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso y en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya, a pesar de la historia de intervención y transformación de estos bosques. La principal contribución de este estudio es que muestra que la técnica de citología vaginal propuesta para murciélagos es viable de utilizar y que se puede relacionar con el estado reproductivo en murciélagos. La aplicación práctica de esta técnica radica en que es posible realizar estudios que profundicen en el conocimiento de los ciclos reproductivos de los murciélagos y poder evaluar cómo se comporta la dinámica poblacional a largo plazo. Sin embargo, este estudio es una aproximación. En un futuro seria útil que este tipo de investigaciones se acompañen de registros de oferta alimentaría y factores ambientales como la temperatura y la humedad relativa. Esto sería de gran utilidad para poder determinar si los cambios ambientales antrópicos afectan el estado reproductivo y por ende la permanencia de las poblaciones. Por otra parte, la facilidad y bajo costo que esta técnica implica, permitiría desarrollar estudios de muestreos permanentes y podría utilizarse como una técnica de rutina para todos los muestreos realizados en murciélagos y así ampliar la información sobre la reproducción de diferentes especies, relacionarla con la ecología de éstos y colaborar con la conservación de este grupo.

91 8 CONCLUSIONES

1. En general, en los dos lugares de muestreo se presentó un bajo número de hembras que no han tenido crías, sugiriendo una alta actividad reproductiva de las poblaciones. Igualmente, se encontraron hembras en todas las etapas (inactiva, preñada, lactante y postlactante), sugiriendo un buen estado reproductivo de la población.

2. Los machos pueden encontrarse en cualquier estado reproductivo en diferentes épocas del año. Sin embargo, pueden sincronizan su actividad sexual con la de las hembras.

3. Al contar los murciélagos con una oferta de alimento más permanente a lo largo del año pueden presentar sus ciclos reproductivos menos precisos. Sin embargo, aunque los murciélagos se encontraron en diferentes estados reproductivos en todos los muestreos, la mayor época de reproducción se encontró sincronizada con la primera época de precipitación del año.

4. Las citologías vaginales permitieron evidenciar el estado de inactividad al encontrarse en anestro de las hembras en estado de preñez y lactancia. Las hembras en estado inactivo y poslactante no evidenciaron ningún patrón encontrandose en tres de las cuatro etapas estrales.

5. La secuencia de reactivos de tinción de Gram resultó muy útil para realizar la tinción de las citologías vaginales. Su fácil uso, economía y claridad para diferenciar entre el tamaño y forma de la célula y el núcleo, facilitaron el conteo de las células.

92 6. Al tomar la muestra con una micropipeta e inocular 2 microlitros, se obtiene una muestra representativa que es útil a usar para el conteo celular.

7. La técnica de las citologías vaginales es muy útil para determinar la etapa estral y relacionarla con el estado reproductivo. Es una técnica sin intervención quirúrgica y no implica sacrificio del animal.

8. Se registraron tres especies nuevas para el santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya: Vampyressa pusilla , Uroderma magnirostrum y Eptesicus furinalis.

93 9 RECOMENDACIONES

1. Debería incrementarse el esfuerzo de muestreo en el Santuario de Fauna y Flora Otún-Quimbaya, y muestrear a lo largo de todo el año para poder identificar las épocas de mayor actividad reproductiva.

2. Sería interesante realizar un estudio de citologías vaginales en murciélagos en cautiverio en especies diferentes a Carollia perspicillata, Glossophaga soricina y Molossus molossus y así determinar la duración de los ciclos estrales, observar como se comportan a lo largo del año y así poder relacionarlos con animales silvestres.

3. Es importante ampliar la cobertura geográfica de los muestreos a otras zonas adicionales a las dos de esta investigación. Además se deben hacer muestreos a lo largo de todo el año para poder establecer las épocas de mayor actividad reproductiva y determinar los ciclos reproductivos.

4. Al realizar estas investigaciones, también seria útil registrar la temperatura, la humedad relativa y la oferta alimentaria para poder relacionar estos factores con los patrones reproductivos.

5. Realizar una comparación entre bosques con diferente grado de intervención para evaluar si la reproducción se ve afectada por los cambios en la estructura vegetal resultantes de la transformación del hábitat.

6. Al ser difícil la captura de murciélagos nectarívoros e insectívoros es necesario incrementar el esfuerzo de muestreo para poder evaluar la relación entre los patrones reproductivos de los diferentes gremios.

94 7. Se deberían realizar investigaciones comparativas en diferentes condiciones (altitud, áreas geográficas, temperatura, patrones de precipitación, entre otros), para evaluar si los patrones reproductivos se ven afectados.

95 10 BIBLIOGRAFIA

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106 11 ANEXOS Anexo1.Fotos de cada tipo de célula epitelial vaginal.

Células parabasales. Las dos pequeñas situadas a la derecha.

Células intermedias, situadas abajo a la izquierda.

Células superficiales. En la primera imagen situada hacia la izquierda y en la segunda imagen, centrada.

107 Anexo 2. Fotos de las células epidérmicas de hembras de murciélago.

Carollia perspicillata Parabasales 40X Intermedias 20X

Superficiales 20X

Glossophaga soricina Parabasales 40X Intermedias y superficiales 40X

108 Espermatozoides 100X

Artibeus jamaicensis Superficiales 20X

109 Artibeus lituratus Parabasales 40X Intermedias 20X

Superficiales 20X

110 Anexo 3. Formato de libreta de campo

No Campo______Día___ Mes____Año____ No Red_____ Colecta Si__ No __ Recaptura Si__ No__

Genero______Especie______

Nombre vulgar______

LA____LT____LHN___LPs.u___LPc.u.___LO___LE____LToT____ Peso: Bolsa:______Con bolsa______Neto______Reproducción: Sexo: M___F___Edad: Juvenil___Subadulto____Adulto___ Basado en:______

Macho: Testículos: Escrotales__Inguinales__Impalpables___ Hembra: Preñez: Si__No:__Incipiente___Avanzada___ Sínfisis púbica: Cerrada___Abierta___Intermedio___ Mamas: No__Pezón evidente: Si___No__ Alopécicos: Si__No__Leche: Si__No:__ Comentarios:______

Colecciones especiales: Si__No:___ Heces__Polen__Contenido estomacal___ Frotis vaginal____

Coloraciones especiales:______Observaciones:______

Proyecto______Departamento:______Municipio:______Vereda:______Corregimiento:______Finca:______Altitud:______Longitud______Latitud.______Ubicación red:______

111 Anexo 4. Radios de probabilidad de cinco especies del la región de la reserva natural La Montaña del Ocaso, Quindío. Especies abreviadas como la Figura 1.

Carollia perspicillata

40

30

20 Oddsratio 10

0 C. br C. pe C ca A ja A. ph A. li G. so G. lo V. pu P . he S. bi S. lil G. sp. S. lu C. go C. sal C. tri P. di C. sp. D. ro A. sp. A. gl M . cr Especies

Artibeus jamaicensis

40

30

20 Odds ratio Odds 10

0 C. br C. pe C ca A ja A . ph A . li G. so G. lo V. pu P . he S. bi S. lil G. sp. S. lu C. go C. sal C. tri P . di C. sp. D. ro A . sp. A . gl M . cr Especies

112

Artibeus phaeotis

40

30

20 Oddsratio 10

0 C. br C. pe C ca A ja A . ph A. li G. so G. lo V. pu P. he S. bi S. lil G. sp. S. lu C. go C. sal C. tri P. di C. sp. D. ro A. sp. A. gl M . cr Especies

Artibeus lituratus

60

40

Oddsratio 20

0 C. br C. pe C ca A ja A . ph A . li G. so G. lo V. pu P . he S. bi S. lil G. sp. S. lu C. go C. sal C. tri P. di C. sp. D. ro A. sp. A . gl M . cr Especies

113

Glossphaga soricina

20 18 16 14 12 10 8

Oddsratio 6 4 2

0 C. br C. pe C ca A ja A. ph A. li G. so G. lo V. pu P. he S. bi S. lil G. S. lu C. go C. C. tri P. di C. D. ro A. A. gl M. cr sp. sal sp. sp. Especies

Anexo 5. Radios de probabilidad de tres especies del Santuario de fauna y Flora Otún-Quimbaya, Risaralda. Especies abreviadas como la Figura 3 .

Sturnira ludovici

25

20

15

10 Oddsratio 5

0 E. br E. fu M ke S. sp. S. lu S. bo S. bi S. mo S. er G. so C. br C. pe P. sp. A. ci A. li A. ja V. pu U. ma Especies

114 Carollia brevicauda

7,0 6,0 5,0 4,0 3,0

Odds ratio 2,0 1,0

0,0 E. br E. fu M ke S. sp. S. lu S. bo S. bi S. mo S. er G. so C. br C. pe P . sp. A . ci A . li A. ja V. pu U. ma Especies

Artibeus lituratus

10

8

6

4 Oddsratio

2

0 E. br E. fu M ke S. sp. S. lu S. bo S. bi S. mo S. er G. so C. br C. pe P. sp. A . ci A . li A . ja V. pu U. ma Especies

115