This Product Is Intended for Professional Use Only

® M47 Microgen Strep 50

M47p CONTROL + 1.0mL INTENDED USE Positive control, contains inactivated polyvalent antigenic extracts to MICROGEN® Strep is a rapid latex agglutination slide test for grouping groups A,B,C,D,F and G preserved with 0.099% sodium azide Streptococci of Lancefield groups A,B,C,D,F and G from culture plates. Most strains of streptococci, which have been isolated from human M47x ENZ 2 x 10mL infections, possess serological group specific antigens. Identification of Lyophilised extraction enzyme the organisms includes extraction and characterisation of these antigens from organisms grown in culture. The streptococcal grouping system Disposable Reaction Cards and Disposable Mixing Sticks provides an enzyme reagent for rapid extraction of the carbohydrate antigens and a series of latex agglutination reagents, specific for groups ADDITIONAL MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED A, B, C, D, F and G, for rapid detection and identification of the extracted antigens. Bacteriological loops This product is intended for professional use only. Glass or plastic test tubes. Pipette to dispense 0.4ml volumes. PRINCIPLE OF THE TEST Water bath set at 37°C. Sample droppers or Pasteur pipettes. Latex particles in the MICROGEN® Strep kit are individually sensitised Laboratory timer. with rabbit antibodies specific to one of the Streptococcal carbohydrate antigens of groups A, B, C, D, F or G. WARNINGS AND PRECAUTIONS Streptococcal colonies from culture plates are incubated in an enzyme solution to extract the antigen. The extract / antigen preparation is 1. MICROGEN® Strep is for in vitro diagnostic use only. tested on a reaction card against six suspensions of antibody coated 2. Do not use reagents after the expiry date stated on the kit carton latex particles, each specific for one of the groups A, B, C, D, F and G. label. In the presence of homologous antigen, particles in one of the 3. Do not cross contaminate reagents or samples. suspensions will aggregate to give visible agglutination in contrast to the 4. The test should only be performed in accordance with the other suspensions, which will remain unagglutinated. instructions supplied with the kit. 5. Do not pipette specimens or reagents by mouth. CONT KIT PRESENTATION 6. All clinical specimens and cultures should be considered infectious and handled and disposed of according to accepted practices. Each kit contains sufficient reagents for 50 tests. The date of expiry of Decontamination of infectious material can be achieved with each reagent is indicated on the vial labels. sodium hypochlorite at a final concentration of 3% for 30 minutes. 7. The reagents in this kit contain 0.099% sodium azide as a M47a REAG A 2.5mL preservative which should be handled with care. Sodium azide can contains rabbit Strep Group A antibody- sensitised latex react with lead and copper plumbing to form explosive azides. particles in buffer with stabiliser and sodium azide 0.099% as Upon disposal of reagents, flush with copious quantities of water to preservative. prevent azide build-up.

M47b REAG B 2.5mL STORAGE contains rabbit Strep Group B antibody- sensitised latex particles in buffer with stabiliser and sodium azide 0.099% as Store all reagents at 2-8°C. Do not freeze. Under these conditions the preservative. reagents will be usable until the date printed on the outer carton label. Extraction Enzyme is stable for 3 months after reconstitution if stored at M47c REAG C 2.5mL 2-8°C. To prolong the life of the enzyme, it may be dispensed into contains rabbit Strep Group C antibody- sensitised latex suitable test tubes in 0.4mL volumes and stored frozen, at -20°C or particles in buffer with stabiliser and sodium azide 0.099% as below when it will be stable for 6 months. Enzyme should not be frozen preservative. and thawed more than once.

M47d REAG D 2.5mL INDICATIONS OF DETERIORATION contains rabbit Strep Group D antibody- sensitised latex particles in buffer with stabiliser and sodium azide 0.099% as Deterioration of reagents should be suspected if preservative.  Clumping of any of the latex reagents is evident and cannot be removed by shaking vigorously for a few seconds. M47f REAG F 2.5mL  The Positive Control or Extraction Enzyme becomes cloudy or contains rabbit Strep Group F antibody- sensitised latex forms a sediment. particles in buffer with stabiliser and sodium azide 0.099% as  The Positive Control fails to cause agglutination of one or more preservative. latex reagents within the recommended reaction time.  Uninoculated Extraction Enzyme causes agglutination of any of M47g REAG G 2.5mL the latex reagents. contains rabbit Strep Group G antibody- sensitised latex particles in buffer with stabiliser and sodium azide 0.099% as Reagents showing signs of deterioration should not be used. preservative.

PREPARATION OF CULTURES AND SPECIMENS This test is designed for the testing of colonies which have the biochemical tests to confirm S.milleri / S.anginosus identification. appearance and growth characteristics of streptococci, after overnight 2. Agglutination of more than one latex reagent indicates the possibility growth on routine laboratory culture media. For details concerning of mixed growth of organisms from different groups or the presence collection and handling of specimens and the choice of, inoculation and of a strain with more than one group a (for example some group D incubation of culture media, a standard textbook should be consulted. streptococci which also possess group G antigen). Colonies may be taken from primary culture plates, or from pure Further procedures to be considered: subcultures, for testing on the day following inoculation of the medium.  subculture to obtain pure isolates for retesting. Stored cultures should not be used. The haemolytic properties of the  for strains with group D and group G antigen, biochemical culture are important to its identification and should be determined tests to differentiate Enterococcus species from group D whether or not the growth taken for testing originates from blood based streptococcus species (Enterococcus strains with both these medium. antigens may be more antibiotic resistant than those with only group D antigen). CONTROLS 3. Agglutination of all the latex reagents may indicate excessive inoculation of culture to the Extraction Enzyme or contamination of The Positive Control should be tested regularly to ensure that the the test culture with organisms which cause non-specific reagents are functioning correctly. agglutination of latex particles (these are normally simple to The control is supplied ready for use and should be tested in place of the recognise from growth characteristics). culture extract in the test procedure. The Positive Control should give Further procedures to be considered: agglutination with all the test Latex Reagents. Failure of the Positive  boiling the remaining extract for two or three minutes, Control to give an agglutination pattern may be evidence of latex reagent cooling and retesting may lead to clear results. deterioration.  repeating the test using a smaller inoculation of the Extraction Enzyme. If a negative control is desired, uninoculated Extraction Enzyme should  subculture to obtain pure isolates which may be retested. be tested in place of the culture extract in the test procedure. 4. No significant agglutination in any of the latex reagents indicates either that no group A, B, C, D, F or G streptococci were present in TEST PROCEDURE the test sample or that they were present in numbers below the threshold of sensitivity of the test. ® Allow MICROGEN Strep reagents to reach room temperature prior to Further procedures to be considered: use  retest using a higher inoculum, particularly if group D or group F streptococci are suspected. Proceed as follows for each organism to be grouped  beta-haemolytic streptococci which do not group may be 1. Allow the Latex reagents and positive control to reach room identified using biochemical test procedures if necessary. temperature. 2. Just prior to use, reconstitute a bottle of enzyme by adding 10mL Colonies not associated with beta-haemolysis: distilled water. Mix gently to ensure complete reconstitution. Dispense 0.4mL Extraction Enzyme into a test tube. Agglutination of a single latex reagent showing a result of group B or 3. Pick Streptococcal colonies from the surface of the agar using a group D gives a reliable identification of the strain. If the result is group bacteriological loop and emulsify them thoroughly in the Extraction A, C, F or G it may not be relevant to the identification of the strain and Enzyme. To obtain best results, pick at least 4 or 5 average sized other identification methods are necessary. colonies or their equivalent for extraction. Excessive inoculation of extraction enzyme may cause non-specific agglutination (see Further procedures to be considered: 13.1.3). For minute-colony strains, a sweep of growth will be  if the result is group D, biochemical differentiation between necessary. Enterococci and group D streptococci (see above). 4. Incubate the tube for 10 to 15 minutes in a 37°C water bath. Shake the tube after the first 5 minutes incubation and shake Any other combination of results should be interpreted using the vigorously prior to testing to obtain even suspension of antigen. information provided above. 5. Vigorously shake Latex reagents for a few seconds to obtain even suspension. Dispense one drop of each Latex reagent LIMITATION OF THE PROCEDURE separately into six circles on a reaction card. 6. Transfer one drop of well mixed extract (or Positive Control, see Results must be evaluated in the light of other available clinical and Section 10) into the six separate circles next to the drop of latex laboratory information. Accurate results depend on testing an reagent. appropriate amount of growth. This is not usually a problem, however 7. Mix the contents of each circle using separate mixing sticks some strains of streptococci belonging to group D possess lower or and spread the liquid to cover the area of the circle. Do not use the negligible quantities of group antigen and some strains of group F may same mixing stick for more than one circle. be difficult to remove from the surface of agar plates. Antigen 8. Slowly and gently, rock and rotate the reaction card to mix the production in group D strains may be improved by culturing them on reagents for a maximum of one minute. agar supplemented with 0.5 to 1.0% glucose. This supplement does 9. Inspect the card for agglutination. If present, agglutination obscure demonstration of haemolysis but it may be considered in should be clearly visible with the naked eye. situations where it is important to resolve identification. INTERPRETATION OF RESULTS Growth of minute-colony strains may be improved by culture in a carbon dioxide enriched atmosphere. When, during the one minute reaction time, the latex particles aggregate into visible clumps, the result is positive for that suspension. If extract Streptococci from groups Q, R and S may also possess detectable contains high quantity of antigen, agglutination may be very rapid giving levels of group D antigen. large clumps. With weaker extracts agglutination may take longer to Antigens common to the streptococcal group antigens have been appear and give smaller clumps but there should be no difficulty described in a number of unrelated species. For example false positive distinguishing positive and negative reactions. reactions can occur with Eschericia, Klebsiella or Pseudomonas. These When the latex particles retain their original milky appearance, without are normally easily differentiated by cultural characteristics and cause no any significant aggregation, the result is negative for that suspension. confusion in streptococcal identification. Traces of indistinct aggregation should be ignored and considered negative. PERFORMANCE CHARACTERISTICS EXPECTED RESULTS The MICROGEN® Strep kit has been evaluated against a leading commercial latex kit as a reference for grouping Streptococci, using Colonies associated with beta-haemolysis: clinical samples at a number of independent sites. Overall Results are shown in Table 1. 1. Agglutination of a single latex reagent indicates the group identity of the strain. Table 1: Comparison of MICROGEN® Strep and a Commercial Latex Complimentary tests should be considered to confirm the results, in test for grouping of Streptococci. particular:  for group D strains, biochemical tests to differentiate MICROGEN® Strep Enterococcus species from group D streptococcus species (the + - former has relatively high antibiotic resistance).  for group A, C or G strains with minute colony morphology, + 607 55 contient un anticorps streptococcique de lapin du groupe F – latex Leading sensibilisé particules dans le tampon avec stabilisateur et azoture de Commercial Kit - 0 24 sodium à 0,099 % comme conservateur.

Sensitivity 607/662 = 92% M47g REAG G 2,5 ml Specificity 24/24 = 100% contient un anticorps streptococcique de lapin du groupe G – latex sensibilisé particules dans le tampon avec stabilisateur et azoture de Intra Batch reproducibility was evaluated by testing sensitivity of one sodium à 0,099 % comme conservateur. batch of each of the test latexes on ten separate occasions with three different operators against serial dilutions of reference M47p CONTROL + 1,0 ml antigens. End point titres varied by a maximum of one doubling Contrôle positif, contient un antigénique polyvalent inactivéextraits vers dilution from assay to assay. les groupes A, B, C, D, F et G conservés avec de l’azoture de sodium à 0,099 % Inter Batch Reproducibility was examined by testing sensitivity and specificity of 10 batches of product against serial dilutions of M47x ENZ 2 x 10 ml reference antigens. Between the batches variation in titres was a Enzyme d’extraction lyophilisé maximum of one doubling dilution of antigen and qualitative results correlated 100%. Cartes réactives et bâtonnets de mélange jetables

MATERIELS SUPPLEMENTAIRES REQUIS NON FOURNIS

Öses bactériologiques F Tubes à essai en verre ou en plastique. USAGE PREVU Pipette pour injecter des volumes de 0,4 ml. Bain-marie à 37°C. MICROGEN® Strep est un test d’agglutination rapide au latex sur lame Compte-gouttes ou pipettes de Pasteur. pour le regroupement de streptocoques des groupes Lancefield A, B, C, Compte-minutes de laboratoire. D, F et G prélevés sur des plaques de culture. La plupart des souches de streptocoques, qui ont été isolées à partir AVERTISSEMENTS ET MESURES DE SECURITE d’infections humaines, possèdent des antigènes propres à un groupe sérologique. L’identification des organismes inclut l’extraction et la 1. MICROGEN® Strep est destiné à un usage diagnostique in vitro caractérisation de ces antigènes provenant d’organismes élevés en uniquement. culture. Le système de regroupement streptococcique fournit un réactif 2. Ne pas utiliser les réactifs après la date de péremption indiquée sur enzyme pour extraire rapidement les antigènes hydrate de carbone et la trousse. une série de réactifs d’agglutination au latex, conçus pour les groupes A, 3. Ne pas contaminer les réactifs ou les échantillons par croisement. B, C, D, F et G afin de détecter et d’identifier rapidement les antigènes 4. Le test doit être effectué uniquement selon les instructions fournies extraits. avec la trousse. Ce produit est à usage professionnel uniquement. 5. Ne pas pipeter les échantillons ou les réactifs à la bouche. 6. Tous les échantillons et les cultures cliniques doivent être PRINCIPLE DU TEST considérés comme infectieux et donc manipulés et jetés selon des pratiques acceptées. Décontaminer les produits infectants avec Les particules de latex de la trousse MICROGEN® Strep sont une solution d'hypochlorite de sodium à une concentration finale de sensibilisées individuellement avec des anticorps de lapin propres à l’un 3 % pendant 30 minutes. des antigènes hydrate de carbone streptococciques des groupes A, B, 7. Les réactifs présents dans cette trousse contiennent 0,099 % C, D, F ou G. d’azoture de sodium agissant en tant que conservateur et devant Les colonies streptococciques prélevées sur les plaques de culture sont donc être manipulé avec soin. L’azoture de sodium peut précipiter incubées dans une solution d’enzyme afin d’extraire l’antigène. La au contact d’une tuyauterie en plomb et en cuivre pour former des préparation extrait/antigène est testée sur une carte réactive par rapport acides explosifs. Lors de la mise au rebut des réactifs, nettoyer à à six suspensions de particules de latex ayant des anticorps fixés sur grande eau pour prévenir une accumulation d’azoture. leur paroi, chacune étant propre à l'un des groupes A, B, C, D, F et G. En présence d’antigène homologue, les particules présentes dans l’une CONSERVATION des suspensions se rassembleront pour donner une agglutination visible par opposition aux autres suspensions, qui resteront non agglutinées. Conserver tous les réactifs à 2-8°C. Ne pas congeler. Les réactifs pourront ainsi être utilisés jusqu’à la date imprimée sur l’emballage. CONT KIT PRESENTATION L’enzyme d’extraction est stable pendant 3 mois après reconstitution s’il est conservé à 2-8°C. Pour prolonger sa durée de vie, il peut être Chaque trousse contient des réactifs pour 50 tests. La date de préparé dans des tubes à essai adéquats de 0,4 ml et conservé congelé péremption de chaque réactif est indiquée sur les étiquettes du flacon. à -20°C maximum (il sera ainsi stable pendant 6 mois). L’enzyme ne doit pas être congelé et décongelé plusieurs fois. M47a REAG A 2,5 ml contient un anticorps streptococcique de lapin dugroupeA – latex SIGNES DE DETERIORATION sensibilisé particules dans le tampon avec stabilisateur et azoture de sodium à 0,099 % comme conservateur. Suspecter une détérioration des réactifs si  L’agglutination de réactifs latex est évidente et ne peut pas M47b REAG B 2,5 ml être annulée en les secouant vigoureusement pendant quelques contient un anticorps streptococcique de lapin du groupe B – latex secondes. sensibilisé particules dans le tampon avec stabilisateur et azoture de  Le contrôle positif ou l’enzyme d’extraction se trouble ou se sodium à 0,099 % comme conservateur. dépose.  Le contrôle positif ne parvient pas à agglutiner un ou plusieurs réactifs latex dans le temps de réaction imparti.  L’enzyme d’extraction non inoculé entraîne l’agglutination des réactifs latex. M47c REAG C 2,5 ml contient un anticorps streptococcique de lapin du groupe C – latex Ne pas utiliser de réactifs présentant des signes de détérioration. sensibilisé particules dans le tampon avec stabilisateur et azoture de sodium à 0,099 % comme conservateur. PREPARATION DES CULTURES ET DES ECHANTILLONS

M47d REAG D 2,5 ml Ce test porte sur les colonies possédant l'apparence et les contient un anticorps streptococcique de lapin du groupe D – latex caractéristiques de croissance des streptocoques, après une croissance sensibilisé particules dans le tampon avec stabilisateur et azoture de de nuit sur un milieu de culture de laboratoire courant. Pour de plus sodium à 0,099 % comme conservateur. amples informations sur la collecte et la manipulation des échantillons et sur le choix, l’inoculation et l’incubation du milieu de culture, consulter un M47f REAG F 2,5 ml manuel. Les colonies peuvent être prélevées sur des plaques de culture species (l’ancienne souche présentait une résistance aux antibiotiques primaires, ou provenir de sous-cultures pures, pour être testées le jour relativement élevée). suivant l’inoculation du milieu.  pour les souches du groupe A, C ou G présentant une Ne pas utiliser de cultures conservées. Les propriétés hémolytiques de morphologie de colonie minute, procéder à des tests biochimiques la culture jouent un rôle important dans l’identification de cette culture et pour confirmer l’identification de S.milleri / S.anginosus. il est donc essentiel de déterminer si la croissance qui servira de base 2. L’agglutination de plusieurs réactifs latex indique la possibilité d’une de test provient du milieu sanguin. croissance mixte d’organismes appartenant à différents groupes ou la présence d’une souche avec plusieurs groupes (par exemple, CONTROLES certains streptocoques du groupe D possédant également un antigène du groupe G). Tester le contrôle positif à intervalles réguliers pour s’assurer que les Procédures complémentaires à effectuer : réactifs fonctionnent correctement.  sous-culture afin d’obtenir des isolats purs pour procéder à Le contrôle est fourni prêt à l’emploi et doit être testé à la place de un nouveau test. l’extrait de culture lors de la procédure de test. Le contrôle positif doit  pour les souches comportant un antigène des groupes D et agglutiner tous les réactifs latex test. En cas de non agglutination, il est G, procéder à des tests biochimiques pour différencier probable que le réactif latex soit détérioré. Enterococcus species du groupe D du streptococcus species (les souches Enterococcus comportant ces deux antigènes Si un contrôle négatif est requis, tester l’enzyme d’extraction non inoculé peuvent développer une résistance plus forte aux antibiotiques à la place de l'extrait de culture lors de la procédure de test. que celles comprenant uniquement l’antigène du groupe D). 3. L’agglutination de tous les réactifs latex peut indiquer une PROCEDURE DE TEST inoculation excessive de la culture à l’enzyme d’extraction ou une contamination de la culture test par des organismes entraînant une Laisser les réactifs MICROGEN® Strep atteindre la température agglutination non spécifique des particules de latex (ces particules ambiante avant utilisation sont généralement faciles à reconnaître de par leurs caractéristiques de croissance). Procéder comme suit pour chaque organisme à regrouper Procédures complémentaires à effectuer : 1. Laisser les réactifs latex et le contrôle positif atteindre la  faire bouillir le reste d’extrait pendant deux ou trois minutes, température ambiante. puis le refroidir et le tester à nouveau afin d’obtenir des 2. Quelques instants avant utilisation, reconstituer un flacon d’enzyme résultats nets. en ajoutant 10 ml d’eau distillée. Mélanger doucement pour  répéter le test en inoculant une quantité moindre d’enzyme assurer une reconstitution complète. Remplir un tube à essai avec d’extraction. 0,4 ml d’enzyme d’extraction.  réaliser une sous-culture afin d’obtenir des isolats purs 3. Prélever des colonies streptococciques à la surface de l’agar à susceptibles d’être testés de nouveau. l’aide d’une öse bactériologique et les émulsionner complètement 4. Une absence d’agglutination significative des réactifs latex indique dans l'enzyme d'extraction. Pour obtenir les meilleurs résultats soit qu’aucun streptocoque du groupe A, B, C, D, F ou G n’était possibles, prélever au moins 4 ou 5 colonies de taille moyenne présent dans l’échantillon test, soit qu’ils étaient présents dans une ou leur équivalent pour extraction. Une inoculation excessive de quantité inférieure au seuil de sensibilité du test. l’enzyme d’extraction peut entraîner une agglutination non Procédures complémentaires à effectuer : spécifique (voir la section 13.1.3). Pour des souches de colonies  procéder à un nouveau test avec un inoculum moins minutes, recourir à un balayage de croissance. important, tout particulièrement en cas de quasi-certitude de la 4. Incuber le tube pendant 10 à 15 minutes dans un bain-marie à présence de streptocoques du groupe D ou F. 37°C. Secouer le tube après les cinq premières minutes  les streptocoques beta-hémolytiques qui ne se regroupent d'incubation puis le secouer vigoureusement avant le test pour pas peuvent être identifiés grâce à obtenir une suspension uniforme des antigènes. des procédures de test biochimiques, si besoin est. 5. Secouer vigoureusement les réactifs latex pendant quelques secondes pour obtenir une suspension uniforme. Verser une Colonies non associées à une béta-hémolyse : goutte de chaque réactif latex séparément en six cercles sur une carte réactive. L’agglutination d’un seul réactif latex indiquant la présence de 6. Ajouter une goutte de l’extrait bien mélangé (ou du contrôle streptocoques du groupe B ou D permet d’identifier la souche de positif, voir la section 10) dans les six cercles distincts en regard de manière fiable. La présence de streptocoques du groupe A, C, F ou G la goutte de réactif latex. peut n’avoir aucune influence sur l’identification de la souche ; il est donc 7. Mélanger le contenu de chaque cercle à l’aide de bâtonnets de nécessaire d’utiliser d’autres méthodes d'identification. mélange distincts et verser le liquide jusqu’à recouvrir tout le cercle. Ne pas utiliser le même bâtonnet de mélange pour Procédures complémentaires à effectuer : plusieurs cercles. si l’on obtient des streptocoques du groupe D, procéder à 8. Lentement et doucement, remuer et tourner la carte réactive une différenciation biochimique entre Enterococci et les pour mélanger les réactifs pendant un maximum d’une minute. streptocoques du groupe D (voir ci-dessus). 9. Examiner la carte pour détecter une agglutination. Si l’agglutination s’est faite, elle doit être visible à l’oeil nu. Toute autre combinaison de résultats doit être interprétée à l’aide des informations susmentionnées. INTERPRETATION DES RESULTATS LIMITE DE LA PROCEDURE Lorsque, pendant la minute que dure le temps de réaction, les particules Les résultats doivent être évalués à la lumière des autres informations de latex se rassemblent pour former un amas visible, le résultat de cette cliniques et de laboratoire disponibles. La fiabilité des résultats dépend suspension est positif. Si l’extrait contient une forte quantité d’antigènes, de l'adéquation de la quantité de croissance à tester. Ce n’est l’agglutination peut être très rapide et produire des amas importants. généralement pas un problème, toutefois certaines souches de Lorsque les extraits sont moins denses, l’agglutination peut être plus streptocoques appartenant au groupe D possèdent des quantités lente et produire des amas de taille moindre, mais les réactions positives moindres ou négligeables d’antigène et certaines souches du groupe F et négatives sont faciles à distinguer. peuvent s’avérer difficiles à retirer de la surface des plaques d’agar. La Lorsque les particules de latex gardent leur aspect laiteux initial, sans production d’antigène dans les souches du groupe D peut être agrégation significative, le résultat de cette suspension est négatif. Les augmentée en cultivant ces souches sur de l’agar complété avec 0,5 % traces d’agrégation indistincte doivent être ignorées et considérées à 1,0 % de glucose. Ce supplément ne complique pas la démonstration comme négatives. de l’hémodialyse, mais il peut être pris en considération dans des situations où il s’avère important d'identifier les souches. RESULTATS ATTENDUS La croissance de souches de colonies minute peut être améliorée dans Colonies associées à une béta-hémolyse : une atmosphère enrichie en dioxyde de carbone. 1. L’agglutination d’un seul réactif latex indique l’identité de groupe de Les streptocoques appartenant aux groupes Q, R et S peuvent la souche. également comporter des niveaux détectables d’antigènes du groupe D. Procéder à des tests complémentaires pour confirmer les résultats, Les antigènes communs aux antigènes streptococciques ont été décrits en particulier : dans plusieurs espèces sans rapport les unes avec les autres. Par  pour les souches du groupe D, procéder à des tests biochimiques exemple, des réactions faussement positives peuvent se produire avec pour différencier Enterococcus species du groupe D de streptococcus Eschericia, Klebsiella ou Pseudomonas. Ces réactions peuvent M47c REAG C 2,5 mL généralement être facilement différenciées par leurs caractéristiques contiene particelle di lattice sensibilizzate con anticorpi di coniglio anti- culturelles et n’entraînent aucune confusion quant à l’identification streptococco di Gruppo C in tampone, con stabilizzatore e azide sodica streptococcique. allo 0,099% come conservante.

CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCE M47d REAG D 2,5 mL contiene particelle di lattice sensibilizzate con anticorpi di coniglio anti- La trousse MICROGEN® Strep a été évaluée par rapport à une trousse streptococco di Gruppo D in tampone, con stabilizzatore e azide sodica latex courante vendue dans le commerce en tant que référence pour le allo 0,099% come conservante. regroupement des streptocoques, à l’aide d’échantillons cliniques sur plusieurs sites indépendants. Le tableau 1 présente les résultats M47f REAG F 2.5mL généraux obtenus. contiene particelle di lattice sensibilizzate con anticorpi di coniglio anti- streptococco di Gruppo F in tampone, con stabilizzatore e azide sodica Tableau 1 : Comparaison de la trousse MICROGEN® Strep et d’un allo 0,099% come conservante. test latex commercial pour le regroupement des streptocoques. M47g REAG G 2,5 mL MICROGEN® Strep contiene particelle di lattice sensibilizzate con anticorpi di coniglio anti- + - streptococco di Gruppo G in tampone, con stabilizzatore e azide sodica allo 0,099% come conservante. + 607 55 Trousse courante - M47p CONTROL + 1.0mL Vendue dans le 0 24 Controllo positivo, contiene estratti antigenici polivalenti inattivati relativi commerce ai gruppi A, B, C, D, F e G, conservati con azide sodica allo 0,099%.

Sensibilité 607/662 = 92 % M47x ENZ 2 x 10mL Spécificité 24/24 = 100 % Enzima per estrazione liofilizzato.

La reproductibilité intra-lots a été évaluée en testant la sensibilité d’un Cartoncini reattivi monouso e bacchette per la miscelazione monouso. lot de chaque latex test à dix occasions différentes avec trois opérateurs différents par rapport à des suspensions-dilutions ULTERIORE MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO d’antigènes de référence. Les concentrations au point de virage variaient d’une dilution double d’un dosage à l’autre. Anse batteriologiche Provette in vetro o in plastica. La reproductibilité intra-lots a été examinée en testant la sensibilité et Pipette per distribuire volumi da 0,4ml. la spécificité de 10 lots de produit par rapport à des suspensions- Bagnomaria regolato a 37°C. dilutions d’antigènes de référence. La variation de concentration Contagocce per i campioni o pipette Pasteur. entre les lots équivalait à une dilution double d’antigène maximum Timer da laboratorio. et les résultats qualitatifs correspondaient à 100 %. AVVERTENZE E PRECAUZIONI

I 1. MICROGEN® Strep è esclusivamente per uso diagnostico in vitro. 2. Non utilizzare i reagenti dopo la data di scadenza dichiarata USO PREVISTO I sull’etichetta del contenitore del kit. MICROGEN® Strep è un test rapido di agglutinazione al lattice su 3. Non contaminare uno con l’altro i reagenti o i campioni. vetrino per l’attribuzione al gruppo di appartenenza degli Streptococchi 4. Eseguire il test solo in conformità con le istruzioni fornite con il kit. dei gruppi di Lancefield A, B, C, D, F e G da piastre di coltura. 5. Non pipettare i campioni o i reagenti con la bocca. La maggior parte dei ceppi di streptococchi, isolati da infezioni umane, 6. Tutti i campioni clinici e le colture devono essere considerati infetti possiedono antigeni specifici per gruppi sierologici. L’identificazione e maneggiati e smaltiti secondo le procedure approvate. Per la degli organismi comprende l’estrazione e la caratterizzazione di questi decontaminazione del materiale infetto utilizzare ipoclorito di sodio antigeni dagli organismi cresciuti in coltura. Il sistema per l’attribuzione a una concentrazione finale del 3% per 30 minuti. degli streptococchi al gruppo di appartenenza fornisce un reagente 7. Come conservante i reagenti del kit contengono azide sodica allo enzimatico per l’estrazione rapida degli antigeni polisaccaridi e una serie 0,099%, che deve essere maneggiata con cautela. L’azide sodica di reagenti per l’agglutinazione al lattice, specifici per i gruppi A, B, C, D, può reagire con le tubature in piombo e in rame e formare azidi F e G, per l’individuazione e l’identificazione rapida degli antigeni estratti. esplosive. Eliminare il materiale sciacquando con abbondante Il prodotto è solo per uso professionale. acqua per evitare l’accumulo di azide.

PRINCIPIO DEL TEST CONSERVAZIONE

Le particelle di lattice del kit MICROGEN® Strep vengono sensibilizzate Conservate tutti i reagenti a 2-8°C. Non congelare. A queste condizioni una per una con anticorpi di coniglio specifici per uno degli antigeni è possibile utilizzare i reagenti fino alla data stampata sull’etichetta del polisaccaridi degli Streptococchi dei gruppi di A, B, C, D, F o G. contenitore esterno. L’Enzima di Estrazione è stabile per 3 mesi dopo la Le colonie di Streptococchi dalle piastre di coltura vengono incubate in ricostituzione se conservato a 2-8°C. Per prolungare la durata una soluzione enzimatica per estrarre l’antigene. La preparazione con dell’enzima lo si può dispensare in provette adatte in volumi di 0,4 mL e l’antigene estratto viene esaminata su un cartoncino reattivo rispetto a conservare congelato, ad almeno -20°C, temperatura alla quale rimarrà sei sospensioni di particelle di lattice rivestite di anticorpi, ciascuna stabile per 6 mesi. Non congelare e scongelare l’enzima più di una specifica per uno dei gruppi A, B, C, D, F e G. In presenza dell’antigene volta. omologo, le particelle in una delle sospensioni si aggregano dando un’agglutinazione visibile in contrasto con le altre sospensioni, che INDICI DI DETERIORAMENTO rimangono non agglutinate. Si deve sospettare il deterioramento dei reagenti se: CONT  Si nota un’agglutinazione dei reagenti al lattice che non si riesce a eliminare agitando energicamente per qualche Ogni kit contiene reagenti sufficienti per 50 test. La data di scadenza di secondo. ciascun reagente è indicata sulle etichette delle fiale.  Il Controllo Positivo o l’Enzima di Estrazione diventano torbidi o formano un sedimento. M47a REAG A 2,5mL  Non si riesce a provocare l’agglutinazione di uno o più reagenti contiene particelle di lattice sensibilizzate con anticorpi di coniglio anti- al lattice con il Controllo positivo entro il tempo di reazione streptococco di gruppo Ain tampone con stabilizzatore e azide sodica consigliato. allo 0,099% come conservante.  L’Enzima di Estrazione non inoculato provoca l’agglutinazione di uno qualunque dei reagenti al lattice. M47b REAG B 2,5 mL contiene particelle di lattice sensibilizzate con anticorpi di coniglio anti- Non utilizzare i reagenti che mostrano segni di deterioramento. streptococco di Gruppo B in tampone, con stabilizzatore e azide sodica allo 0,099% come conservante. PREPARAZIONE DELLE COLTURE E DEI CAMPIONI Il test è stato ideato per l’analisi di colonie che presentino le RISULTATI ATTESI caratteristiche morfologiche e di accrescimento degli streptococchi, dopo una notte di crescita negli abituali mezzi di coltura di laboratorio. Per i Colonie con beta-emolisi: particolari relativi alla raccolta e al trattamento dei campioni e alla scelta dell’inoculazione e incubazione dei mezzi di coltura consultare un 1. L’agglutinazione di un singolo reagente al lattice indica l’identità di manuale standard. gruppo del ceppo. Si possono prelevare le colonie dalle piastre di coltura primarie oppure A conferma del risultato va considerata l’esecuzione di test da subcolture pure, da esaminare il giorno seguente all’inoculo del complementari, in particolare: mezzo.  per i ceppi di gruppo D, test biochimici per differenziare Non utilizzare colture conservate. Le proprietà emolitiche della coltura Enterococcus species dalle specie di streptococco del sono importanti ai fini dell’identificazione ed è necessario determinarle gruppo D (il primo presenta un livello piuttosto alto di indipendentemente dal fatto che la crescita sottoposta all’esame tragga resistenza gli antibiotici). origine da un mezzo a base di sangue.  per i ceppi di gruppo A, C o G con una morfologia a colonie CONTROLLI minute, test biochimici per confermare l’identificazione di S.milleri / S.anginosus . E’ necessario analizzare regolarmente il Controllo Positivo per 2. L’agglutinazione di più di un reagente al lattice indica la possibile assicurarsi del corretto funzionamento dei reagenti. crescita mista di organismi appartenenti a gruppi differenti o la Il controllo è fornito pronto per l’uso e deve essere analizzato al posto presenza di un ceppo con antigeni di più di un gruppo (per dell’estratto della coltura secondo la procedura del Test. Il Controllo esempio alcuni streptococchi di gruppo D che possiedono anche Positivo deve dare agglutinazione con tutti i Reagenti al Lattice del test. l’antigene del gruppo G). L’incapacità del Controllo Positivo di fornire un modello di agglutinazione Ulteriori procedure da prendere in considerazione: deve far pensare a un deterioramento del reagente al lattice.  eseguire delle subcolture per ottenere isolati puri per la ripetizione del test. Se si desidera un controllo negativo, esaminare l’Enzima di Estrazione  per i ceppi con antigeni del gruppo D e del gruppo G, test non inoculato al posto dell’estratto della coltura secondo la procedura biochimici per differenziare Enterococcus species dalle specie del test. di streptococchi del gruppo D (i ceppi di Enterococcus con entrambi questi antigeni possono essere più resistenti agli PROCEDURA DEL TEST antibiotici di quelli con il solo antigene del gruppo D). 3. L’agglutinazione di tutti i reagenti al lattice può indicare un inoculo ® Lasciare che i reagenti del MICROGEN Strep raggiungano la eccessivo di coltura nell’Enzima di Estrazione o la contaminazione temperatura ambiente prima dell’uso. della coltura del test con organismi che provocano un’agglutinazione aspecifica delle particelle di lattice (di solito Procedere nel modo seguente per ogni organismo da attribuire a un facilmente riconoscibili in base alle caratteristiche della crescita). gruppo Ulteriori procedure da prendere in considerazione: 1. Lasciare che i reagenti al Lattice e il controllo positivo raggiungano  la bollitura per due o tre minuti di ciò che resta dell’estratto, la temperatura ambiente. il suo raffreddamento e la ripetizione del test possono portare a 2. Appena prima dell’uso, ricostituire una boccetta di enzima risultati più chiari. aggiungendo 10 mL di acqua distillata. Miscelare delicatamente  ripetere il test con un inoculo ridotto dell’Enzima di per garantire una completa ricostituzione. Dispensare in una Estrazione. provetta 0,4 mL di Enzima di Estrazione.  eseguire delle subcolture per ottenere isolati puri che 3. Prelevare le colonie di Streptococchi dalla superficie dell’agar possano essere sottoposti nuovamente al test. utilizzando un’ansa batteriologica ed emulsionarle accuratamente 4. Se nessuno dei reagenti al lattice presenta un’agglutinazione nell’Enzima di Estrazione. Per ottimizzare i risultati, per l’estrazione significativa, ciò indica l’assenza di streptococchi di gruppo A, B, C, prelevare almeno 4 o 5 colonie di media grandezza o il loro D, F o G dal campione del test o la loro presenza in quantità equivalente. Un’inoculazione eccessiva dell’enzima di estrazione inferiore alla soglia di sensibilità del test. può provocare un’agglutinazione aspecifica (vedere 13.1.3). Per i ceppi che formano colonie minute è necessaria una raccolta a Ulteriori procedure da prendere in considerazione: tappeto della crescita.  ripetere il test con un inoculo maggiore, soprattutto se si 4. Incubare la provetta per 10-15 minuti a bagnomaria a 37°C. sospetta la presenza di streptococchi del gruppo D o del gruppo Agitare la provetta dopo i primi 5 minuti di incubazione e agitarla F. energicamente prima di esaminarla per ottenere una sospensione  se necessario è possibile identificare gli streptococchi beta- omogenea dell’antigene. emolitici che non appartengono ad alcun gruppo attraverso 5. Agitare energicamente per qualche secondo i reagenti al Lattice l’esecuzione di test biochimici. per ottenere una sospensione omogenea. Dispensare una goccia di ciascun reagente al Lattice separatamente in sei cerchi su un Colonie senza beta-emolisi: cartoncino reattivo. 6. Trasferire una goccia di estratto ben miscelato (o di Controllo L’agglutinazione di un singolo reagente al lattice che indica un Positivo, vedere la Sezione 10) nei sei diversi cerchi accanto alla risultato di gruppo B o D fornisce un’identificazione affidabile del goccia di reagente al lattice. ceppo. Se il risultato indica un gruppo A, C, F o G può non essere 7. Miscelare il contenuto di ciascun cerchio utilizzando una rilevante ai fini dell’identificazione del ceppo e sono necessari altri diversa bacchetta per la miscelazione e spargere il liquido fino a metodi di identificazione. coprire la superficie del cerchio. Non utilizzare la stessa bacchetta per la miscelazione per più di un cerchio. Ulteriori procedure da prendere in considerazione: 8. Far oscillare e ruotare il cartoncino reattivo lentamente e delicatamente per un minuto al massimo per miscelare i reagenti. se il risultato indica il gruppo D, differenziazione biochimica 9. Esaminare il cartoncino alla ricerca dell’agglutinazione. Se tra Enterococchi e Streptococchi di gruppo D (vedere sopra). presente, l’agglutinazione deve essere ben visibile a occhio nudo. Tutti gli altri possibili risultati vanno interpretati tenendo conto delle informazioni fin qui fornite. INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI LIMITI DELLA PROCEDURA Quando, durante il minuto di tempo della reazione, le particelle di lattice di aggregano in agglomerati visibili, il risultato è positivo per quella I risultati devono essere valutati alla luce delle altre informazioni sospensione. Se l’estratto contiene quantità elevate di antigene, disponibili, cliniche e di laboratorio. La correttezza dei risultati dipende l’agglutinazione può essere molto rapida e dare luogo a grossi dall’analisi di una quantità adeguata di crescita. Di solito ciò non agglomerati. Con estratti più deboli l’agglutinazione può necessitare di costituisce un problema, d’altra parte alcuni ceppi di streptococchi più tempo per manifestarsi e può dare luogo ad agglomerati più piccoli appartenenti al gruppo D possiedono quantità ridotte o trascurabili ma non dovrebbero esserci difficoltà a distinguere le reazioni positive e dell’antigene di gruppo e per alcuni ceppi del gruppo F ci può essere quelle negative. una certa difficoltà a rimuoverli dalla superficie della piastre di agar. La Quando le particelle di lattice mantengono il loro aspetto lattescente produzione dell’antigene nei ceppi del gruppo D può essere migliorata iniziale, senza aggregazione significativa, il risultato per quella facendoli crescere su agar con l’aggiunta di glucosio allo 0,5-1,0%. sospensione è negativo. Tracce di agglutinazione indistinta devono L’aggiunta impedisce la dimostrazione dell’emolisi ma può essere presa essere ignorate e considerate negative. in considerazione nelle situazioni in cui sia importante arrivare all’identificazione. Cada kit contiene reactivo suficiente para 50 test. La fecha de La crescita di ceppi a colonie minute può essere migliorata ponendo la vencimiento de cada reactivo está indicada en la etiqueta de cada vial. coltura in atmosfera arricchita di anidride carbonica. M47a REAG A 2.5mL Anche gli streptococchi dei gruppi Q, R ed S possono avere livelli Contiene partículas de látex sensibilizado con anticuerpos de Strep individuabili di antigene del gruppo D. Grupo A de conejo, en buffer con estabilizador y azida sódica al 0,099% In diverse specie non correlate sono stati descritti antigeni comuni agli como conservante. antigeni di gruppo degli streptococchi. Per esempio si possono avere reazioni falsamente positive con l’Escherichia, la Klebsiellao lo M47b REAG B 2.5mL Pseudomonas. Questi vengono di solito differenziati con facilità in base Contiene partículas de látex sensibilizado con anticuerpos de Strep alle caratteristiche colturali e non provocano errori nell’identificazione Grupo B de conejo, en buffer con estabilizador y azida sódica al 0,099% degli streptococchi. como conservante.

CARATTERISTICHE DELLE PRESTAZIONI M47c REAG C 2.5mL Contiene partículas de látex sensibilizado con anticuerpos de Strep Il kit MICROGEN® Strep è stato valutato nei confronti di uno dei test al Grupo C de conejo, en buffer con estabilizador y azida sódica al 0,099% lattice più diffusi in commercio come riferimento per l’attribuzione degli como conservante. Streptococchi al gruppo di appartenenza, utilizzando campioni clinici presso diversi centri indipendenti. I risultati complessivi sono riportati M47d REAG D 2.5mL nella Tabella 1. Contiene partículas de látex sensibilizado con anticuerpos de Strep Grupo D de conejo, en buffer con estabilizador y azida sódica al 0,099% Tabella 1: Confronto tra il MICROGEN® Strep e un test al Lattice in como conservante. commercio per l’attribuzione degli Streptococchi al gruppo di appartenenza. M47f REAG F 2.5mL MICROGEN® Strep Contiene partículas de látex sensibilizado con anticuerpos de Strep + - Grupo F de conejo, en buffer con estabilizador y azida sódica al 0,099% como conservante. + 607 55 Uno dei più diffusi M47g REAG G 2.5mL kit in commercio - 0 24 Contiene partículas de látex sensibilizado con anticuerpos de Strep Grupo G de conejo, en buffer con estabilizador y azida sódica al 0,099% Sensibilità = 92% (607/662) como conservante. Specificità = 100% (24/24) M47p CONTROL + 1.0mL La riproducibilità intra-lotto è stata valutata analizzando la sensibilità Control positivo, contiene extractos antigénicos polivalentes inactivados di un lotto di ciascuno dei lattici del test in dieci occasioni diverse a los grupos A,B,C,D,F y G conservados con 0.099% de azida sódica. con tre differenti operatori nei confronti di diluizioni seriate di antigeni di riferimento. Il punto finale delle titolazioni raggiunte M47x ENZ 2 x 10mL variava al massimo di una diluizione tra una prova e l’altra. Enzima de extracción liofilizada.

La riproducibilità inter-lotti è stata esaminata analizzando la Tarjetas de reacción y palitos agitadores descartables. sensibilità e la specificità di 10 lotti di prodotto nei confronti di diluizioni seriate di antigeni di riferimento. Tra i lotti le variazioni MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO PROVISTOS dei titoli sono state al massimo di una diluizione dell’antigene e la Ansas bacteriológicas correlazione dei risultati qualitativi è stata del 100%. Tubos plásticos o de vidrio Pipetas para dispensar volúmenes de 0.4ml. Baño termostatizado a 37°C. Pipetas Pasteur o goteros. Timer. E PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS 1. MICROGEN® Strep es para diagnóstico in vitro solamente. 2. No usar los reactivos después de la fecha de vencimiento impresa en el envase. USO PREVISTO 3. No intercambiar reactivos de diferentes equipos o lotes. MICROGEN® Strep es una prueba rápida de aglutinación de látex para 4. Las pruebas deben realizarse siguiendo las instrucciones impresas la detección y tipificación de los grupos de Estreptococos de Lancefield que se acompañan a tal fin en cada kit. A,B,C,D,F y G, previo cultivo selectivo. 5. No pipetear muestras o reactivos con la boca. La mayoría de las cepas de Estreptococos, que han sido aisladas de 6. Todas las muestras clínicas deben ser consideradas infecciosas, y infecciones humanas, poséen antígenos específicos sexológicos de deben ser manipuladas siguiendo las normas de bioseguridad grupos. La identificación de estos organismos incluye la extracción y vigentes. El kit incluye extractos bacterianos, los cuales deben caracterización de estos antígenos, de los organismos crecidos en el manipularse como si fueran infecciosos. La decontaminación de medio de cultivo. El kit MICROGEN® Strep provee un reactivo material potencialmente infeccioso debe ser realizada con enzimático que posibilita una rápida extracción de los antígenos de hipoclorito de sodio a una concentración final del 3 % por 30 carbohidratos, y una serie de reactivos de látex específicos de los minutos. grupos A, B, C, D, F y G, que permite una rápida detección e 7. Los reactivos de este kit contienen 0,099% de azida sódica como identificación de los antígenos extraídos. La prueba no requiere de conservante, por lo que hay que manejarlo con sumo cuidado. La equipamientos especiales y el resultado se puede obtener dentro de los azida sódica puede reaccionar con explosión con el plomo de las 15 minutos, una vez aislado el microorganismo. Este producto es para cañerías. Dejar fluir abundante cantidad de agua cuando se uso profesional únicamente. descartan estos reactivos, para impedir la formación de sales de azida. PRINCIPIO DEL TEST Las partículas de látex del kit MICROGEN® Strep están individualmente CONSERVACION sensibilizadas con anticuerpos de conejo específicos a uno de los Conservar los reactivos entre 2-8° C. No congelar. Bajo estas antígenos de strepcococos de carbohidratos de los grupos A, B, C, D, F condiciones, los reactivos podrán ser usados hasta la fecha de o G. Las colonias de Estreptococos de las placas de cultivo son vencimiento impresa en el envase. El reactivo de extracción enzimático incubadas en una solución enzimática para extraer el antígeno. La es estable por 3 meses a partir de su reconstitución, si se conserva preparación de Extracto / Antígeno es testeada sobre una tarjeta de entre 2-8° C. Para obtener una vida útil prolongada, la enzima puede reacción con seis suspensiones de partículas de látex que tienen ser fraccionada en tubos de ensayo con tapa a rosca de 0.4mL de pegado el anticuerpo, cada una específica para cada grupo volumen cada uno, y conservada en frizer a -20° C o menos, y será A, B, C, D, F y G. En presencia de antígeno homólogo, partículas en estable por 6 meses. La enzima no podrá ser congelada y una de las suspensiones se agregarán, dando una aglutinación visible, descongelada más de una vez. en contraste con las otras suspensiones, que no aglutinarán INDICACIONES DE DETERIORO CONT PRESENTACION DEL KIT Se deben sospechar el deterioro de los reactivos si:  Se observan grumos en alguno de los reactivos de latex que Colonias asociadas con beta-hemolisis: no desaparecen por agitación vigorosa durante unos 1. Aglutinación de un reactivo de latex indica el grupo de identificación segundos. de la cepa.  El control positivo o la enzima de extracción se vuelve opaca o Estudios complementarios deben ser considerados para confirmar el forma sedimento. resultado, en particular:  El control positivo no logra causar aglutinación de uno o más  para cepas del grupo D, test bioquímicos para diferenciar reactivos de latex en el tiempo de reacción recomendado. especies de Enterococcus del groupo D de especies de  La enzima de extracción no inoculada causa aglutinación de streptococcus (Alta resistencia antibiótica). alguno de los reactivos de latex.  para cepas de groupos A, C o G con morfologia de colonia Cuando los reactivos muestran signos de deterioro, no se deben usar. minuto, test bioquímicos para confirmar identificación de S.milleri / S.anginosus PREPARACION DE MUESTRAS Y CULTIVOS 2. La aglutinación de más de un latex, indica la posibilidad de Esta prueba está diseñada para la identificación de colonias que tienen crecimientos mezclados de microorganismos de diferentes grupos, la apariencia y crecimiento característicos de Estreptococos, después o la presencia de cepas con más de un grupo (ej. Algunos de una incubación durante la noche, en medios de cultivo de rutina en el Estreptococos del grupo D que además poseen antígeno del grupo laboratorio. Para detalles concernientes a toma y manejo de las D). muestras, y la selección, inoculación e incubación de medios de cultivo, Los siguientes procedimientos se deben seguir: deberá consultarse libros de texto stándares. Las colonias pueden  subcultivo para obtener aislamientos puros para retestear. tomarse de cultivos primarios, o de subcultivos puros, al día siguiente a  para cepas del grupo D con antígeno del grupo D, test la inoculación del medio. No deben usarse cultivos viejos, almacenados bioquímicos deben hacerse para diferenciar especies de de varios días. Las propiedades hemolíticas del cultivo son importantes Enterococcus de especies del grupo D (cepas de Enterococcus para su identificación y por lo tanto se deberá determinar si la muestra con estos dos antígenos pueden tener una mayor resistencia fué tomada a partir del cultivo en un medio base sangre. antibiótica que las que tienen antígeno del grupo D solamente). 3. La aglutinación de todos los reactivos de latex pueden indicar un CONTROLES exceso de inóculo del cultivo de la enzima de extracción, o de El control positive debe ser testeado regularmente, para asegurarse que contaminación del test de cultivo con microorganismos que causan los reactivos funcionan correctamente. El control viene listo para usar, y una aglutinación no específica de las partículas de latex puede ser usado en lugar del extracto del cultivo en el procedimiento de (Normalmente, esto es simple de reconocer por las características un test. El control positivo debe dar aglutinación con todos los reactivos de crecimiento) de latex. Fallas en el control positivo en dar una adecuada aglutinación, Los siguientes procedimientos se deben seguir: son evidencia del deterioro del reactivo de latex.  hervir el remanente del extracto por 2 o 3 minutos, dejar Si se desea un control negativo, la enzima de extracción no inoculada enfriar y retestear. puede ser testeada en lugar del extracto de cultivo en el procedimiento  repetir el test usando una menor cantidad de inóculo de la de un test. enzima de extracción.  subcultivo para obtener aislamientos puros para retestear. PROCEDIMIENTO DEL TEST 4. Aglutinación no significativa en alguno de los reactivos de latex Ponga los reactivos del kit MICROGEN® Strep a temperature ambiente indica que no están presentes Estreptococos de los grupos A, B, antes de usarlos. C, D, F o G streptococci o están presentes por debajo de la Proceda de la siguiente manera con cada organismo a ser tipificado: sensibilidad del kit. 1. Ponga los reactivos de latex y el control positivo a temperatura Los siguientes procedimientos se deben seguir: ambiente  retestear usando un mayor inóculo, particularmente si se 2. Justo antes de usar, reconstituya un vial de la enzima sospechan Estreptococos del grupo D o del F. agregándole 10mL de agua destilada. Agite para asegurarse la  Estreptococos beta-hemolíticos sin grupo, pueden ser completa reconstitución. Dispense 0.4mL de la enzima de identificados usando pruebas bioquímicas de ser necesario. extracción dentro de un tubo de prueba. 3. Tome colonias de Estreptococos de la superficie del agar Colonias no asociadas a beta-hemólisis: usando un ansa, y emulsifíquelas en la enzima de extracción. La aglutinación de un solo reactivo de latex mostrando un resultado del Para obtener los mejores resultados, tome al menos 4 o 5 grupo B o D da una idea de identificación de la cepa. Si el resultado es colonies o su equivalente para extracción. Excesiva inoculación del grupo A, C, F, o G, no debería ser relevante la identificación de la de la enzima de extracción puede causar una aglutinación no cepa, y otros métodos de identificación serán necesarios. específica (ver 13.1.3). Los siguientes procedimientos se deben seguir: 4. Incube el tubo por 10 a 15 minutos a 37°C en baño de agua.  si el resultado es grupo D, diferenciación bioquímica se Mezcle el tubo después de los primeros 5 minutos de debe realizar entre Enterococo y streptococo del grupo D (ver abajo). incubación, y agite vigorosamente antes de testearlo para Cualquier otra combinación de resultados, debe ser interpretada obtener una suspensión del antígeno. usando la información provista más adelante. 5. Vigorosamente, agite los viales de latex por algunos segundos para obtener una suspensión homogenea. Dispense una gota LIMITACION DEL PROCEDIMIENTO de cada reactivo de latex separadamente, en los seis círculos Los resultados deben ser evaluados a la luz de de otras informaciones de la tarjeta de reacción. del laboratorio y clínicas. Resultados precisos dependen del testeo y de 6. Transfiera una gota del extracto bien mezclado (o del Control un desarrollo apropiado. Algunas cepas de Estreptococos del grupo D Positivo, ver Sección 10) separadamente dentro de los 6 contienen una baja carga de antígeno del grupo D, y algunas cepas del círculos, al lado de las gotas del reactivo de latex. grupo F pueden ser dificultosas para remover de la superficie de la 7. Mezcle el contenido de cada círculo usando un palito placa de agar. La producción de antígeno del grupo D puede mejorarse agitador diferente para cada uno y desparrame el líquido para suplementando la placa con 0.5 a 1.0% de glucosa. Este suplemento cubrir toda el área del círculo. No use el mismo palito agitador genera oscuridad de la hemólisis, pero puede ser considerado para para más de un círculo. situaciones donde es importante resolver la identificación. 8. En forma permanente y despacio, gire y rote la tarjeta de El desarrollo de cepas minuto-colonia puede mejorarse cultivando en reacción para mezclar los reactivos por al menos un minuto. atmósfera enriquecida en dióxido de carbono. 9. Inspeccione la tarjeta para ver aglutinación. Si está presente, Estreptococos de los grupos Q, R y S pueden tener niveles detectables la aglutinación debe ser clara y visible a simple vista. de antígeno del grupo D. Antígenos comunes a los antígenos de grupos de Estreptococos han sido descriptos en un número de especies. Por ejemplo, reacciones INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS falso-positivas pueden ocurrir con Eschericia, Klebsiella o Si durante el primer minuto de la reacción las partículas de latex Pseudomonas. Estas son normalmente fáciles de diferenciar por aglutinaron, el resultado es positivo para esa suspensión. Si el extracto características del cultivo, y no causan confusión en la identificación de contiene gran cantidad de antígeno, la aglutinación va a ser más rápida Estreptococos. y notoria. Con extractos con aglutinación suave, la aglutinación puede demorar más tiempo y ser suave, pero no debe generar dificultad para PERFORMANCE CHARACTERISTICS distinguir entre reacciones positivas y negativas. Cuando las partículas El kit MICROGEN® Strep ha sido evaluado con otro kit comercial, de latex retienen la apariencia original lechosa, sin ninguna aglutinación usando muestras clínicas en laboratorios independientes. Los visible, el resultado es negativo. Rastros de agregación indistinta deben resultados se muestran en la Tabla 1. ser ignorados y considerados negativos Tabla 1: Comparición del MICROGEN® Strep. Y un látex comercial RESULTADOS ESPERADOS para grupos de Estreptococos. MICROGEN® Strep + - + 607 55 Kit comercial - 0 24

Sensibilidad 607/662 = 92% Especificidad 24/24 = 100%

Reproducibilidad Intra-lote fue evaluado testeand la sensibilidad de un lote de cada uno de los latex en 10 ocasiones separadas con tres diferentes operadores en diluciones seriadas de antígenos de referencia. Los títulos de punto final variaron en un máximo de una doble dilución de ensayo a ensayo.

Reproducibilidad Inter-lote fué examinado por testeo de sensibilidad y especificidad de 10 lotes de producto hacienda diluciones seriadas de antígenos de referencia. La variación entre lotes en títulos, fué como máximo una doble dilución de antígeno y los resultados cualitativos correlacionaron un 100%.

REFERENCES / BIBLIOGRAPHIE / BIBLIOGRAFIA 1. Birch, B.R. et al (1984). Antibiotic susceptibility and biochemical properties of Streptococcus faecalis strains reacting with both D and G antisera. J. Clin Pathol 37, 1289-1292. 2. Elliot, S.D. and Tai, J.Y. (1978). The type-specific polysaccharides of Streptococcus suis. J Exp Med 148, 1699-1704. 3. Facklam, R.R. (1977). Physiological differentiation of viridans streptococci. J Clin Microbiol 5, 184-201. 4. Facklam, R.R. (1985). Serologic identification of streptococci : how useful is serologic grouping? Clin Microbiol Newsletter 7, 91-94. 5. Facklam, R.R. and Smith, P.B. (1976). The Gram positive cocci. Human Pathology 7, 187-194. 6. Facklam, R.R. and Washington, J.A. (1991). Streptococcus and related catalase-negative Gram-positive cocci. In manual of Clinical Microbiology 5th Ed, Edited by Balows, A et al American Society for Microbiology, Washington D.C.Pages 238- 257. 7. Harvey, C.L. and Mclllmurray, M.B. (1984). Streptococci with dual antigen specificity for Lancefield groups D and G. Eur j Clin Microbiol 3, 526-530. 8. Lancefield, R.C. (1933). A serological differentiation of human and other groups of haemolytic streptococci. J. Exp med 57, 571-595. 9. Medrek, T.F. and Barnes, E.M. (1962). The influence of the growth medium on the demonstration of a group D antigen in faecal streptococci. J Gen microbiol 28, 701- 709. 10. Nowlan, S.S. and Deibel, R.H. (1967). Group Q streptococci 1. Ecology, serology, physiology and relationship to established enterococci. J. Bacteriol 94, 291-296. 11. Parker, M.T. and Ball, L.C. (1976). Streptococci and Aerococci associated with infection in man.J. Med Microbiol 9, 275-302.

Elaborador: Microgen Bioproducts Ltd. 1 Admiralty Way Camberley Surrey GU15 3DT UK Importador en Argentina: Medica-Tec SRL Av. Triunvirato 2789 (1427) Buenos Aires – Argentina. Dirección Técnica: Dr. Juan Enrique Urquet Autorizado por el Ministerio de Salud: Certificado Nro. 002756

WF6193 2003-05