INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO, CIÊNCIA E TECNOLOGIA GOIANO CÂMPUS-RIO VERDE DIRETORIA DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃO PROGRAMA DE PÓS- GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS AGRÁRIAS-AGRONOMIA DIVERSIDADE DE FUNGOS ENDOFÍTICOS DE Anacardium othonianum RIZZINI E SEU POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO Autora: Paula Sperotto Alberto Orientador: Fabiano Guimarães Silva Rio Verde – GO Setembro – 2013 iii INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO, CIÊNCIA E TECNOLOGIA GOIANO-CÂMPUS-RIO VERDE DIRETORIA DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃO PROGRAMA DE PÓS- GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS AGRÁRIAS-AGRONOMIA DIVERSIDADE DE FUNGOS ENDOFÍTICOS DE Anacardium othonianum RIZZINI E SEU POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO Autora: Paula Sperotto Alberto Orientador: Fabiano Guimarães Silva Dissertação apresentada, como parte das exigências para obtenção do título de MESTRE EM CIÊNCIAS AGRÁRIAS- AGRONOMIA, no Programa de Pós-Graduação em Ciências Agrárias-Agronomia do Instituto Federal de educação, Ciência e Tecnologia Goiano - Câmpus Rio Verde – Área de concentração Ciências Agrárias. Rio Verde – GO Setembro – 2013 iv Dados Internacionais de Catalogação na Publicação na (CIP) Elaborada por Igor Yure Ramos Matos – Bibliotecário CRB1 - 2819 A29d Alberto, Paula Sperotto. Diversidade de fungos endofíticos de Anacardium Othonianum Rizzini e seu potencial biotecnológico / Paula Sperotto Alberto. – 2013. 56 f.: il., fig. tabs. Orientador: Prof. Dr. Fabiano Guimarães Silva. Dissertação (Mestrado) – Programa de Pós-Graduação em Ciências Agrárias, Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia Goiano, Campus de Rio Verde, 2013. Biografia. Inclui índice de tabelas, figuras e lista de símbolos, siglas, abreviações e unidades. 1. Anacardium othonianum Rizzini. 2. Caju-de-árvore-do- cerrado. 3. fungos endofíticos. 4. Planta-Cerrado. I. Autor. II. Título. CDU: 633.44 v INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO, CIÊNCIA E TECNOLOGIA GOIANO CÂMPUS-RIO VERDE DIRETORIA DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃOPROGRAMA DE PÓS- GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS AGRÁRIAS-AGRONOMIA DIVERSIDADE DE FUNGOS ENDOFÍTICOS DE Anacardium othonianum RIZZINI E SEU POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO Autora: Paula Sperotto Alberto Orientador: Fabiano Guimarães Silva TITULAÇÃO: Mestre em Ciências Agrárias - Agronomia - Área de Concentração em Produção Vegetal Sustentável no Cerrado. APROVADA em 12 de setembro de 2013. Prof Dr Takeshi Kamada Prof Dr Edson Luiz Souchie Avaliador externo Avaliador interno UniRV IF Goiano-Câmpus Rio Verde Prof Dr Fabiano Guimarães Silva Presidente da banca IF Goiano-Câmpus Rio Verde ii vi AGRADECIMENTOS A Deus, por me conceder a vida! Por me guiar até aqui com paciência, persistência, confiança e sabedoria para entender cada momento vivido e permitir que neste percurso eu dividisse o caminho com pessoas especiais que me ensinariam muito! A minha família, meus pais, Paulo Roberto Alberto e Marta Sperotto, a eles devo a pessoa que me tornei! Moldaram-me com muito amor! É deles que vem a minha força e apoio incondicional. Ao meu irmão Gabriel, anjinho que Deus nos presenteou, para tornar mais feliz nossas vidas. Ao meu namorado Flávio Faria Pereira, pela amizade e a escolha de caminhar ao meu lado. Ao professor Fabiano Guimarães Silva, que me acompanhou desde o início da minha formação acadêmica, pela confiança conquistada e pelas orientações que foram de grande importância para minha formação pessoal e profissional, o qual tenho grande admiração e respeito. O meu muito obrigada! Ao professor Marcos Antônio Soares, que abriu as portas do Laboratório de Biotecnologia e Ecologia Microbiana (UFMT) para a realização deste trabalho e que esteve ao meu lado sempre que necessário, ensinando novas técnicas e conceitos, e colaborando com meu crescimento acadêmico, obrigada por tudo! A professora Ana Helena Januário pela colaboração na coorientação deste trabalho, muito obrigada! Ao professor Edson Luiz Souchie, que abriu as portas do Laboratório de Microbiologia Agrícola (IF Goiano), pela colaboração, incentivo e amizade durante todo o desenvolvimento desde trabalho. Ao Seu João e Dona Lurdinha, obrigada pela ajuda na coleta das plantas, pela hospitalidade, pela amizade e pelo exemplo de pessoas que são. Aos amigos que fiz, em especial as minhas “amigas-orientadoras” Juliana Silva Rodrigues Cabral, Flávia Dionísio Pereira e Clarice Megguer, que são espelhos para vii iii mim, amigas confidentes e orientadoras exigentes! Obrigada pelo exemplo que são em minha vida! Á Ana Paula Alves Cunha e Jaqueline Alves Senabio, que foram parceiras/integrantes neste trabalho, que Deus retribua a vocês a dedicação que tiveram na execução de cada etapa do trabalho. Obrigada pelo compromisso assumido e pela amizade/companhia durante o experimento. Às amigas do Laboratório de Microbiologia Agrícola: Cíntia, Liliane, Gabriela e Isabel, que dividiram comigo momentos difíceis, que só foram superados pela colaboração de cada uma e pelo auxilio sempre que solicitado! Ao Programa de Pós-graduação em Ciências Agrárias-Agronomia do Instituto Federal Goiano Câmpus Rio Verde, pela oportunidade de realização deste trabalho. Às agências de fomento CAPES, CNPq e FAPEG, pelo apoio financeiro. A todos que, de alguma forma, contribuíram para a realização deste trabalho, o meu MUITO OBRIGADA! viiiiv BIOGRAFIA DA AUTORA Paula Sperotto Alberto, filha de Paulo Roberto Alberto e Marta Sperotto, nasceu em Santo Augusto, Estado de Rio Grande do Sul, em 26 de julho de 1990. Em 2012, recebeu grau de Licenciatura em Ciências Biológicas, conferido pelo Instituto Federal Goiano - Câmpus Rio Verde. Em março de 2012, iniciou no Curso de Pós-Graduação em Ciências Agrárias-Agronomia pelo Instituto Federal Goiano-Câmpus Rio Verde- GO. ix v ÍNDICE Página ÍNDICE DE TABELAS............................................................................................. vii ÍNDICE DE FIGURAS.............................................................................................. viii LISTA DE SÍMBOLOS, SIGLAS, ABREVIAÇÕES E UNIDADES...................... ix RESUMO.................................................................................................................... x ABSTRACT............................................................................................................... xi INTRODUÇÃO GERAL........................................................................................... 15 1. O Cerrado Brasileiro............................................................................................... 15 2. Anacardium othonianum Rizzini............................................................................ 16 3. Interação entre microrganismos e vegetais............................................................. 18 3.1 Síntese de ácido indolacético................................................................................ 20 3.2 Solubilização de fosfato........................................................................................ 20 4 Identificação molecular........................................................................................... 21 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS....................................................................... 22 OBJETIVO GERAL................................................................................................... 26 TRABALHO CIENTÍFICO. Diversidade de fungos endofíticos de Anacardium 27 othonianum Rizzini e seu potencial biotecnológico................................................... Resumo ...................................................................................................................... 27 1. INTRODUÇÃO...................................................................................................... 28 2. MATERIAL E MÉTODOS.................................................................................... 30 2.1. Material Vegetal ................................................................................................. 30 2.2. Observação da associação entre fungos e raízes de caju-de-árvore-do-cerrado.. 31 vix 2.3. Isolamento, caracterização genética e identificação molecular das linhagens de 31 fungos endofíticos cultiváveis.................................................................................... 2.4.Traços funcionais das espécies endofíticas.......................................................... 33 3. RESULTADOS E DISCUSSÃO............................................................................ 34 3.1 Observação da associação entre fungos e raízes de caju-de-árvore-do- 34 cerrado........................................................................................................................ 3.2 Isolamento, caracterização genética e identificação molecular das linhagens de 39 fungos endofíticos cultiváveis.................................................................................... 3.3 Traços funcionais das espécies endofíticas.......................................................... 46 4. CONCLUSÃO ....................................................................................................... 48 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ...................................................................... 49 xi vii ÍNDICE DE TABELAS Página Tabela 1. Identificação dos isolados fúngicos endofíticos isolados de Anacardium othonianum, coletados no município de Montes Claros de Goiás 42 - GO, 2013........................................................................................................... Tabela 2. Solubilização in vitro de fosfato de cálcio (CaHPO4), ferro (FePO4) 47 e alumínio (AlPO4) por microrganismos endofiticos de caju-de-árvore-do- cerrado (Anacardium