UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARÁ CENTRO DE CIÊNCIAS DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM BIOQUÍMICA DAVI FELIPE FARIAS BIOSSEGURANÇA ALIMENTAR DE PROTEÍNAS Cry: DOS MÉTODOS CLÁSSICOS À ERA ÔMICA FORTALEZA 2013 DAVI FELIPE FARIAS BIOSSEGURANÇA ALIMENTAR DE PROTEÍNAS Cry: DOS MÉTODOS CLÁSSICOS À ERA ÔMICA Tese submetida à Coordenação do Programa de Pós-Graduação em Bioquímica da Universidade Federal do Ceará, como parte dos requisitos para obtenção do título de Doutor em Bioquímica. Área de concentração: Bioquímica Orientadora: Profa. Dra. Ana de Fátima Fontenele Urano Carvalho Co-orientadora: Dra. Maria Fátima Grossi de Sá Co-orientador: Dr. Ad. A. C. M. Peijnenburg FORTALEZA 2013 DAVI FELIPE FARIAS BIOSSEGURANÇA ALIMENTAR DE PROTEÍNAS Cry: DOS MÉTODOS CLÁSSICOS À ERA ÔMICA Tese submetida à Coordenação do Programa de Pós-Graduação em Bioquímica da Universidade Federal do Ceará, como parte dos requisitos para obtenção do título de Doutor em Bioquímica. Área de concentração: Bioquímica Aprovada em: 13/03/2013. BANCA EXAMINADORA Profª. Drª. Ana de Fátima Fontenele Urano Carvalho Universidade Federal do Ceará (UFC) Drª. Maria Fátima Grossi de Sá Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia (Embrapa-Cenargen) Dr. Ad. A. C. M. Peijnenburg RIKILT – Institute of Food Safety, Wageningen University and Research Centre Profª. Drª. Vânia Maria Maciel Melo Universidade Federal do Ceará (UFC) Prof. Dr. Flávio Finardi Filho Universidade de São Paulo (USP) 7 À minha orientadora, Profª. Ana, aos meus co- orientadores, Dra. Fátima Grossi e Dr. Ad Peijnenburg, aos meus pais e irmãos, aos meus parentes e amigos mais próximos e ao meu amado Carlosnaik. 8 AGRADECIMENTOS À minha orientadora, Profa. Ana de Fátima Fontenele Urano Carvalho, primeiro pela agradável convivência ao longo de onze anos, pelo profissionalismo e pelas lições de ética cedidas em tantos momentos importantes da minha formação como cidadão, educador e pesquisador. Também não poderia esquecer-me de agradecer pelo companheirismo eamizade em tantos momentos difíceis, e pelos incontáveis momentos divertidos. Por fim, por ter me propiciado uma formação ímpar, ao modelo daquela que os grandes mestres davam aos seus pupilos, permeando as mais diversas áreas do conhecimento humano, com ênfase em História e Arte. Certamente, a música, os livros, as fotografias, gravuras, pinturas e conversas afins, que sempre fizeram parte do nosso ambiente de trabalho, proporcionaram um diferencial a minha formação. Meu sincero, muito obrigado. À Dra. Maria Fátima Grossi de Sá, inicialmente por aceitar participar da minha banca examinadora e por reservar algumas horas de sua concorrida agenda para contribuir com sugestões para a minha tese. Além disso, pela grande receptividade e por ter acreditado e aceitado prontamente nas propostas iniciais para execução deste trabalho. Também pela presteza e por ter me acolhido muito bem e por várias vezes em seu laboratório. Ao Dr. Ad Peijnenburg, por aceitar vir de tão longe para participar da minha banca examinadora e estar sempre disposto a contribuir para melhoria deste trabalho. Também pela grande contribuição científica a este trabalho e pelos muitos ensinamentos que certamente agregaram valor a minha formação. Como não poderia esquecer, pela incomparável recepção na Holanda, por todo o suporte oferecido nos momentos mais difíceis de adaptação a nova cultura e ao londo de todo o estágio, pela amizade, presteza e pelas inúmeras lições de humildade e profissionalismo. À Profa. Vânia Maria Maciel Melo, inicialmente por aceitar participar da minha banca examinadora e reservar algumas horas de sua rotina para dar contribuições ao meu trabalho. Especialmente, por ter sido sempre uma grande parceira científica e uma incentivadora permanente do meu trabalho e da minha trajetória como estudante e cientista. Também, por disponibilizar-me toda a infraestrutura de seu laboratório e pessoal, não só para execução deste trabalho, mas em todos os momentos que precisei. 9 Ao Prof. Dr. Flávio Finardi Filho, inicialmente por aceitar de imediato participar da minha banca examinadora e por disponibilizar parte de seu tempo para contribuir com sugestões para a minha tese. À Profa. Ilka Maria Vasconcelos, por me receber sempre em seu laboratório com alegria, carinho e paciência, disponibilizando toda a infraestrutura de seu laboratório e pessoal para a execução deste trabalho. Além disso, por disponibilizar-se a esclarecer minhas dúvidas, pelas valorosas sugestões e por acreditar sempre em minhas contribuições para os seus projetos. A todos os professores que ministraram disciplinas para o Curso de Doutorado em Bioquímica da UFC, pelos conhecimentos cedidos e, em especial, à Profa. Ilka Maria Vasconcelos, ao Prof. José Tadeu Abreu de Oliveira, à Profa. Dirce Fernandes de Melo, à Profa. Norma Barros Benevides, à Profa. Cristina Paiva da Silveira e a Profa. Erika Freitas Mota pelas aulas motivadoras e instigantes, que certamente fizeram a diferença na minha formação. À Coordenação do Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, do Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular da Universidade Federal do Ceará, na pessoa do Prof. Dr. Márcio Viana Ramos, Coordenador, do Prof. Dr. José Hélio Costa, Vice-Coordenador, e de Maria de Fatima Andrade, Assistente Administrativa, pelo apoio institucional no decorrer de meu curso de Doutorado. Aos amigos e colegas do Laboratório de Bioprospecção de Recursos Regionais (Bioprospec), onde a maior parte deste trabalho foi realizada, inicialmente, à velha guarda, Lady Clarissa, Glauber Pacelli, Terezinha Souza e Geórgia Sampaio, pelo grande e impagável apoio em todas as etapas deste trabalho, pela amizade e companheirismo. À nova geração, mas já muito querida, Thiago Almeida, Luiz Carlos, Jackeline Medeiros, Renalison Farias, Renata Silva, Gabrielle de Paula, Nayana Soares, Pedro Matheus Sousa, Leonardo Rogério e Vanessa Lucas. Em especial, a Martônio Viana e Nathanna Mateus, também da velha guarda, mas que me auxiliaram na execução de grande parte desta tese, e sem o apoio dos dois tudo teria sido mais difícil ou inviável. Serei eternamente grato. À Francisca Berenice Alves (Berê), por sua amizade, alegria, presteza e carinho em tantos momentos. 10 A todos os amigos e colegas do Laboratório de Interação Molecular Planta Praga I, em especial, a Luciane Guimarães, Gustavo Oliveira, Magda Beneventi, Leonardo Macedo, Caroline Bezerra, Raquel Sampaio, Renata Bomfim, Roberta Coelho, Dijair Júnior e Patrícia Pelegrini pelo apoio na execução deste trabalho e excelente recepção e apoio nas minhas estadias em Brasília. A todos os amigos e colegas do RIKILT – Institute of Food Safety, em especial, ao Dr. Peter Hendriksen, Liza Portier, Stoopen Geert, Eveline Kramer, Marieke Pen, Marit Reitsma e, aos amigos brasileiros, Carla Mello, Fábio Brod, Andrea Silva, Joseph Alberto e Gislene Bremer, por todo o apoio, amizade e companheirismo, sem o qual esse trabalho não teria sido realizado. Ao Laboratório de Oncologia Experimental, em especial, a Profa. Claúdia Pessoa, Bruno Coelho e Bruno Soares, pelo apoio em vários procedimentos experimentais. Ao Laboratório de Microcopia de Força Atômica, na pessoa do Dr. Luciano Paulino Siva, pelo apoio na realização das análises de integridade celular. A todos os colegas do Laboratório de Ecologia Microbiana e Biotecnologia e do Laboratório de Microbiologia Ambiental, pelo grande apoio prestado em todos os ensaios com microrganismos apresentados neste trabalho. Em especial, agradeço a Profa. Vânia Melo, Denise Hissa, Tallita Tavares, Júlio Ximenes, Alysson Angelim, Samantha Pinheiro e Vanessa Nogueira, pelo apoio mais próximo e convivência agradável durante todos esses anos. A todos os colegas do Laboratório de Toxinas Vegetais, pelo grande apoio prestado em vários momentos da execução deste trabalho. Em especial, a Profa. Daniele Sousa, Juliana Gifoni, Janne Keila Morais, Adelina Batista, Henrique Oliveira, Daniel Câmara, Mirella Pereira, Ellen Paula e Raquel Rocha por sempre estarem dispostos a ajudar em todos os momentos que precisei. Ao amigo Francisco Valdenor de Oliveira, pelo companheirismo e amizade cedidos diariamente. 11 A todos os colegas e amigos da turma de Doutorado 2009.1, pelo companheirismo durante todo o curso e, em especial, a Eliane Silva pela amizade em todos os momentos, seja na alegria ou na tristeza. A todos os meus amigos, por me oferecem todo um suporte emocional durante os quatro anos do Doutorado. Em especial, a Carol Mosca, Ângela Azevedo, Vanja Viana, Cristiane Pacheco, Arjaan Pellis, Saskia Lenders, Johannes Rieche, Amandine Pastor, Mario Kicker, Laura de Haan, Tâmara Bezerra, Autran Coelho, Euvlaudia Veras e Pedro André, pelo amor e carinho cedidos em tantos momentos difíceis, mas também por compartilhar momentos únicos da minha vida. À minha avó, Margarida, uma das maiores incentivadoras da minha trajetória acadêmica, bem como meus tios e tias maternos, em especial, Ana Marta Farias, Prazeres Farias e Ana Kátia Farias, também a todos os meus primos(as) pelo apoio incondicional em tantos momentos difíceis pelos quais passei. Aos meus pais, Antonio Felipe Filho e Ana Maria Farias, que sempre me proporcionaram as condições adequadas para meu crescimento e desenvolvimento pessoal e profissional. São meu porto seguro e a razão que me impulsiona a lutar e crescer todos os dias. Seus ensinamentos me guiaram por um caminho de luta e honestidade. Aos meus amados irmãos e amigos, Juliana Farias e Felipe Júnior, pela amizade e companheirismo durante toda a vida. Em especial,