HIGO NASSER SANT’ANNA MOREIRA ANOTAÇÃO E MONTAGEM DE TRANSCRIPTOMAS DE INTESTINO MÉDIO E OVÁRIOS DO CARRAPATO AMBLYOMMA SCULPTUM, ANTES E APÓS A INFECÇÃO POR RICKETTSIA AMBLYOMMII Tese apresentada à Universidade Federal de Viçosa, como parte das exigências do Programa de Pós-Graduação em Bioquímica Aplicada para obtenção do título de Doctor Scientiae. VIÇOSA MINAS GERAIS – BRASIL 2016 1 Ficha catalográfica preparada pela Biblioteca Central da Universidade Federal de Viçosa - Câmpus Viçosa T Moreira, Higo Nasser Santanna, 1987- M838a Anotação e montagem de transcriptomas de intestino médio 2016 e ovários do carrapato Amblyomma Sculptum, antes e após a infecção por Rickettsia Amblyommii / Higo Nasser Santanna Moreira. – Viçosa, MG, 2016. xviii, 156f. : il. (algumas color.) ; 29 cm. Inclui anexos. Orientador: Cláudio Lisias Mafra de Siqueira. Tese (doutorado) - Universidade Federal de Viçosa. Inclui bibliografia. 1. Carrapato - genes. 2. Expressão gênica - avaliação. 3. Amblyomma Sculptum. 4. Rickettsia Amblyommii. I. Universidade Federal de Viçosa. Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular. Programa de Pós-graduação em Bioquímica Aplicada. II. Título. CDD 22. ed. 595.42 HIGO NASSER SANT’ANNA MOREIRA ANOTAÇÃO E MONTAGEM DE TRANSCRIPTOMAS DE INTESTINO MÉDIO E OVÁRIOS DO CARRAPATO AMBLYOMMA SCULPTUM, ANTES E APÓS A INFECÇÃO POR RICKETTSIA AMBLYOMMII Tese apresentada à Universidade Federal de Viçosa, como parte das exigências do Programa de Pós-Graduação em Bioquímica Aplicada, para obtenção do título de Doctor Scientiae. APROVADA: 29 de Fevereiro de 2016. ____________________________ _________________________________ Otávio J. B. Brustollini Jorge Abdalla Dergam ____________________________ _________________________________ Donald H. Bouyer Gustavo Ferreira Martins ____________________________________ Cláudio Lísias Mafra de Siqueira (Orientador) 2 “Grandes e maravilhosas são as tuas obras, Senhor Deus Todo-Poderoso! Justos e verdadeiros são os Teus Caminhos, ó Rei das Nações. Quem Te não temerá, ó Senhor, e não magnificará O Teu Nome? Porque só Tu és Santo; por isso todas as nações virão, e se prostrarão diante de Ti, porque os Teus Juízos são manifestos.” Apocalipse 15:3,4 “A Glória do Senhor é ocultar certas coisas. Tentar descobrí-las é a motivação dos homens.” Provérbios 25:2 “E no princípio criou Deus os céus e a terra. E a terra era sem forma e vazia; e havia trevas sobre a face do abismo; e O Espírito de Deus se movia sobre a face das águas... ...E disse Deus: Produza a terra alma vivente conforme a sua espécie; gado e répteis, e bestas- feras da terra conforme a sua espécie. E assim foi. E fez Deus as bestas-feras da terra conforme a sua espécie, e o gado conforme a sua espécie, e todo réptil da terra conforme a sua espécie. E viu Deus que tudo isso era bom. E disse Deus: Façamos o homem à nossa imagem e semelhança, conforme à nossa semelhança; e domine sobre os peixes do mar, e sobre as aves do céus, e sobre todo o gado, e sobre toda à terra, e sobre todo o réptil que se move sobre a terra. E criou Deus o homem à sua imagem e semelhança: à sua própria imagem o criou; macho e fêmea os criou. ...E assim os céus, e a terra e todo o seu exército foram acabados. E havendo Deus acabado no sexto dia a sua obra, que tinha feito, descansou no sétimo dia de toda sua obra, que tinha feito. E abençoou Deus o dia sétimo, e o santificou; porque nele descansou de toda sua obra, que criara e fizera.” Gênesis 1:1, 25-27 e 2:1-3 “Não sabes, não ouviste que O Eterno Deus , O Senhor, O Criador dos fins da terra, nem se cansa nem se fatiga? Não há esquadrinhação do Seu Entendimento. Ele dá esforço ao cansado, e multiplica as forças ao que não tem nenhum vigor. Os jovens se cansarão e se fatigarão, e os mancebos certamente cairão. Mas os que esperam no Senhor renovarão as suas forças, subirão com asas como águias: correrão, e não se cansarão; caminharão, e não se fatigarão.” Isaías 40: 28-31 “Agora cinge os teus lombos como, como homem; e perguntar-te-ei, e tu responde-me. Onde estavas tu, ó homem, quando eu fundava a terra? Faze-mo saber, se tens inteligência. Quem lhe pôs as medidas, se tu o sabes? Onde está o caminho da morada da luz? E, quanto às trevas, onde está o seu lugar?” Jó 38: 3-4; 19 “Ele é o que está assentado sobre o globo terra, cujos moradores são para Ele como gafanhotos..” (texto escrito pelo profeta Isaías, mais de 2 mil anos antes da descoberta de que a terra realmente é redonda). Isaías 40:22 “Ora ninguém subiu ao céu, senão O que desceu do céu, O Filho do Homem, que está no céu. 3ii Porque Deus amou o mundo de tal maneira que deu O Seu Filho Unigênito, para que todo aquele que Nele crê, não pereça, mas tenha A Vida Eterna. Porque Deus enviou Seu Filho mundo, não para que condenasse o mundo, mas para que o mundo fosse salvo por Ele.” João 3:15-17 “ E vi um novo céu e uma nova Terra. Porque já o primeiro céu e a primeira terra passaram. E Deus limpará de seus olhos toda a lagrima, e não haverá mais a morte, nem pranto, nem clamor, nem dor, porque já as primeiras coisas serão passadas. E O que estava assentado No Trono disse: Eis que faço novas todas as coisas. E disse-me: Escreve, porque estas palavras são verdadeiras e fiéis. E disse ainda: Eu sou o Alfa e o Ômega, o Princípio e o Fim. A quem quer que tiver sede, de graça lhe darei da fonte da água da Vida. Apocalipse 21: 1-6 4ii i À Deus, por Ele ser O Provedor e O Mantenedor de todas as coisas iv5 AGRADECIMENTOS Pela realização deste trabalho, gostaria de agradecer: À Deus, pela amizade, por ser a A Minha Rocha, Confiança e Provisão nos momentos difíceis. Pelo constante cuidado e direção em todos os momentos, inclusive durante as etapas de elaboração, desenvolvimento e conclusão deste trabalho, que se iniciou no mestrado. Especificamente por ter respondido uma oração que fiz no dia 28/11/09 me dando a idéia deste projeto (mestrado e doutorado), e já na manhã do dia 29/11/09, ter provido as parceirias necessárias (Projeto GENOPROT/CNPq) para que o mesmo fosse iniciado no mestrado. À minha Mãe, Lucila, por sua amizade e exemplo de sabedoria, força e determinação, que me servem de inspiração. Pelas sábias palavras de apoio e pelas constantes orações. Ao meu Pai, Nasser, pela amizade e constante apoio, mas principalmente por ter me ensinado deste cedo a lutar pelos objetivos e valores que realmente valem à pena na vida. Abaixo de Deus, são os meus heróis, referenciais e Aqueles à quem mais admiro e me espelho; À Polina, por ser minha amiga e companheira nos momentos de bonança e dificuldade, pelas incessantes orações por mim e por sonhar comigo os sonhos de Deus; Ao Prof. Cláudio Mafra, por ter acreditado neste projeto, pela Fé, em 29/11/09, quando ainda não tínhamos as condições técnicas e financeiras para a realização do mesmo. Pela amizade e por ter aberto as portas de seu laboratório para mim, permitindo-me grande crescimento profissional e pessoal. Pela importante orientação e insights no tocante à aspectos técnicos deste trabalho, desde a concepção do desenho experimental, desenvolvimento e até a análise crítica dos dados obtidos; Ao Prof. Mathias Szabó e à Maria Marlene Olegário (UFU) por gentilmente terem cedidos carrapatos A. sculptum para a realização deste trabalho; das bibliotecas de cDNA, essencial para realização deste trabalho; Ao Prof. Marcelo Bahia Labruna (FMVZ-USP) por gentilmente ter fornecido o cultvo de Rickettsia amblyommii para as etapas de infecção experimental dos carrapatos; Aos Drs. Otavio Brustollini e Talles Maciel, pelo aprendizado e valiosa cooperação durante a análise in silico dos dados gerados, prestando valiosos insights no tocante ao processamento e interpretação dos dados de RNASeq; Aos Professores, Dr. Jorge A. Dergam, cooperação e pelas valiosas sugestões na minha banca de qualificação e pela importante disponibilidade de contribuir para o enriquecimento da discussão dos dados, através desta banca de doutorado. 6 v Dr. Donald H. Bouyer e Dr. Gustavo Ferreira Martins pela valiosa cooperação em participarem desta banca de doutorado, prestando valiosa contribuição através da análise crítica dos dados, sugestões e enriquecimento no tocante à discussão das informações geradas à partir desta tese; Á todos os amigos e companheiros de trabalho do Laboratório de Epidemiologia e Parasitologia molecular, pelo companheirismo, amizade e valiosa ajuda em todas as etapas deste trabalho, em especial Adriano Soares Moreno, Paulo Lima (Paulão) e Juliana Areal Carrizo (Juju). Verdadeiros irmãos na minha caminhada no doutorado. Ao Hugo Genier (Departamento de Microbiologia) pela amizade e valiosa ajuda no tocante à minha estadia em Viçosa. Aos amigos do Departamento de Bioquímica e demais amigos de Viçosa, pela valiosa amizade; Aos amigos da Igreja Adventista, que são a minha família em Viçosa; Á FAPEMIG e ao CNPq, pela financiamento dos projetos necessários para a execuação deste doutorado. Á CAPES, pela concessão da bolsa de estudos no doutorado; Enfim, agradeço à todas aquelas pessoas que, de uma forma ou de outra, estiveram do meu lado durante este grande desafio, contribuindo para realização deste importante trabalho; 7vi BIOGRAFIA Higo Nasser Sant’anna Moreira, nascido em 6 de fevereiro de 1987, na cidade de Vitória, Espírito Santo, Brasil, filho de Nasser Fransciso Moreira e Lucila Sant’anna Moreira. No ano de 2005, ingressou no Bacharelado em Bioquímica pela Universidade Federal de Viçosa, obtendo o título de Bacharel em Bioquímica em 22 de janeiro de 2010. Durante a graduação, exerceu diversas atividades como monitor e tutor efetivo em matérias das áreas de Bioquímica e Química Orgânica.