UNIVERSIDAD POLITÉCNICA SALESIANA SEDE QUITO CARRERA: INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA DE LOS RECURSOS NATURALES Trabajo de titulación previo a la obtención del título de: INGENIERO EN BIOTECNOLOGÍA DE LOS RECURSOS NATURALES TEMA: EVALUACIÓN ANTIBACTERIANA DE EXTRACTO DE MOSQUERA (Croton elegans.) FRENTE A: (Staphylococcus aureus ATCC: 25923, Streptococcus pyogenes ATCC: 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC: 49619 y Streptococcus mutans ATCC: 25175), PATÓGENOS DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS AUTOR: OMAR LEONARDO ORDÓÑEZ REA TUTORA: TATIANA DE LOS ÁNGELES MOSQUERA TAYUPANTA Quito, abril del 2016 Índice Introducción ........................................................................................................................... 1 Capítulo 1 ............................................................................................................................... 4 Marco Teórico ........................................................................................................................ 4 1.1 Droga ............................................................................................................................ 4 1.2 Familia Euphorbiaceae ................................................................................................. 4 1.2.1 Croton elegans Kunth ........................................................................................ 5 1.2.1.1 Taxonomía................................................................................................... 5 1.2.1.2 Descripción botánica ................................................................................... 6 1.2.1.3 Distribución geográfica ............................................................................... 6 1.2.1.4 Propiedades farmacológicas ........................................................................ 7 1.3 Extracción ..................................................................................................................... 7 1.3.1 Técnica de extracción por disolvente ................................................................. 8 1.3.1.1 Maceración .................................................................................................. 8 1.3.1.1.1 Producto extractivo .............................................................................. 9 1.4 Tamizaje fitoquímico ................................................................................................. 10 1.5 Agentes patógenos de las vías respiratorias ............................................................... 15 1.5.1. Staphylococcus aureus ATCC 25923 ............................................................. 15 1.5.2 Sreptococcus pneumoniae ATCC 49619 ......................................................... 16 1.5.3 Streptococcus mutans ATCC 25175 ................................................................ 17 1.5.4 Streptococcus pyogenes ATCC 19615 ............................................................ 17 1.6 Método de evaluación antimicrobiana ....................................................................... 18 Capítulo 2 ............................................................................................................................. 20 Marco metodológico ............................................................................................................ 20 2.1 Lugar de recolección .................................................................................................. 20 2.2 Recolección de la planta medicinal ............................................................................ 20 2.3 Desinfección y secado del material vegetal ............................................................... 21 2.4 Proceso de obtención del extracto .............................................................................. 21 2.5 Control de calidad del extracto de Croton elegans .................................................... 22 2.5.1 Análisis organoléptico ..................................................................................... 23 2.5.1.1 Olor ........................................................................................................... 23 2.5.1.2 Color .......................................................................................................... 23 2.5.1.3 Sabor ......................................................................................................... 23 2.5.2 Parámetros físicos ............................................................................................ 24 2.5.2.1 Densidad .................................................................................................... 24 2.5.2.2 Índice de refracción ................................................................................... 25 2.5.2.3 Sólidos totales ........................................................................................... 25 2.5.3 Parámetros Químicos ....................................................................................... 26 2.5.3.1 Acidez (pH) ............................................................................................... 26 2.5.4 Ensayo cualitativo ............................................................................................ 27 2.5.4.1 Tamizaje fitoquímico ................................................................................ 27 2.5.4.1.1 Ensayo de dragendorff ....................................................................... 27 2.5.4.1.2 Ensayo de mayer................................................................................. 27 2.5.4.1.3 Ensayo de wagner .............................................................................. 28 2.5.4.1.4 Ensayo de borntrager ......................................................................... 28 2.5.4.1.5 Ensayo de catequinas ......................................................................... 28 2.5.4.1.6 Ensayo de resinas ............................................................................... 28 2.5.4.1.7 Ensayo de fehling ............................................................................... 29 2.5.4.1.8 Ensayo de espuma .............................................................................. 29 2.5.4.1.9 Ensayo de Ninhidrina ......................................................................... 29 2.5.4.1.10 Ensayo de kedde ............................................................................... 29 2.5.4.1.11 Ensayo de antocianidinas ................................................................. 30 2.5.4.1.12 Ensayo de shinoda ............................................................................ 30 2.6 Prueba de susceptibilidad antimicrobiana .................................................................. 30 2.6.1 Activación de las cepas bacterianas ................................................................. 31 2.6.2 Preparación del inóculo ................................................................................... 31 2.6.3 Elaboración del patrón referencia .................................................................... 32 2.6.4 Método de siembra por difusión en pozo modificado ..................................... 32 2.6.5 Lectura e Interpretación de resultados ............................................................. 33 2.6.6 Método estadístico ........................................................................................... 34 2.6.6.1 Modelo Anova de una vía ......................................................................... 34 Capítulo 3 ............................................................................................................................. 37 Resultado y discusión ........................................................................................................... 37 3.1 Control de calidad del extracto Croton elegans ......................................................... 37 3.1.1 Análisis organoléptico ..................................................................................... 37 3.1.2 Análisis físicos ................................................................................................. 38 3.1.2.1 Densidad .................................................................................................... 38 3.1.2.2 Índice de refracción ................................................................................... 39 3.1.2.3 Solidos totales ........................................................................................... 40 3.1.3 Análisis químicos ............................................................................................. 41 3.1.4 Análisis cualitativo .......................................................................................... 42 3.1.5 Patrón de referencia ......................................................................................... 44 3.1.6 Actividad antimicrobiana del extracto de Croton elegans............................... 44 3.1.7 Análisis estadístico .......................................................................................... 48 3.1.7.1 Análisis de varianza de una vía de la actividad inhibitoria del extracto Croton elegans a concentración 25% frente a: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Streptococcus pneumoniae ATCC 25175, Streptococcus mutans ATCC 49619 y Streptococcus pyogenes ATCC 19615.................................................... 48 3.1.7.2 Análisis de varianza de una vía del extracto Croton elegans a concentración 50% frente a: Staphylococcus aureus