REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique Université Hadj Lakhdar - BATNA 1 Faculté des Sciences de la Matière Département de Chimie THÈSE Présentée en vue de l’obtention du Diplôme de Doctorat troisième cycle Par : Melle Saliha BESBAS Thème : Métabolites secondaires de Ononis mitissima L. (Fabaceae) et évaluation biologique Domaine : Sciences de la Matière Filière : Chimie Spécialité : Chimie Organique Soutenue le ….. /….. / 2020 Devant le jury : Président : Hamada HABA Professeur Université de Batna 1 Rapporteur : Mohammed BENKHALED Professeur Université de Batna 1 Examinateurs : Belgacem LEGSEIR Professeur Université de Annaba Ammar DIBI Professeur Université de Batna 1 Lotfi LOUCIF Maitre de conférences A Université de Batna 2 Remerciements Nos remerciements vont d’abord au Créateur qui nous a doté d’intelligence et maintenu en santé pour mener à bien toutes ces années d’études. Ce travail a été réalisé au Laboratoire de Chimie et Chimie de l’Environnement (LCCE) de la Faculté des Sciences de la Matière de l’Université de Batna 1. Je voudrais tout d’abord adresser toute ma gratitude au directeur de cette thèse, Professeur Mohammed BENKHALED, pour le temps qu’il a consacré à m’apporter les outils méthodologiques indispensables à la conduite de cette recherche, pour sa patience, sa disponibilité et surtout ses judicieux conseils, qui ont contribué à alimenter ma réflexion. Son exigence m’a grandement stimulée. J’adresse mes sincères remerciements à Monsieur Hamada HABA, Professeur à l’Université de Batna 1, pour sa disponibilité, ses compétences dans le domaine de la chimie des substances naturelles, ses précieux conseils et son expérience très enrichissante qui m’ont fait avancer dans mes recherches. Je le remercie grandement pour avoir accepté de présider le jury de la présente thèse. Je tiens à remercier les membres du jury, Monsieur le Professeur Belgacem LEGSEIR de l’Université de Annaba, Professeur Ammar DIBI de l’Université de Batna 1 et Monsieur Lotfi LOUCIF, Maître de Conférences à l’Université de Batna 2, pour l’honneur qu’ils nous ont fait en acceptant d’éxaminer ce travail. J’adresse également tous mes remerciements et exprime toute ma reconnaissance au Professeur Jean-Luc WOLFENDER et au Docteur Laurence MARCOURT de l’Université de Lausanne-Genève (Suisse) pour la réalisation des analyses spectroscopiques. J’exprime mes sincères remerciements au Docteur Soumia MOUFFOUK du Département des Sciences de la Matière de l’Université de Batna 1, pour sa précieuse aide à la réalisation et la rédaction de la partie biologique, au sein du Laboratoire de Chimie et Chimie de l'Environnement (LCCE). J’aimerais la remercier pour sa serviabilité et sa disponibilité. Je remercie en particulier Chaima MOUFFOUK, Docteur en Biochimie Moléculaire à l’Université de Batna 2, pour sa gentillesse et son aide pour la réalisation de l’activité anti- hémolytique au sein du même laboratoire. Mes remerciements et ma reconnaissance vont également à toutes les personnes qui par leurs paroles, leurs conseils et leurs critiques, ont guidé mes réflexions et accepté de me rencontrer et de répondre à mes questions durant mes recherches. Dédicaces Tout d’abord, louange à « Allah » qui m’a guidé sur le droit chemin tout au long du travail et m’a inspiré les bons pas et les justes reflexes. Sans sa miséricorde, ce travail n’aura pas abouti. À mes parents .Aucun hommage ne pourrait être à la hauteur de l’amour dont ils ne cessent de me combler. Que dieu leur procure bonne santé et longue vie. À mes frères et sœurs qui n’a cessé de me soutenir pendant tout mon parcours. Je leur exprime toute ma gratitude pour leur soutien financier et moral, ce qui m’a permis d’être à ce niveau. Puisse ce diplôme nous réserver a tous des lendemains meilleurs. Et à tous ceux qui ont contribué de près ou de loin pour que ce projet soit possible, je vous dis merci. Abréviations BHA Hydroxyanisole butylé BHT Hydroxytoluène butylé CC Chromatographie sur Colonne CCE Chromatographie sur Couche Epaisse CCM Chromatographie sur Couche Mince COSY H-H Correlation spectroscopy H-H d Doublet dd Doublet de doublets ddd Doublet de doublets de doublets ddt Doublet de doublets de triplets DMSO-d6 Diméthylsulfoxyde deutéré DPPH 1,1-diphényl-2-picrylhydrazyle dt Doublet de triplets EAA Equivalents d'acide ascorbique EC50 Concentration efficace médiane EGA Equivalent gramme d’acide gallique EQ Equivalent de la quercétine ERO Espèces oxygénées réactives ESI Electrospray Spray Ionisation FRAP Pouvoir réducteur du fer FTC Thiocyanate du fer glu Glucose gluc Acide glucuronique H2O2 Peroxyde d'hydrogène HMBC Heteronuclear multiple-bond correlation HMG 3-hydroxy-3-méthylglutaryle HR-ESI-MS Spectrométrie de masse à haute résolution HSQC Heteronuclear single-quantum correlation Hz Hertz IC50 Concentration inhibitrice à 50% J Constante de couplage exprimée en Hz m Multiplet m/z Masse/Charge d’un ion MS Mass spectrometry Na2SO4 Sulfate de sodium nd Non déterminée ppm Partie par million PPM Phosphomolybdate q Quadruplet rha Rhamnose RMN Résonance magnétique nucléaire RMN 13C Résonance Magnétique Nucléaire du carbone 13 RMN 1H Résonance Magnétique Nucléaire du proton ROESY Rotating-frame overhauser effect spectroscopy RP-18 Silice greffée en C-18 (Reverse Phase-18) s Singulet SiO2 Gel de silice normale t Triplet td Triplet dédoublé uma Unité de masse atomique VLC Chromatographie Liquide sous Vide δ Déplacement chimique exprimé en ppm [α]D Pouvoir rotatoire Sommaire Sommaire Introduction ..................................................................................................................................... 1 CHAPITRE I : RAPPELS BIBLIOGRAPHIQUES I.1. Famille Fabaceae ..................................................................................................................... 3 I.2. Présentation du genre Ononis ................................................................................................... 3 I.3. Usage traditionnel et propriétés biologiques du genre Ononis ................................................. 4 I.3.1. Utilisation en médecine traditionnelle .............................................................................. 4 I.3.2. Propriétés biologiques ....................................................................................................... 4 I.4. Travaux antérieurs sur le genre Ononis .................................................................................... 5 I.4.1. Acides anthraniliques ........................................................................................................ 5 I.4.2. Acides phénoliques ........................................................................................................... 6 I.4.3. Ptérocarpanes .................................................................................................................... 7 I.4.4. Dérivés de résorcinol ......................................................................................................... 7 I.4.5. Dihydroisocoumarine ........................................................................................................ 9 I.4.6. Flavones, isoflavones, chalcones et aurones ................................................................... 10 I.4.7. Lactones aromatiques ...................................................................................................... 13 I.4.8. Saponines et triterpènes ................................................................................................... 14 CHAPITRE II : ETUDE PHYTOCHIMIQUE DE L’ESPECE ONONIS MITISSIMA II.1. Aspect botanique ................................................................................................................... 15 II.2. Extraction............................................................................................................................... 16 II.3. Fractionnement et purification............................................................................................... 16 II.4. Identification structurale des produits isolés (1-14) .............................................................. 18 II.4.1. Elucidation structurale du composé 1 ............................................................................ 21 II.4.2. Elucidation structurale du composé 2 ............................................................................ 36 II.4.3. Elucidation structurale du composé 3 ............................................................................ 47 II.4.4. Elucidation structurale du composé 4 ............................................................................ 53 II.4.5. Elucidation structurale du composé 5 ............................................................................ 58 II.4.6. Elucidation structurale du composé 6 ............................................................................ 64 II.4.7. Elucidation structurale du composé 7 ............................................................................ 66 II.4.8. Elucidation structurale du composé 8 ............................................................................ 71 Sommaire II.4.9. Elucidation structurale du composé 9 ............................................................................ 83 II.4.10. Elucidation structurale du composé 10 ........................................................................ 99 II.4.11. Elucidation structurale des composés 11 et 12 .........................................................