UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA – UNESP CENTRO DE AQUICULTURA DA UNESP DIFERENCIAÇÃO GONADAL EM Piaractus mesopotamicus Roosevelt Passos Barbosa Engenheiro de Pesca Jaboticabal, São Paulo 2015 UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA – UNESP CENTRO DE AQUICULTURA DA UNESP DIFERENCIAÇÃO GONADAL EM Piaractus mesopotamicus Roosevelt Passos Barbosa Orientador: Dr. Sergio Ricardo Batlouni Coorientador: Dr. Rafael Yutaka Kuradomi Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Aquicultura do Centro de Aquicultura da UNESP – CAUNESP, como parte dos requisitos para obtenção do título de Mestre. Jaboticabal, São Paulo 2015 Barbosa, Roosevelt Passos B238d Diferenciação gonadal em Piaractus mesopotamicus / Roosevelt Passos Barbosa. – – Jaboticabal, 2015 viii, 42 p. : il. ; 29 cm Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual Paulista, Centro de Aquicultura da UNESP, 2015 Orientador: Sergio Ricardo Batlouni Coorientador: Rafael Yutaka Kuradomi Banca examinadora: George Shigueki Yasui, Laura Satiko Okada Bibliografia 1. Pacu. 2. Gônada. 3. Sexo. 4. Histologia I. Título. II. Jaboticabal- Centro de Aquicultura da UNESP. CDU 639 Ficha catalográfica elaborada pela Seção Técnica de Aquisição e Tratamento da Informação – Serviço Técnico de Biblioteca e Documentação - UNESP, Campus de Jaboticabal. “Porque a sabedoria serve de defesa, como de defesa serve o dinheiro; mas a excelência do conhecimento é que a sabedoria dá vida ao seu possuidor.” Eclesiastes 7:12 “É muito melhor arriscar coisas grandiosas, alcançar triunfos e glórias, mesmo expondo-se a derrota, do que formar fila com os pobres de espírito que nem gozam muito nem sofrem muito, porque vivem nessa penumbra cinzenta que não conhece vitória nem derrota.” Theodore Roosevelt iv SUMÁRIO DEDICATÓRIA ........................................................................................................ v AGRADECIMENTOS ............................................................................................. vi APOIO FINANCEIRO ........................................................................................... viii RESUMO ................................................................................................................ 1 ABSTRACT ............................................................................................................. 3 INTRODUÇÃO ........................................................................................................ 4 Aspectos gerais da espécie ................................................................................. 7 Determinação sexual e diferenciação gonadal .................................................... 9 MATERIAL E MÉTODOS ...................................................................................... 12 Animais e condições de cultivo .......................................................................... 12 Parâmetros físicos e químico da água ............................................................... 12 Coletas Amostrais .............................................................................................. 12 Microscopia de luz ............................................................................................. 13 Avaliação histológica e classificação das amostras ........................................... 13 RESULTADOS ...................................................................................................... 15 Parâmetros físicos e químicos da água ............................................................. 15 Avaliação macroscópica das gônadas ............................................................... 15 Avaliação histológica das gônadas .................................................................... 16 Gônadas Indiferenciadas ................................................................................... 16 Ovário ................................................................................................................ 20 Análise dos Dados Biométricos ......................................................................... 23 DISCUSSÃO ......................................................................................................... 27 REFERÊNCIAS ..................................................................................................... 32 v DEDICATÓRIA A Minha mãe, Maria José, pelo amor que dedicou e continua a dedicar a mim e meus filhos, abrindo mão de muitas coisas em meu favor, suportando trabalho árduo, noites em claro, dor e saudade para que através dos meus sonhos pudesse realizar os dela. A Minha tia Maria Alice, por ter se predisposto a deixar planos e projetos pessoais e me acompanhar nessa jornada, sendo para mim e para os meus filhos a segunda mãe. A meus filhos, Rian e Renan, por me tornarem pai, o título mais nobre e honrado que um homem pode ter, e por serem minha motivação de buscar sempre o melhor. A Luckyanne (in memorian), pela sementinha deste sonho que agora se realiza, semeada em solo árido e regada com lágrimas quando tínhamos apenas dois pratos. Conseguimos! vi AGRADECIMENTOS A Deus, o pelo cuidado de um pai amoroso, me conduzindo e purilando meus planos e projetos tornando em algo maior e mais brilhante do que planejei. A minha família, em especial meu pai Raimundo e irmãos Robson e Célio pelo apoio incondicional. Aos meus tios, tias e primos (são tantos que não cabe nesta página) agradeço a torcida e palavras de incentivo. A minha noiva Márcia, que mesmo suportando a saudade e a distância nunca deixou de me incentivar e me trazer conforto pelas palavras. Ao Prof. Dr. Sérgio Ricardo Batlouni, pela amizade, paciência e confiança. Agradeço a oportunidade que sempre manteve disposta e o conhecimento compartilhado. Foi uma honra ter sido seu orientado. Ao Dr. Rafael Yutaka Kuradomi, pela coorientação, desafios e cobranças que contribuíram para minha formação. Aos doutores membros da banca George Shigueki Yasui e Laura Satiko Okada Nakaghi pelas contribuições para o enriquecimento deste trabalho. Aos amigos do laboratório, Thiago, Patrick, Guilherme, Valéria e Daniel pela amizade, convívio e companheirismo. Sem a ajuda de vocês não teria conseguido. Aos servidores do CAUNESP, Valdecir, Márcio Reche, David, Veralice e Silvia que de forma direta contribuíram para a realização deste trabalho. Aos amigos da Igreja Adventista Central de Jaboticabal, Natanael, Dani, Bia, Jaza e Mary pela receptividade, acolhida, prestatividade e socorro. Deus lhes dê em dobro toda a ajuda que prestaram a mim e minha família. Aos meus tios Almiro e Regiane, ao amigo Rajon e a cunhada Simone, pela hospitalidade e apoio logístico durante as viagens. Aos colegas de trabalho e amigos do Instituto Federal do Amazonas (IFAM), Profa. Sandra Darwich, Profa. Doraneide Tahira, Profa. Maria Célia, Profa. Idarclei e Alba, pelo incentivo e apoio. Esta vitória é mais um gol a vários pés. Ao IFAM, minha casa funcional, pelo apoio e oportunidade de qualificação. vii Ao Programa de Pós-Graduação em Aquicultura e ao Centro de Aquicultura da UNESP, pela oportunidade e pela formação. A Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas (FAPEAM), e ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPQ), pelo apoio financeiro. viii APOIO FINANCEIRO Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPQ), bolsa de Mestrado de Março/2013 – Janeiro/2014. Processo n° 131296/2013-2. Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas (FAPEAM), bolsa de Mestrado de Fevereiro/2014 – Fevereiro/2015. Edital 003/2013, decisão 028/2014. 1 DIFERENCIAÇÃO GONADAL EM Piaractus mesopotamicus RESUMO Este trabalho se propôs a determinar e caracterizar o início do processo de diferenciação gonadal do pacu (Piaractus mesopotamicus) e avaliar em indivíduos jovens a associação entre o sexo fenotípico com biomassa total (BT) e comprimento total (CT) para obtenção de subsídios que permitam abordagens específicas como a inversão sexual e respostas sobre a gonadogênese de ovários e testículos para esta espécie. Para isso, foram produzidas larvas de pacu no Laboratório de Reprodução de Peixes do Centro de Aquicultura da UNESP/Jaboticabal (CAUNESP) e mantidos em viveiros escavados de 200 m² do CAUNESP, e tratados com ração comercial (32,0% de proteína bruta) e submetidos a 5 amostragens com intervalo aproximado de 30 dias. Foram eutanaziados um total de 51 indivíduos para remoção das gônadas, sendo fixados em solução de Karnovsky, incluídos em historesina, corados em HE para análise histológica em microscopia de luz. Neste estudo, os parâmetros físico-químicos da água estavam dentro dos valores considerados normais para o desenvolvimento da espécie. Tal como observações em campo, foram encontrados heterogeneidade de tamanho entre os juvenis de P. mesopotamicus, porém a razão dessa disparidade não se deve a dimorfismo sexual ou diferenciação sexual, visto que os resultados da análise histológica revelaram que antes mesmo da diferenciação esta disparidade de tamanho já era observada. Embora quiescentes e tardias, as atividades celulares ocorreram de forma similar à de outros teleósteos neotropicais. No período amostral (299 dias) foram encontrados apenas gônadas indiferenciadas e ovários. As análises em microscopia de luz indicam que a diferenciação para fêmea (CT=10,03±0,12 e BT=18,21±1,22), inicia-se entre 123º e o 150º dia após a eclosão (DAE), porém no 150º DAE ainda haviam gônadas indiferenciadas (CT=9,55±0,65 e BT=15,25±3,51). A diferenciação da gônada feminina nesta espécie ocorre antes que a masculina, pois no período de análise não