FACULTAD DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR Y FISIOLOGÍA TESIS DOCTORAL: Lazarillo and related Lipocalins: ligands and functions Presentada por MARIO RUIZ GARCIA para optar al grado de Doctor por la Universidad de Valladolid Dirigida por: Dra. María Dolores Ganfornina Álvarez Dr. Diego Sánchez Romero Impreso 2T AUTORIZACIÓN DEL DIRECTOR DE TESIS (Art. 2.1. c de la Normativa para la presentación y defensa de la Tesis Doctoral en la UVa) D. Diego Sánchez Romero, con D.N.I. nº29759524P, profesor del departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Fisiología, y Dª. María Dolores Ganfornina Álvarez, con D.N.I. nº28873307G, profesora del departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Fisiología, como Directores de la Tesis Doctoral titulada “Lazarillo and related Lipocalins: ligands and functions”, presentada por D. Mario Ruiz Garcia, alumno del programa de Investigación Biomédica impartido por el departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Fisiología: Autorizan la presentación de la misma, considerando que el candidato ha superado el nivel de formación necesario para aspirar al Título de Doctor con Mención Internacional por la Universidad de Valladolid, mediante la realización de un proyecto de investigación original en el que su contribución abarca desde el diseño de las preguntas científicas y el diseño y ejecución de los experimentos, hasta la presentación en diversos formatos (escritura de trabajos para publicación y presentaciones en congresos) de los resultados para su difusión a la comunidad científica. Valladolid, 28 de Febrero de 2013 La Directora de la Tesis, El Director de la Tesis, Fdo.: María Dolores Ganfornina Álvarez Fdo.: Diego Sánchez Romero INDEX 1. Index .............................................................................................................................................. 5 2. Abbreviations ............................................................................................................................... 9 3. Introductory Words ................................................................................................................... 13 4. General Introduction ................................................................................................................. 15 4.1. The Lipocalin Protein Family. ................................................................................................................ 17 4.2. Lipocalin Family Phylogeny. ................................................................................................................. 18 4.3. Lipocalin Structure. ................................................................................................................................ 18 4.4. Ligand Binding and Lipocalin Function. ................................................................................................ 23 4.5. Clade I: Arthropodan and vertebrate Lipocalin meeting point.. ............................................................. 24 4.5.1. Lazarillo ........................................................................................................................................ 24 4.5.2. Drosophila Lipocalins................................................................................................................... 25 4.5.3. Apolipoprotein D. ......................................................................................................................... 32 4.6. References .............................................................................................................................................. 37 5. Objectives .................................................................................................................................... 47 6. Results ......................................................................................................................................... 51 6.1. Chapter 1 ................................................................................................................................. 53 “Sex-dependent modulation of longevity by two Drosophila homologues of human Apolipoprotein D, GLaz and NLaz”. 6.1.0. Summary.............................................................................................................................................. 55 6.1.1. Introduction ......................................................................................................................................... 57 6.1.2. Material and Methods .......................................................................................................................... 58 6.1.3. Results and Discussion ........................................................................................................................ 60 6.1.4. References ........................................................................................................................................... 71 6.1.5. Supplemental Information ................................................................................................................... 74 6.2. Chapter 2 ................................................................................................................................. 79 “Lipid binding properties of human ApoD and Lazarillo-related Lipocalins: Functional implications for cell differentiation”. 6.2.0. Summary.............................................................................................................................................. 81 6.2.1. Introduction ......................................................................................................................................... 83 6.2.2. Material and Methods .......................................................................................................................... 84 6.2.3. Results and Discussion ........................................................................................................................ 85 6.2.4. References ........................................................................................................................................... 96 6.2.5. Supplemental Information ................................................................................................................... 99 6.3. Chapter 3 ............................................................................................................................... 103 “Ligand binding-dependent functions of the Lipocalin NLaz: An in vivo study in Drosophila”. 6.3.0. Summary............................................................................................................................................ 105 6.3.1. Introduction ....................................................................................................................................... 107 6.3.2. Material and Methods ........................................................................................................................ 108 6.3.3. Results ............................................................................................................................................... 111 6.3.4. Discussion.......................................................................................................................................... 121 6.3.5. References ......................................................................................................................................... 124 6.3.6. Supplemental Information ................................................................................................................. 127 6.4. Chapter 4 ............................................................................................................................... 139 “Grasshopper Lazarillo, a GPI-anchored Lipocalin, increases Drosophila longevity and stress resistance, and functionally replaces its secreted homologue NLaz”. 6.4.0. Summary............................................................................................................................................ 141 6.4.1. Introduction ....................................................................................................................................... 143 6.4.2. Material and Methods ........................................................................................................................ 144 6.4.3. Results and Discussion ...................................................................................................................... 148 6.4.4. References ......................................................................................................................................... 161 6.4.5. Supplemental Information ................................................................................................................. 165 7. General Discussion ................................................................................................................... 169 7.1. References ............................................................................................................................................ 175 8. Conclusions ............................................................................................................................... 177 9. Summary in Spanish / Resumen en Castellano ..................................................................... 181 9.1. References ...........................................................................................................................................