MARIA ISABEL MULLER "Morfologia e Taxonomia Molecular de Myxosporea (Myxobolidae) e Monogenea (Dactylogyridae) de Bdinquias de Pacu em Pisciculturas de Sao Paulo, Brasil." CAM PINAS 2012 iii v Dedico à minha família, em especial aos meus pais Claudinei Müller e Sonia T. M. Müller, pelo apoio e por todo estímulo, a quem sempre dedicarei minhas conquistas. Aos meus irmãos Giuliano Ricardo Müller e Ana Rita Müller, por toda ajuda e carinho. vi Agradecimentos À Deus, por tudo, sem Sua força divina nada seria possível. À Professora Doutora Marlene Tiduko Ueta pela orientação, apoio, carinho e por sempre acompanhar de perto o desenvolvimento deste trabalho com muita dedicação. Ao Professor Doutor Edson A. Adriano da Universidade Federal de São Paulo - campus Diadema, por todo apoio e incentivo durante os momentos difíceis e atuando mesmo que informalmente, como co-orientador. Ao Doutor D. Timothy J. Littlewood do Museu de História Natural de Londres, Reino Unido, pela oportunidade em seu laboratório durante o estágio PDEE, pela sua solicitude e por despertar em mim um amadurecimento pessoal e profissional. Aos Professores que fizeram parte do exame prévio deste trabalho, Dr. Luis Augusto Magalhães, Profa. Dra. Urara Kawazoe e Prof. Dr. Antônio Augusto Mendes Maia, pelas importantes correções e alterações sugeridas. Aos professores da banca de defesa Prof. Dr. José Luis Fernando Luque Alejos, Prof. Dr. Maurício Laterça Martins, Prof. Dr. Ricardo Massato Takemoto e Prof. Dr. Rogério Tubino Vianna, pela análise criteriosa e valiosas sugestões. Ao Doutor Paulo Ceccarelli, pesquisador do Centro Nacional de Pesquisa e Conservação de Peixes Continentais - CEPTA/ICMBio, pela colaboração nas coletas e obtenção do material biológico. Ao Doutor Rubens Riscala Madi pela ajuda nas coletas, pela amizade e principalmente por ter me iniciado no estudo de Parasitologia de Peixes. Sempre serei grata por isso. A Ricardo Afonso Torres de Oliveira e Arlindo Donizete Lançoni pela amizade e apoio nas coletas. À Dra. Márcia Ramos Monteiro da Silva, do Laboratório de Parasitologia do Departamento de Ciências Básicas da FZEA - USP, pelo suporte no seqüenciamento dos mixosporídeos. À Sra. Julia Llewellyn-Hughes e Sra. Claire Griffin do NHM (Museu de vii História Natural de Londres), Sequencing Unit, pela assistência nos seqüenciamentos. Ao Dr. Dietmar Keyser e Sra. Renate Walter (ZMH, Universidade de Hamburgo - Alemanha) pela oportunidade e assistência com as fotos de microscopia eletrônica de varredura. À Sra. Adriane Cristina Sarti Sprogis do Laboratório de Microscopia Eletrônica de Varredura e Transmissão do Instituto de Biologia, UNICAMP, pelos ensinamentos durante os procedimentos de microscopia eletrônica. Ao Professor Dr. Arício Xavier Linhares pela ajuda com a análise estatística. À Comissão de Pós Graduação em Parasitologia, Profa. Dra. Silmara Marques Allegretti, Profa. Dra. Regina Maura Bueno Franco e Profa. Dra. Ana Maria Aparecida Guaraldo pelo incentivo e assistência. Aos Professores do Departamento de Biologia Animal da UNICAMP por todo conhecimento compartilhado, ajuda durante as disciplinas, PED e qualificação. À Dra. Andrea Waeschenbach, pesquisadora do Museu de História Natural de Londres, em especial, por ter me ensinado tudo que sei sobre PCRs. À Dra. Natasha Pouchkina-Stantcheva pesquisadora do Museu de História Natural de Londres, pela sincera amizade e apoio. Aos amigos do Museu de História Natural de Londres, Dra. Gill Mapstone, Dra. Eileen Harris, Dra. Jitka Aldhoun, Dr. Ronald Jenner, Dra. Bonnie Webster, Helen Jenkins, Nick Riddiford, Sarah Levitz e Lucas Cunningnham por todo apoio e amizade. À Maisie Baglietto e sua família por me acolher calorosamente em sua casa durante o estágio PDEE. Aos meus grandes amigos Lincoln Corrêa, Michelle Santos Rondon, Tarsila Frezza, Julia Molina, Rosy Nunes, Claudineide Oliveira, Luciana Franceschi, Anderson Tintino, Ermelindo Barreto, Eliana Camargo, Maria Francisca Neves (Kika), Carina Souza, Paula Silva pela amizade e carinho. Aos amigos da USP Juliana Naldoni, Tiago Milanin, Matheus Carriero e viii Gabriel Sassarão por me acolherem em Pirassununga. À minha amiga Joilda Ribeiro por sempre oferecer e me abrigar em sua casa durante o trabalho feito na USP em Pirassununga. Aos funcionários do Departamento de Biologia Animal, João Batista, Letícia, Diego, Nilson, Cirene e Dona Tacilda pelo apoio e amizade. Ao motorista e amigo Carlos Alberto Martins de Lima, o "Carlinhos". Ao meu namorado Danilo Formico por todo apoio, carinho, compreensão e por suportar minha ausência física por nove meses. À minha cunhada e irmã de coração Gisele G. Müller e minha sobrinha Giulia G. Müller por todo apoio e carinho. Aos parentes e amigos que sempre torceram por mim durante toda essa etapa. À CAPES pelo financiamento da bolsa de Doutorado no Brasil e também pela Bolsa do Programa de Doutorado com Estágio no Exterior, PDEE no período de setembro de 2010 a março de 2011. E aos peixes e seus interessantes parasitos. ix "Senhor, vós me perscrutais e me conheceis, Sabeis tudo de mim, quando me sento ou me levanto. De longe penetrais meus pensamentos. Quando ando e quando repouso, vós me vedes, observai todos os meus passos. A palavra ainda não me chegou a língua, e já, Senhor, a conheceis toda. Vós me cercais por trás e pela frente, e estendeis sobre mim vossa mão." (Salmo 138) "Não é o mais forte que sobrevive, nem o mais inteligente, mas o que melhor se adapta as mudanças." (C. Darwin) x SUMÁRIO LISTA DE FIGURAS E TABELAS......................................................................................... xii RESUMO............................................................................................................................... xiv ABSTRACT............................................................................................................................ xv INTRODUÇÃO....................................................................................................................... 1 OBJETIVOS........................................................................................................................... 8 Objetivo Geral........................................................................................................................ 8 Objetivos Específicos............................................................................................................. 8 MATERIAL E MÉTODOS...................................................................................................... 9 RESULTADOS....................................................................................................................... 12 Capítulo 1: Diagnosis and molecular taxonomy of two myxosporeans species parasites of farmed Piaractus mesopotamicus (Characiformes: Characidae) in the State of São Paulo, Brazil...................................................................................................................................... 13 Capítulo 2: Morphological and Molecular Analysis of Anacanthorus penilabiatus and Mymarothecium viatorum (Monogenea: Dactylogyridae) gill parasites from Piaractus mesopotamicus (Characidae: Serrasalminae) collected from fish farms in São Paulo State, Brazil............................................................................................................................ 42 Capítulo 3: Description of partial mitochondrial genome of Anacanthorus penilabiatus (Monogenea, Dactylogyridae) from Piaractus mesopotamicus (Characidae, Serrasalminae) and its use as possible molecular marker.................................................... 73 CONCLUSÕES..................................................................................................................... 104 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS...................................................................................... 105 xi LISTA DE FIGURAS E TABELAS Figura 1 - Centro Nacional de Pesquisa e Conservação de Peixes Continentais – CEPTA/ICMBio, município de Pirassununga, localizado no Estado de São Paulo...................................................................................................................................... 9 Capítulo 1: Diagnosis and molecular taxonomy of two myxosporeans species parasites of farmed Piaractus mesopotamicus (Characiformes: Characidae) in São Paulo state, Brazil. Table 1 - Primers used to amplify and sequence 18S fragments of Henneguya piaractus and Myxobolus colossomatis................................................................................................. 18 Table 2 - Mean prevalence and intensity of infection values of Henneguya piaractus and Myxobolus colossomatis parasite of the gills of Piaractus mesopotamicus...................................................................................................................... 22 Figure 1 - Light photomicrographs of spores of Henneguya piaractus................................. 23 Figure 2 - Light photomicrographs of gills of Piaractus mesopotamicus with the cysts of Myxobolus colossomatis........................................................................................................ 24 Figure 3 - Scanning electron micrographs of Henneguya piaractus................................................................................................................................ 25 Figure 4 - Electron micrography of gills of Piaractus mesopotamicus infected by Henneguya piaractus............................................................................................................