MAPEAMENTO DOS SÍTIOS DE Dnar 5S E 45S E ORGANIZAÇÃO DA CROMATINA EM REPRESENTANTES DA FAMÍLIA AMARYLLIDACEAE JAUME ST.-HIL

MAPEAMENTO DOS SÍTIOS DE Dnar 5S E 45S E ORGANIZAÇÃO DA CROMATINA EM REPRESENTANTES DA FAMÍLIA AMARYLLIDACEAE JAUME ST.-HIL

EMMANUELLY CALINA XAVIER RODRIGUES DOS SANTOS MAPEAMENTO DOS SÍTIOS DE DNAr 5S E 45S E ORGANIZAÇÃO DA CROMATINA EM REPRESENTANTES DA FAMÍLIA AMARYLLIDACEAE JAUME ST.-HIL. RECIFE-PE 2015 i EMMANUELLY CALINA XAVIER RODRIGUES DOS SANTOS MAPEAMENTO DOS SÍTIOS DE DNAr 5S E 45S E ORGANIZAÇÃO DA CROMATINA EM REPRESENTANTES DA FAMÍLIA AMARYLLIDACEAE JAUME ST.-HIL. Tese apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Botânica da Universidade Federal Rural de Pernambuco como parte dos requisitos para obtenção do título de Doutora em Botânica. Orientador: Prof. Dr. Reginaldo de Carvalho Dept° de Genética/Biologia, Área de Genética/UFRPE Co-orientador: Prof. Dr. Leonardo Pessoa Felix Dept° de Fitotecnia, UFPB RECIFE-PE 2015 ii MAPEAMENTO DOS SÍTIOS DE DNAr 5S E 45S E ORGANIZAÇÃO DA CROMATINA EM REPRESENTANTES DA FAMÍLIA AMARYLLIDACEAE JAUME ST.-HIL. Emmanuelly Calina Xavier Rodrigues dos Santos Tese defendida e _________________ pela banca examinadora em ___/___/___ Presidente da Banca/Orientador: ______________________________________________ Dr. Reginaldo de Carvalho (Universidade Federal Rural de Pernambuco – UFRPE) Comissão Examinadora: Membros titulares: ______________________________________________ Dra. Ana Emília de Barros e Silva (Universidade Federal da Paraíba – UFPB) ______________________________________________ Dra. Andrea Pedrosa Harand (Universidade Federal de Pernambuco – UFPE) ______________________________________________ Dr. Felipe Nollet Medeiros de Assis (Universidade Federal da Paraíba – UFPB) ______________________________________________ Dr. Marcelo Guerra (Universidade Federal de Pernambuco – UFPE) Suplentes: ______________________________________________ Dra. Lânia Isis Ferreira Alves (Universidade Federal da Paraíba – UFPB) ______________________________________________ Dra. Sônia Maria Pereira Barreto (Universidade Federal de Pernambuco – UFRPE) iii A minha família, em especial ao meu pai José Geraldo Rodrigues dos Santos que sempre foi o meu maior incentivador e a quem responsabilizo o meu amor pela docência. Dedico. iv AGRADECIMENTOS A Deus, pela iluminação em todos os momentos! Ao Programa de Pós-Graduação em Botânica (PPGB), por permitir o uso de suas dependências. A CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior) pela concessão da bolsa de estudo. A coordenadora do programa Profa Dra. Carmen Silvia Zickel, pelo apoio nos momentos que precisei. Meus sinceros agradecimentos! Ao professor Dr. Reginaldo de Carvalho, pela orientação, pelo apoio dispensado e as importantes contribuições durante o desenvolvimento do trabalho. Obrigada por tudo! Ao meu coorientador professor Dr. Leonardo Pessoa Felix, por ter propiciado o meu primeiro contato com a Citogenética vegetal. Não posso deixar de relatar o profundo respeito, carinho e admiração por este ser humano tão incrível. Obrigada pela confiança, profissionalismo e por deixar claro que tenho “cadeira cativa” no citoareia. Os meus mais sinceros agradecimentos! Aos membros da banca examinadora, Dra. Ana Emilia de Barros e Silva, Dra. Andrea Pedrosa Harand, Dr. Felipe Nollet Medeiros de Assis, Dr. Marcelo Guerra, Dra. Lânia Isis Ferreira Alves e Dra. Sônia Maria Pereira Barreto, pelas valiosas contribuições. A minha grande amiga, Dra. Lidiane Feitoza, por ter sido tão essencial na minha formação e por ser um exemplo de ser humano e de profissional. Obrigada, minha querida! Ao meu pequeno grande amigo/irmão, Dr. Felipe Nollet por ser quem é. Pela ajuda profissional e pessoal durante o doutorado. Não tive a sorte de ter um irmão, mas não sabia eu que antes de nascer Deus já o tinha colocado no mundo para preencher esse espaço. Agradeço infinitamente a Citogenética por ter possibilitado esse encontro. Te amo! A minha amiga/irmã/mãe Dra. Lânia Isis, por ter me ensinado a fazer as primeiras lâminas. Como sou sortuda, não?! Agradeço imensamente por sua parceria e amizade sincera. Obrigada por nunca ter me decepcionado e por está comigo sempre, mesmo que a quilômetros de distância. Você está em meu coração. Amo você! A Dra. Ana Emília Barros e Silva por abrir as portas do seu laboratório, assim como o prof. Leonardo Felix, permitindo que eu fique a vontade para voltar para “casa” (Lab Areia-PB). Muito obrigada pelo apoio e conselhos. Ao amigo Erton Medeiros de Almeida que em suas coletas nunca esquece de coletar as “cebolinhas da Manu”. Muito obrigada, querido! Ao meu Amor, Austrique Liano, por ser tão compreensivo, parceiro e carinhoso. Não tenho palavras pra descrever o tamanho da minha gratidão nos momentos que mais precisei. Te amo! Aos meus pais José Geraldo Rodrigues dos Santos e Célia Maria Xavier dos Santos, e as minhas irmãs Gabriele Xavier e Camila Xavier pelo suporte, orações e momentos felizes. v Em especial ao meu pai, meu maior exemplo. Por me levar ainda criança em seus experimentos de campo durante seu Doutorado. Obrigada por mostrar que a educação é libertadora. Obrigada por ser um exemplo de superação não só para mim, mas também para seus alunos. Quero e sempre quis ser como o meu pai, espero um dia conseguir chegar perto. Aos meus tios, tias e primas professores que desde sempre despertaram em mim o amor pela leitura e que mesmo diante as dificuldades conseguem mudar vidas. Vocês me inspiram! A minha avó, também professora, Antonia Xavier, o ser humano mais nobre e lúcido que conheço. Obrigada por ser a avó dos sonhos de qualquer um e por ter me ensinado tantas lições valiosas. Te amo! Aos meus colegas de laboratório, tanto do citoareia como do citorural, pela troca de ideias, pelos bons momentos vivenciados e pelas valiosas lições. A todos os amigos da graduação, mestrado, doutorado e da vida pelos maravilhosos momentos vivenciados: aulas, viagens, risadas, conversas e festas. A todos os funcionários da UFRPE e UFPB, em especial a Kênia Muniz e a Luciana Ledra, pelo apoio nos momentos que precisei. Por fim, agradeço a todos que contribuíram de alguma forma, ou à sua forma, para a realização deste trabalho, meus sinceros agradecimentos. vi LISTA DE FIGURAS FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA Pág. Figura 1 Distribuição geográfica da família Amaryllidaceae. Subfamília 28 Agapanthoideae (a); Subfamília Amaryllidoideae (b); Subfamília Allioideae: tribo Allieae (c), tribo Tulbaghieae (d), tribo Gilliesieae (e). Figura 2 Principais etapas da técnica de hibridização in situ fluorescente. A 36 marcação da sonda (a) realizada independentemente da preparação da lâmina (b). Posteriormente, a sonda e o DNA cromossômico são desnaturados (c, d) e, quando colocados em contato, a sonda hibridiza in situ (e) com o DNA-alvo. A marcação da sonda pode ser detectada por anticorpos ligados a fluorocromos (f) e visualizada diferencialmente ao microscópio (g). Figura 3 Diagrama esquemático da estrutura das histonas. (a) Proteínas dos 39 nucleossomos são designadas: H2A (histona 2A), H2B (histona 2B), H3 (histona 3) e H4 (histona 4). Cada histona está presente em duas cópias, de modo que o DNA (preto) envolve um octâmero de histonas. (b) As caudas amino-terminais de histonas do núcleo. Lisinas (K) nas caudas amino-terminais das histonas H2A, H2B, H3 e H4 são potenciais locais de acetilação/desacetilação para a histona acetiltransferases (HAT) e histonas deacetilases (HDAC). A, acetil; C, carboxila; E, ácido glutâmico; M, metil; N, amino-terminal; P, fosfato; S, serina; Ub, ubiquitina. CAPÍTULO I: Localização cromossômica dos sítios de DNAr e heterocromatina, e suas implicações para a evolução cariotípica em representantes dos gêneros Habranthus, Hippeastrum e Zephyranthes (subtribo Hippeastrinae: Amaryllidaceae) Figura 1 Metáfases mitótica de espécies do gênero Hippeastrum (2n = 22) coradas 190 com CMA (amarelo), DAPI (azul) e hibridizadas com sondas de DNAr 5S (vermelho) e 45S (verde). (a-b) Hippeastrum glaucescens; (c-d) H. puniceum; (e-f); H. striatum (g-h) H. stylosum; (i-j) Hippeastrum sp1. Insertos mostram maior ampliação em a, c, e, g, i das bandas CMA+/DAPI- e em b, d, f, h, j dos sítios de DNAr 5S e 45S. Barra em j corresponde a 10µm. Figura 2 Cariogramas das espécies do gênero Hippeastrum coradas com DAPI (azul) e hibridizadas in situ com sondas de DNAr 5S (vermelho) e 45S (verde). (a) Hippeastrum glaucescens; (b) H. puniceum; (c); H. striatum; (d) H. stylosum; (e) Hippeastrum sp1. Todos os cariogramas foram organizados por ordem decrescente de tamanho. A barra em e vii Pág. corresponde a 10 μm. A linha pontilhada indica a posição do 191 centrômero. Figura 3 Células metafásicas de espécies dos gêneros Habranthus e Zephyranthes 192 coradas com CMA (amarelo), DAPI (azul) e hibridizadas com sondas de DNAr 5S (vermelho) e 45S (verde). (a-b) Habranthus brachyandrus (2n = 12); (c-d) H. sylvaticus (2n = 12); (e-f) Zephyranthes flavissima (2n = 14); (g-h) Z. mesochloa (2n = 24); (i-j) Zephyranthes aff. stellaris (2n = 20). Insertos mostram maior ampliação em a, c, e, g, i das bandas CMA+/DAPI- e em b, d, f, h, j dos sítios de DNAr 5S e 45S. Setas em b apontam bandas mais fortemente coradas com DAPI após a FISH (inserto). Cabeça de setas em i indicam bandas CMA+. Barra em j corresponde a 10µm. Figura 4 Cariogramas das espécies do gênero Habranthus e Zephyranthes coradas 193 com CMA (amarelo) e DAPI (azul) e hibridizadas in situ com sondas de DNAr 5S (vermelho) e 45S (verde). (a) Habranthus brachyandrus; (b) H. sylvaticus (c) Zephyranthes flavissima; (d) Z. mesochloa; (e) Zephyranthes aff. stellaris. Todos os cariogramas foram organizados por ordem decrescente de tamanho. A barra em e corresponde a 10 μm. A linha pontilhada indica a posição do centrômero. CAPÍTULO II:

View Full Text

Details

  • File Type
    pdf
  • Upload Time
    -
  • Content Languages
    English
  • Upload User
    Anonymous/Not logged-in
  • File Pages
    260 Page
  • File Size
    -

Download

Channel Download Status
Express Download Enable

Copyright

We respect the copyrights and intellectual property rights of all users. All uploaded documents are either original works of the uploader or authorized works of the rightful owners.

  • Not to be reproduced or distributed without explicit permission.
  • Not used for commercial purposes outside of approved use cases.
  • Not used to infringe on the rights of the original creators.
  • If you believe any content infringes your copyright, please contact us immediately.

Support

For help with questions, suggestions, or problems, please contact us