Supplementary Material S1: Coefficients for Derivatization Models

Supplementary material

Development of a Gas Chromatography / Mass Spectrometry based

Metabolomics Protocol by means of Statistical Experimental

Design

Anders P. H. Danielsson1,2, Thomas Moritz3, Hindrik Mulder1, Peter Spégel1,*

1 Unit of Molecular Metabolism, Lund University Diabetes Centre, Clinical Research Centre,

Malmö, Sweden.

2 Analytical Chemistry, Faculty of Engineering LTH, Lund University, Lund, Sweden.

3 Umeå Plant Science Center, Swedish University of Agricultural Sciences, Umeå, Sweden.

* To whom correspondence should be addressed. E-mail: [email protected]

S1 Abbreviations

Responses Abbreviation 2-ketobutyrate MEOX TBDMS 2KBA 3-phosphoglyceate 4TBDMS 3PGA 9-cis-Octadecenoate TBDMS FA18U Alanine 13C5 15N 2TBDMS ALAX Alanine 2TBDMS ALA Alpha ketoglutarate MEOX 2TBDMS AKG Alpha ketoisovalerate 13C5 MEOX TBDMS peak 1+2 AKIX Alpha ketoisovalerate 13C5 MEOX TBDMS peak1 AKIX1 Alpha ketoisovalerate 13C5 MEOX TBDMS peak2 AKIX2 Alpha ketoisovalerate MEOX TBDMS peak1 AKI1 Alpha ketoisovalerate MEOX TBDMS peak2 AKI2 Assymetry factor, valine 2TBDMS, 10m column A10V Assymetry factor, valine 2TBDMS, 30m column A30V Cholesterol TBDMS CHO Citrate 4TBDMS CIT Cysteine 3TBDMS CYS Dihydroxyacetone phosphate MEOX 3TBDMS peak1 DHAP1 Dihydroxyacetone phosphate MEOX 3TBDMS peak1+2 DHAP Dihydroxyacetone phosphate MEOX 3TBDMS peak2 DHAP2 Dodecanoate TBDMS FA12 Glyceraldehyde 3-phosphate MEOX 3TBDMS GA3P Glycine 2TBDMS GLY Heptadecanoate TBDMS FA17 Hexadecanoate TBDMS FA16 Histidine 3TBDMS HIS Isocitrate 4TBDMS ISOC Isoleucine 2TBDMS ILE L-5 Hydroxytryptophane 3TBDMS L5HT Lactate 2TBDMS LAC Leucine 2TBDMS LEU Lysine 3TBDMS LYS Malate 3TBDMS MAL Methionine 2TBDMS MET Methyl Stearate MEST N-Acetyl 5-hydroxytryptamine TBDMS NAHT Number of artifact peaks ARP Peak capacity, 10m column (Mean) P10M Peak capacity, 30m column (Mean) P30M Peak capacity, 9-cis-Octadecenoate TBDMS, 10m column P10O Peak capacity, 9-cis-Octadecenoate TBDMS, 30m column P30O Peak capacity, Cholesterol TBDMS, 10m column P10C Peak capacity, Cholesterol TBDMS, 30m column P30C Peak capacity, Valine 2TBDMS, 10m column P10V Peak capacity, Valine 2TBDMS, 30m column P30V Peak height, Cholesterol TBDMS, 10m column H10C Peak height, Cholesterol TBDMS, 30m column H30C Phenylalanine 2TBDMS PHE Phosphoenolpyruvate 3TBDMS PEP Proline 2TBDMS PRO

S2 Abbreviations (continued)

Responses Abbreviation Pyruvate MEOX TBDMS PYR Sample throughput per 24h, 10m column ST10 Sample throughput per 24h, 30m column ST30 Serine 3TBDMS SER Serotonin 2TBDMS SERO Succinate 13C4 2TBDMS SUCX Succinate 2TBDMS SUC Threonine 2TBDMS THR2 Threonine 3TBDMS THR3 Total analysis time, 10m column T10 Total analysis time, 30m column T30 Trans 4-hydroxyproline 2TBDMS T4HP2 Trans 4-hydroxyproline 3TBDMS T4HP3 Tricosanoate TBDMS FA23 Tryptophan 2TBDMS TRP Undecanoate TBDMS FA11 Valine 2TBDMS VAL

Factors Abbreviation Unit Data Acqusition Rate AQC Hz Injector Temperature IJT °C Ion Source Temperature IST °C Initial Gradient Temperature Duration ITD min Initial Gradient Temperature ITE °C Amount Acetonitrile in Methoximation MAC % Methoximation Duration MDU h Methoximation Temperature MTE °C Injector Purge Vent Time PVT s Amount Acetonitrile in Silylation SAC % Silylation Duration SDU min Amount Heptane in Silylation SHP % Amount MTBSTFA in Silylation STB % Silylation Temperature STE °C Temperature Gradient Rate TGR °C/min Volumetric Flow Rate VFR mL/min

S3 Supplementary material S1. Scaled and centered PLS coefficients including 95% confidence intervals for all responses in the derivatization models.

Model a-keto acids Analyte AKIX 2KBA AKI2 PYR AKG MAC -1,59  2,04 -1,80  2,36 -0,62  1,47 -2,22  2,91 -0,20  0,24 MTE -19,53  2,18 * -16,05  2,52 * -15,16  1,57 * -2,97  3,11 -1,94  0,26 * MDU -8,93  2,09 * -10,36  2,42 * -6,19  1,51 * -8,38  2,98 * -1,16  0,25 * SDU STE STB -1,41  10,81 -3,97  12,48 -0,95  7,80 -6,47  15,39 -0,34  1,27 SHP -0,47  9,13 -1,80  10,55 0,06  6,60 -3,67  13,01 -0,16  1,08 SAC -0,80  13,59 -2,95  15,69 0,11  9,81 -5,40  19,35 -0,32  1,60 MAC*MAC MTE*MTE -6,02  4,12 * -14,41  4,76 * -6,10  2,97 * -16,81  5,87 * -1,48  0,48 * MDU*MDU SDU*SDU STE*STE STB*STB -1,00  5,46 -2,33  6,31 -0,58  3,94 -3,84  7,77 -0,20  0,64 SHP*SHP SAC*SAC MAC*MTE -1,57  2,07 -2,95  2,39 * -0,93  1,50 -3,94  2,95 * -0,31  0,24 * MAC*MDU MAC*SDU MAC*STE MAC*STB MAC*SHP MAC*SAC MTE*MDU -6,88  1,96 * -11,43  2,27 * -3,97  1,42 * -14,53  2,79 * -1,21  0,23 * MTE*SDU MTE*STE MTE*STB MTE*SHP MTE*SAC MDU*SDU MDU*STE MDU*STB MDU*SHP MDU*SAC SDU*STE SDU*STB SDU*SHP SDU*SAC STE*STB STE*SHP STE*SAC STB*SHP 0,75  7,54 0,78  8,71 0,64  5,44 0,94  10,74 0,03  0,89 STB*SAC SHP*SAC Q2** 0,85 0,77 0,83 0,71 0,80 R2** 0,93 0,91 0,93 0,86 0,93 Q2*** 0,78 R2*** 0,91 * Significant effect; ** Analyte modeling value; *** Total model value

S4 Supplementary material S1. Scaled and centered PLS coefficients including 95% confidence intervals for all responses in the derivatization models. (continued)

Model Amino acids NH2 Amino acids OH Analyte TRP HIS SER T4HP3 THR3 MAC -0,06  1,25 -0,02  0,64 0,04  0,51 0,18  1,03 0,11  0,98 MTE 0,05  0,21 -0,01  0,11 0,05  0,08 0,08  0,17 -0,02  0,16 MDU -0,24  1,25 -0,03  0,64 -0,02  0,08 -0,14  0,16 -0,15  0,16 SDU 0,04  1,25 0,09  0,64 0,11  0,51 0,51  1,03 0,37  0,98 STE 0,21  0,20 * 0,12  0,10 * 0,11  0,51 0,49  1,03 0,45  0,98 STB 0,15  0,61 0,09  0,31 -0,01  0,21 -0,12  0,42 -0,07  0,40 SHP 0,03  1,47 -0,13  0,75 -0,07  0,26 -0,17  0,53 -0,06  0,50 SAC 0,17  0,67 -0,10  0,34 0,09  0,27 0,42  0,54 0,23  0,52 MAC*MAC 0,06  0,50 -0,07  0,26 MTE*MTE -0,05  0,48 -0,08  0,25 -0,10  0,19 -0,1  0,39 0,34  0,37 MDU*MDU -0,37  0,49 -0,24  0,25 -0,11  0,19 -0,36  0,39 0,16  0,37 SDU*SDU -0,24  0,44 -0,13  0,23 STE*STE 0,19  0,64 0,14  0,32 STB*STB -0,03  0,05 -0,05  0,11 0,03  0,11 SHP*SHP -0,11  0,58 -0,10  0,29 -0,10  0,10 -0,22  0,21 * 0,03  0,20 SAC*SAC 0,01  0,12 0,16  0,23 0,19  0,22 MAC*MTE 0,02  0,08 0,02  0,16 -0,12  0,15 MAC*MDU MAC*SDU MAC*STE -0,17  0,20 -0,08  0,10 MAC*STB -0,08  0,39 -0,05  0,20 -0,02  0,16 -0,01  0,32 0,01  0,31 MAC*SHP 0,21  0,40 0,10  0,20 0,08  0,16 0,07  0,33 0,06  0,31 MAC*SAC -0,04  0,42 -0,01  0,21 -0,05  0,17 -0,05  0,34 -0,07  0,33 MTE*MDU -0,17  0,18 -0,06  0,09 MTE*SDU -0,05  0,08 -0,06  0,15 -0,06  0,15 MTE*STE MTE*STB MTE*SHP MTE*SAC MDU*SDU -0,22  0,19 * -0,10  0,10 * -0,06  0,08 -0,12  0,15 -0,17  0,15 * MDU*STE MDU*STB -0,01  0,39 0,00  0,20 MDU*SHP 0,14  0,40 0,07  0,20 MDU*SAC -0,12  0,42 -0,07  0,21 SDU*STE 0,01  0,08 0,29  0,16 * 0,29  0,16 * SDU*STB -0,12  0,39 -0,04  0,20 0,00  0,16 0  0,32 0,09  0,31 SDU*SHP 0,21  0,40 0,09  0,20 0,07  0,16 -0,08  0,33 -0,12  0,31 SDU*SAC 0,04  0,42 0,00  0,21 -0,08  0,17 0,08  0,34 -0,05  0,33 STE*STB 0,03  0,16 0,04  0,32 0,18  0,31 STE*SHP 0,03  0,16 -0,05  0,33 -0,17  0,31 STE*SAC -0,09  0,17 -0,03  0,34 -0,19  0,33 STB*SHP 0,20  0,75 0,03  0,38 0,11  0,11 0,29  0,23 * 0,02  0,22 STB*SAC 0,00  0,13 -0,09  0,26 -0,13  0,24 SHP*SAC -0,01  0,17 -0,14  0,35 -0,10  0,33 Q2** 0,49 0,65 0,58 0,77 0,63 R2** 0,80 0,83 0,86 0,94 0,91 Q2*** 0,57 0,68 R2*** 0,82 0.90 * Significant effect; ** Analyte modeling value; *** Total model value

Model Carboxylic acids OH Analyte LAC ISOC CHO GA3P LEU MAC 0,08  0,10 -0,02  1,26 MTE -0,50  0,20 * -0,21  0,08 * 0,08  0,10 0,00  0,20 MDU -0,59  0,20 * -0,37  0,08 * -0,16  0,10 * 0,00  0,02 -0,07  1,26 SDU -0,27  0,20 * -0,12  0,08 * 0,21  0,10 * 0,03  0,12 -0,13  0,19 STE 0,21  0,66 0,05  0,02 * 0,07  0,20 STB -0,35  1,06 -0,06  0,44 -0,09  0,24 0,02  0,04 0,01  0,41 SHP -0,21  0,90 -0,08  0,37 -0,20  0,41 -0,03  0,07 0,24  0,53 SAC -0,25  1,34 -0,08  0,55 0,17  0,25 -0,05  0,05 * 0,30  0,44 MAC*MAC -0,15  0,26 MTE*MTE MDU*MDU -0,15  0,25 -0,07  0,04 * -0,17  0,40 SDU*SDU -0,43  0,43 -0,13  0,18 -0,15  0,23 STE*STE 0,08  0,30 STB*STB -0,23  0,54 -0,06  0,22 SHP*SHP -0,14  0,20 -0,02  0,03 SAC*SAC MAC*MTE -0,17  0,19 MAC*MDU MAC*SDU MAC*STE -0,20  0,19 * MAC*STB -0,03  0,39 MAC*SHP 0,17  0,40 MAC*SAC -0,11  0,42 MTE*MDU -0,27  0,19 * -0,11  0,08 * MTE*SDU -0,07  0,10 MTE*STE MTE*STB MTE*SHP MTE*SAC MDU*SDU -0,20  0,19 * MDU*STE MDU*STB -0,06  0,39 MDU*SHP 0,19  0,40 MDU*SAC -0,08  0,42 SDU*STE 0,01  0,02 -0,14  0,19 SDU*STB -0,01  0,04 SDU*SHP 0,02  0,04 SDU*SAC 0,01  0,04 STE*STB 0,04  0,21 STE*SHP 0,04  0,21 STE*SAC -0,13  0,22 STB*SHP 0,10  0,72 0,03  0,30 0,17  0,52 STB*SAC SHP*SAC Q2** 0,59 0,66 0,69 0,68 0,36 R2** 0,74 0,79 0,85 0,81 0,68 Q2*** 0,63 0,69 0,68 0,36 R2*** 0,76 0,85 0,81 0,68 * Significant effect; ** Analyte modeling value; *** Total model value

Model Fatty acids Analyte FA12 FA23 FA16 PEP PRO MAC 0,18  2,02 MTE -0,21  0,37 -0,13  0,09 * -0,68  0,21 * -0,59  0,05 * MDU -1,46  0,37 * -0,42  0,09 * -0,90  0,21 * -0,17  0,05 * -0,23  2,02 SDU -0,40  0,37 * -0,11  0,09 * -0,22  0,21 * -0,14  0,30 STE STB -0,07  0,78 0,00  0,19 0,12  0,45 0,01  0,12 -0,71  1,60 SHP -0,11  0,80 -0,03  0,19 -0,04  0,46 -0,04  0,23 -0,39  1,38 SAC 0,26  0,83 0,03  0,20 -0,19  0,48 -0,06  0,12 -0,05  2,16 MAC*MAC MTE*MTE 0,48  0,11 * MDU*MDU 0,07  0,11 -0,46  0,71 SDU*SDU STE*STE STB*STB -0,35  0,64 SHP*SHP -0,02  0,12 SAC*SAC 0,24  0,69 MAC*MTE MAC*MDU MAC*SDU MAC*STE MAC*STB 0,01  0,63 MAC*SHP 0,23  0,64 MAC*SAC -0,26  0,67 MTE*MDU 0,14  0,04 * MTE*SDU MTE*STE MTE*STB MTE*SHP MTE*SAC MDU*SDU -0,28  0,29 MDU*STE MDU*STB -0,13  0,63 MDU*SHP 0,28  0,64 MDU*SAC -0,03  0,67 SDU*STE SDU*STB SDU*SHP SDU*SAC STE*STB STE*SHP STE*SAC STB*SHP STB*SAC SHP*SAC -0,04  0,18 Q2** 0,57 0,64 0,65 0,93 0,49 R2** 0,65 0,72 0,75 0,97 0,69 Q2*** 0,62 0,93 0,49 R2*** 0,75 0,97 0,69 * Significant effect; ** Analyte modeling value; *** Total model value

Model Amines OH Analyte SERO L5HT SUC DHAP Artifacts MAC -2,58  30,57 -0,04  0,36 -0,18  0,25 -0,02  0,41 -22,36  160,94 MTE -0,29  0,25 * 0,02  0,07 37,55  26,03 * MDU -1,11  30,59 -0,14  0,36 -0,50  0,25 * -0,02  0,41 23,05  25,46 SDU 5,42  4,59 * 0,02  0,05 -0,32  0,25 * -0,02  0,41 8,96  24,55 STE 6,09  4,75 * 0,08  0,06 * -0,37  0,24 * -0,01  0,41 32,72  161,06 STB 8,20  9,85 0,08  0,12 -0,18  0,66 -0,02  0,38 12,36  67,02 SHP -5,01  12,60 -0,01  0,15 0,07  0,63 -0,10  0,52 -8,67  82,89 SAC 1,77  10,73 0,04  0,13 0,09  1,35 -0,07  0,50 -15,03  86,20 MAC*MAC MTE*MTE -0,16  0,15 * MDU*MDU -14,04  9,55 * -0,24  0,11 * -0,14  0,16 SDU*SDU 21,26  57,65 STE*STE 29,13  77,17 STB*STB -0,04  0,19 9,31  17,62 SHP*SHP -0,08  0,19 2,65  31,78 SAC*SAC 0,21  0,70 3,26  37,90 MAC*MTE 0,05  0,06 MAC*MDU 0,13  0,24 MAC*SDU 0,16  0,25 MAC*STE -30,50  25,37 * MAC*STB -2,60  9,55 -0,02  0,11 -0,04  0,13 -28,32  50,83 MAC*SHP 4,83  9,73 0,04  0,11 0,07  0,13 28,17  51,88 MAC*SAC 0,30  10,14 0,01  0,12 0,00  0,14 29,00  54,15 MTE*MDU 0,17  0,23 -0,05  0,06 13,00  24,04 MTE*SDU 0,19  0,25 -0,04  0,06 10,78  24,77 MTE*STE 0,19  0,24 MTE*STB MTE*SHP MTE*SAC MDU*SDU -3,55  4,46 -0,08  0,05 * 26,94  24,75 * MDU*STE 0,19  0,24 MDU*STB 0,81  9,56 0,00  0,11 0,02  0,13 MDU*SHP 1,42  9,72 0,03  0,11 0,03  0,13 MDU*SAC -3,15  10,14 -0,03  0,12 -0,06  0,14 SDU*STE -2,23  4,51 -0,03  0,05 0,15  0,25 -0,07  0,07 * SDU*STB -0,02  0,13 SDU*SHP 0,12  0,13 SDU*SAC -0,08  0,14 STE*STB 0,02  0,13 22,07  50,87 STE*SHP 0,05  0,13 -18,61  52,07 STE*SAC -0,09  0,14 -25,32  54,19 STB*SHP 4,03  11,79 0,06  0,14 0,05  0,31 -18,20  35,87 STB*SAC -19,31  41,21 SHP*SAC -0,33  0,98 31,78  54,72 Q2** 0,52 0,59 0,47 0,59 0,57 R2** 0,71 0,78 0,75 0,88 0,84 Q2*** 0,55 0,47 0,59 0,57 R2*** 0,74 0,75 0,88 0,84 * Significant effect; ** Analyte modeling value; *** Total model value

Model Analyte 3PGA CYS MAC -0,39  0,39 * MTE -0,14  0,05 * -1,03  0,39 * MDU -0,14  0,34 -0,97  2,57 SDU 0,48  0,38 * STE STB 0,01  0,11 0,00  1,15 SHP 0,00  0,11 -0,35  1,25 SAC -0,02  0,11 -0,42  2,81 MAC*MAC MTE*MTE MDU*MDU -0,12  0,10 * SDU*SDU 0,68  0,85 STE*STE STB*STB SHP*SHP SAC*SAC 0,33  1,12 MAC*MTE MAC*MDU MAC*SDU MAC*STE MAC*STB MAC*SHP MAC*SAC MTE*MDU -0,07  0,05 * -0,52  0,37 * MTE*SDU MTE*STE MTE*STB MTE*SHP MTE*SAC MDU*SDU MDU*STE MDU*STB 0,01  0,11 -0,22  0,80 MDU*SHP 0,02  0,11 0,47  0,82 MDU*SAC -0,05  0,11 -0,03  0,85 SDU*STE SDU*STB SDU*SHP SDU*SAC STE*STB STE*SHP STE*SAC STB*SHP STB*SAC -0,40  1,51 SHP*SAC Q2** 0,53 0,58 R2** 0,70 0,76 Q2*** 0,53 0,58 R2*** 0,70 0,76 * Significant effect; ** Analyte modeling value; *** Total model value

S9 Supplementary material S2. Scaled and centered PLS coefficients including 95% confidence intervals for all responses in the injection model.

PYR 2KBA AKIX IJT 1829820,00 ± 974097,00 * 425496,00 ± 549120,00 973168,00 ± 797449,00 * PVT 17346500,00 ± 974097,00 * 9997400,00 ± 549121,00 * 14992300,00 ± 797450,00 * PVT*PVT -5474380,00 ± 987915,00 * -3238780,00 ± 556910,00 * -4812360,00 ± 808761,00 * IJT*PVT 596131,00 ± 855559,00 -49686,40 ± 482298,00 134956,00 ± 700408,00 R2 0,97 0,97 0,97 Q2 0,98 0,98 0,98 THR2 SUCX SUC IJT -47214,30 ± 8880,62 * 2883890,00 ± 858252,00 * 742243,00 ± 218962,00 * PVT 62996,90 ± 8880,62 * 13874300,00 ± 858252,00 * 3558940,00 ± 218962,00 * PVT*PVT -27047,20 ± 9006,59 * -4189620,00 ± 870426,00 * -1074360,00 ± 222068,00 * IJT*PVT -31503,60 ± 7799,94 * 1364680,00 ± 753811,00 * 351614,00 ± 192317,00 * R2 0,92 0,94 0,95 Q2 0,93 0,98 0,98 PHE MAL T4HP3 IJT 579705,00 ± 173986,00 * 757273,00 ± 215374,00 * 171573,00 ± 71570,40 * PVT 2478560,00 ± 173987,00 * 3192440,00 ± 215374,00 * 701714,00 ± 71570,40 * PVT*PVT -739867,00 ± 176455,00 * -951554,00 ± 218429,00 * -208475,00 ± 72585,60 * IJT*PVT 284122,00 ± 152814,00 * 372582,00 ± 189165,00 * 85096,20 ± 62861,00 * R2 0,93 0,94 0,89 Q2 0,97 0,97 0,94 CIT ISOC 3PGA IJT 427257,00 ± 90359,70 * 444218,00 ± 117429,00 * 191891,00 ± 80480,60 * PVT 1094330,00 ± 90359,80 * 1213440,00 ± 117429,00 * 679169,00 ± 80480,60 * PVT*PVT -303872,00 ± 91641,50 * -340877,00 ± 119095,00 * -198340,00 ± 81622,20 * IJT*PVT 232532,00 ± 79363,90 * 239374,00 ± 103139,00 * 98509,30 ± 70686,90 * R2 0,94 0,93 0,90 Q2 0,96 0,95 0,92 ILE THR3 HIS IJT 1035300,00 ± 319231,00 * 268538,00 ± 79297,60 * 452600,00 ± 108554,00 * PVT 4695530,00 ± 319231,00 * 1154340,00 ± 79297,70 * 913400,00 ± 108554,00 * PVT*PVT -1410020,00 ± 323760,00 * -344771,00 ± 80422,50 * -240861,00 ± 110093,00 * IJT*PVT 498918,00 ± 280384,00 * 131419,00 ± 69647,90 * 254087,00 ± 95343,70 * R2 0,93 0,93 0,89 Q2 0,97 0,97 0,93 ALA ALAX GLY IJT 387906,00 ± 141819,00 * 805729,00 ± 387145,00 * 651013,00 ± 221251,00 * PVT 2489990,00 ± 141820,00 * 7473370,00 ± 387145,00 * 3240970,00 ± 221251,00 * PVT*PVT -769152,00 ± 143831,00 * -2356210,00 ± 392637,00 * -981688,00 ± 224390,00 * IJT*PVT 163865,00 ± 124561,00 * 267701,00 ± 340033,00 304625,00 ± 194327,00 * R2 0,96 0,97 0,93 Q2 0,98 0,98 0,97 FA12 T4HP2 MET IJT 3098020,00 ± 900227,00 * -320367,00 ± 299927,00 * 660411,00 ± 210814,00 * PVT 11538200,00 ± 900228,00 * 1766910,00 ± 299927,00 * 2924740,00 ± 210814,00 * PVT*PVT -3391090,00 ± 912997,00 * -625041,00 ± 304182,00 * -876201,00 ± 213804,00 * IJT*PVT 1572300,00 ± 790679,00 * -256057,00 ± 263429,00 320484,00 ± 185160,00 * R2 0,92 0,81 0,93 Q2 0,96 0,85 0,97

S10 Supplementary material S2. Scaled and centered PLS coefficients including 95% confidence intervals for all responses in the injection model. (continued)

FA16 GA3P FA17 IJT 1926700,00 ± 461318,00 * 12505,90 ± 8980,58 * 2176640,00 ± 467736,00 * PVT 5941560,00 ± 461318,00 * 82035,60 ± 8980,59 * 6174400,00 ± 467736,00 * PVT*PVT -1702140,00 ± 467862,00 * -25377,10 ± 9107,98 * -1745640,00 ± 474371,00 * IJT*PVT 1016810,00 ± 405180,00 * 5227,35 ± 7887,74 1165690,00 ± 410817,00 * R2 0,93 0,88 0,94 Q2 0,97 0,93 0,97 NAHT FA23 L5HT IJT 141898,00 ± 16334,20 * 1513230,00 ± 167258,00 * 192444,00 ± 42444,70 * PVT 130854,00 ± 16334,20 * 1513910,00 ± 167258,00 * 235540,00 ± 42444,70 * PVT*PVT -24253,40 ± 16565,90 * -297687,00 ± 169630,00 * -52035,30 ± 43046,80 * IJT*PVT 84570,90 ± 14346,50 * 898144,00 ± 146904,00 * 112863,00 ± 37279,60 * R2 0,95 0,96 0,87 Q2 0,96 0,97 0,89 LAC FA11 PEP IJT 587972,00 ± 207730,00 * 2102050,00 ± 630495,00 * -561206,00 ± 146013,00 * PVT 3339330,00 ± 207730,00 * 8648530,00 ± 630495,00 * 742952,00 ± 146013,00 * PVT*PVT -1022500,00 ± 210677,00 * -2571100,00 ± 639439,00 * -319564,00 ± 148085,00 * IJT*PVT 262111,00 ± 182451,00 * 1040950,00 ± 553770,00 * -374278,00 ± 128245,00 * R2 0,95 0,93 0,85 Q2 0,98 0,97 0,88 DHAP LEU AKG IJT 240702,00 ± 81920,90 * 679323,00 ± 214117,00 * 471954,00 ± 195191,00 * PVT 719182,00 ± 81921,00 * 2777990,00 ± 214117,00 * 2499060,00 ± 195191,00 * PVT*PVT -205035,00 ± 83083,00 * -825312,00 ± 217155,00 * -760958,00 ± 197960,00 * IJT*PVT 127759,00 ± 71952,00 * 336940,00 ± 188061,00 * 216117,00 ± 171438,00 * R2 0,88 0,92 0,93 Q2 0,93 0,96 0,96 AKI2 CHO SER IJT 821634,00 ± 789327,00 * 800286,00 ± 104954,00 * 218472,00 ± 70271,40 * PVT 13482900,00 ± 789327,00 * 723337,00 ± 104954,00 * 834981,00 ± 70271,40 * PVT*PVT -4334990,00 ± 800524,00 * -131952,00 ± 106443,00 * -246163,00 ± 71268,20 * IJT*PVT 87889,60 ± 693274,00 477433,00 ± 92182,20 * 110206,00 ± 61720,10 * R2 0,97 0,93 0,91 Q2 0,98 0,95 0,96 PRO SERO LYS IJT 197383,00 ± 93599,00 * 897242,00 ± 228787,00 * 141842,00 ± 38495,00 * PVT 1074630,00 ± 93599,00 * 2049650,00 ± 228787,00 * 481054,00 ± 38495,00 * PVT*PVT -327964,00 ± 94926,70 * -556238,00 ± 232033,00 * -139696,00 ± 39041,10 * IJT*PVT 89455,60 ± 82208,90 * 496162,00 ± 200946,00 * 73478,10 ± 33810,60 * R2 0,93 0,91 0,92 Q2 0,95 0,94 0,96 CYS FA18U MEST IJT 251981,00 ± 76271,50 * 1890420,00 ± 374186,00 * 248413,00 ± 43012,90 * PVT 918590,00 ± 76271,50 * 4447020,00 ± 374187,00 * 468704,00 ± 43013,00 * PVT*PVT -269264,00 ± 77353,40 * -1214330,00 ± 379495,00 * -121445,00 ± 43623,10 * IJT*PVT 128513,00 ± 66990,00 * 1041320,00 ± 328652,00 * 140488,00 ± 37778,70 * R2 0,92 0,94 0,93 Q2 0,96 0,96 0,96

S11 Supplementary material S2. Scaled and centered PLS coefficients including 95% confidence intervals for all responses in the injection model. (continued)

TRP VAL IJT 500484,00 ± 124519,00 * 834847,00 ± 249259,00 * PVT 1218440,00 ± 124519,00 * 3347410,00 ± 249260,00 * PVT*PVT -335041,00 ± 126286,00 * -992315,00 ± 252795,00 * IJT*PVT 274388,00 ± 109367,00 * 416181,00 ± 218927,00 * R2 0,92 0,93 Q2 0,94 0,97

S12 Supplementary material S3. Scaled and centered PLS coefficients including 95% confidence intervals for all responses in the chromatography model.

P30V P30O P30C ITE 8,53  2,33 * 3,10  4,34 -3,28  2,93 * ITD -2,98  2,33 * 0,84  4,34 4,78  2,93 * TGR -30,72  2,33 * -37,89  4,34 * -45,01  2,93 * PVT -13,39  2,33 * -3,29  4,34 -1,47  2,93 VFR -31,73  2,33 * -34,96  4,34 * -3,29  2,93 * ITE*ITE -0,17  5,01 -0,25  9,32 4,69  6,29 ITD*ITD 1,58  5,01 3,80  9,32 5,32  6,29 TGR*TGR 7,14  5,01 * 9,63  9,32 * 11,23  6,29 * PVT*PVT 3,46  5,01 3,28  9,32 2,81  6,29 VFR*VFR 2,30  5,01 1,77  9,32 1,32  6,29 ITE*ITD 1,60  1,96 1,16  3,65 0,89  2,46 ITE*TGR 2,05  1,96 * 2,83  3,65 -2,17  2,46 ITE*PVT -1,46  1,96 -3,71  3,65 * -2,80  2,46 * ITE*VFR 2,67  1,96 * 3,23  3,65 2,15  2,46 ITD*TGR 0,33  1,96 1,06  3,65 1,50  2,46 ITD*PVT -0,29  1,96 0,69  3,65 1,93  2,46 ITD*VFR 0,45  1,96 0,07  3,65 -3,26  2,46 * TGR*PVT -1,48  1,96 -2,19  3,65 -3,76  2,46 * TGR*VFR 1,19  1,96 -0,07  3,65 -3,70  2,46 * PVT*VFR 2,23  1,96 * 0,22  3,65 -0,32  2,46 R2 .96 0,90 0,94 Q2 0,93 0,84 0,91 P30M P10V P10O ITE 2,19  2,46 6,97  2,51 * 3,97  3,34 * ITD 1,61  2,46 -5,92  2,51 * -0,37  3,34 TGR -41,35  2,46 * -25,86  2,51 * -34,90  3,34 * PVT -5,92  2,46 * -19,75  2,51 * -6,94  3,34 * VFR -22,42  2,46 * -25,01  2,51 * -21,43  3,34 * ITE*ITE 0,68  5,27 -1,47  5,38 1,10  7,18 ITD*ITD 2,62  5,27 -0,34  5,38 2,46  7,18 TGR*TGR 8,62  5,27 * 2,82  5,38 7,28  7,18 * PVT*PVT 2,13  5,27 1,21  5,38 2,38  7,18 VFR*VFR 0,86  5,27 0,98  5,38 1,44  7,18 ITE*ITD 0,86  2,07 -0,96  2,11 0,19  2,81 ITE*TGR 0,38  2,07 -1,74  2,11 -0,53  2,81 ITE*PVT -2,80  2,07 * -4,22  2,11 * -2,24  2,81 ITE*VFR 2,36  2,07 * 1,98  2,11 1,48  2,81 ITD*TGR 1,14  2,07 0,62  2,11 0,63  2,81 ITD*PVT 0,56  2,07 -1,25  2,11 -0,36  2,81 ITD*VFR -0,92  2,07 0,58  2,11 -0,49  2,81 TGR*PVT -2,20  2,07 * -0,29  2,11 -0,89  2,81 TGR*VFR 0,09  2,07 5,50  2,11 * 2,69  2,81 PVT*VFR 0,66  2,07 2,20  2,11 * 0,89  2,81 R2 0,96 0,95 0,91 Q2 0,93 0,90 0,86

S13 Supplementary material S3. Scaled and centered PLS coefficients including 95% confidence intervals for all responses in the chromatography model. (continued)

P10C P10M T10 ITE 0,28  2,57 3,74  1,71 -40,16  12,69 * ITD 1,86  2,57 -1,48  1,71 92,09  12,69 * TGR -30,36  2,57 * -30,37  1,71 * -351,00  12,69 * PVT -4,75  2,57 * -10,48  1,71 * 3,92  12,69 VFR -11,03  2,57 * -19,15  1,71 * -24,91  12,69 * ITE*ITE 0,42  5,51 0,02  3,68 26,30  27,24 ITD*ITD 0,60  5,51 0,91  3,68 19,77  27,24 TGR*TGR 3,33  5,51 4,48  3,68 * 65,42  27,24 * PVT*PVT 0,49  5,51 1,36  3,68 25,09  27,24 VFR*VFR 0,77  5,51 1,06  3,68 26,64  27,24 ITE*ITD -1,93  2,16 -0,90  1,44 2,72  10,67 ITE*TGR -2,20  2,16 * -1,49  1,44 * 13,84  10,67 * ITE*PVT -2,31  2,16 * -2,92  1,44 * 3,43  10,67 ITE*VFR -0,64  2,16 0,94  1,44 -2,95  10,67 ITD*TGR 1,06  2,16 0,77  1,44 19,41  10,67 * ITD*PVT -1,54  2,16 -1,05  1,44 1,48  10,67 ITD*VFR 0,39  2,16 0,16  1,44 1,74  10,67 TGR*PVT 1,37  2,16 0,07  1,44 -4,28  10,67 TGR*VFR 6,98  2,16 * 5,05  1,44 * 4,75  10,67 PVT*VFR 0,27  2,16 1,12  1,44 0,95  10,67 R2 0,92 0,97 0,98 Q2 0,87 0,94 0,96 As10V T30 As30V ITE 0,11  0,02 * -37,17  13,76 * 0,02  0,01 ITD -0,04  0,02 * 92,63  13,76 * 0,00  0,01 TGR 0,10  0,02 * -378,35  13,76 * 0,06  0,01 * PVT 0,06  0,02 * 4,60  13,76 -0,01  0,01 VFR 0,03  0,02 * -55,35  13,76 * 0,00  0,01 ITE*ITE 0,05  0,04 * 29,28  29,54 0,00  0,03 ITD*ITD 0,02  0,04 26,78  29,54 -0,01  0,03 TGR*TGR 0,02  0,04 77,33  29,54 * -0,01  0,03 PVT*PVT 0,03  0,04 31,23  29,54 * 0,01  0,03 VFR*VFR 0,02  0,04 30,95  29,54 * 0,01  0,03 ITE*ITD 0,02  0,02 * 4,90  11,57 0,01  0,01 ITE*TGR -0,01  0,02 17,62  11,57 * 0,01  0,01 * ITE*PVT 0,08  0,02 * 1,03  11,57 0,02  0,01 * ITE*VFR -0,03  0,02 * 0,52  11,57 -0,01  0,01 ITD*TGR -0,03  0,02 * 19,90  11,57 * 0,00  0,01 ITD*PVT -0,02  0,02 * 2,95  11,57 0,00  0,01 ITD*VFR -0,01  0,02 1,31  11,57 0,01  0,01 TGR*PVT 0,03  0,02 * -7,17  11,57 0,01  0,01 TGR*VFR 0,02  0,02 * 1,34  11,57 0,00  0,01 PVT*VFR 0,01  0,02 0,83  11,57 0,01  0,01 R2 0,91 0,98 0,71 Q2 0,85 0,97 0,56

S14 Supplementary material S3. Scaled and centered PLS coefficients including 95% confidence intervals for all responses in the chromatography model. (continued)

H10C H30C ST30 ITE -203,53  1395,32 -837,14  1065,80 1,05  0,33 * ITD -296,48  1395,32 319,98  1065,80 -2,54  0,33 * TGR 8863,44  1395,32 * 1102,84  1065,80 * 9,75  0,33 * PVT 7854,60  1395,32 * 6495,10  1065,80 * -0,05  0,33 VFR -769,22  1395,32 131,15  1065,80 1,48  0,33 * ITE*ITE -1680,36  2995,04 -1223,71  2287,72 -0,37  0,70 ITD*ITD -962,73  2995,04 -512,94  2287,72 -0,33  0,70 TGR*TGR -2402,72  2995,04 -696,38  2287,72 -1,71  0,70 * PVT*PVT -1855,03  2995,05 -1855,85  2287,72 -0,51  0,70 VFR*VFR -1832,61  2995,04 -2238,40  2287,72 -0,49  0,70 ITE*ITD -549,68  1172,73 -32,45  895,77 -0,22  0,27 ITE*TGR 110,20  1172,73 -317,13  895,77 -0,64  0,27 * ITE*PVT 509,86  1172,73 -17,47  895,77 -0,05  0,27 ITE*VFR -965,80  1172,73 -197,58  895,77 -0,09  0,27 ITD*TGR -634,26  1172,73 -348,45  895,77 -0,56  0,27 * ITD*PVT -532,81  1172,73 194,98  895,77 -0,15  0,27 ITD*VFR 386,94  1172,73 -542,97  895,77 -0,06  0,27 TGR*PVT 1340,80  1172,73 * 36,20  895,77 0,28  0,27 * TGR*VFR 1770,19  1172,73 * -235,59  895,77 0,23  0,27 PVT*VFR -971,96  1172,73 -876,52  895,77 -0,05  0,27 R2 0,85 0,74 0,98 Q2 0,81 0,66 0,97 ST10 ITE 1,58  0,35 * ITD -3,35  0,35 * TGR 12,06  0,35 * PVT -0,01  0,35 VFR 0,66  0,35 * ITE*ITE -0,41  0,75 ITD*ITD -0,17  0,75 TGR*TGR -1,77  0,75 * PVT*PVT -0,41  0,75 VFR*VFR -0,50  0,75 ITE*ITD -0,10  0,29 ITE*TGR -0,56  0,29 * ITE*PVT -0,09  0,29 ITE*VFR 0,08  0,29 ITD*TGR -0,73  0,29 * ITD*PVT -0,08  0,29 ITD*VFR -0,11  0,29 TGR*PVT 0,18  0,29 TGR*VFR -0,07  0,29 PVT*VFR -0,05  0,29 R2 0,99 Q2 0,97

S15 Supplementary material S4: Scaled and centered PLS coefficients including 95% confidence intervals for all responses in the [M-57]+ fragment mass spectrometry model.

LYS HIS CYS IST 0,0069 ± 0,0026 * 0,0213 ± 0,0070 * 0,0169 ± 0,0052 * ACQ 0,0006 ± 0,0026 -0,0016 ± 0,0070 -0,0010 ± 0,0052 ACQ*ACQ 0,0028 ± 0,0026 * 0,0059 ± 0,0071 0,0048 ± 0,0052 IST*ACQ -0,0010 ± 0,0022 -0,0038 ± 0,0061 -0,0030 ± 0,0045 Q2 0,43 0,45 0,51 R2 0,54 0,58 0,62 PEP DHAP1 DHAP2 IST 0,0154 ± 0,0056 * 0,0075 ± 0,0021 * 0,0056 ± 0,0017 * ACQ -0,0020 ± 0,0056 -0,0003 ± 0,0021 0,0004 ± 0,0017 ACQ*ACQ 0,0035 ± 0,0057 0,0023 ± 0,0021 * 0,0023 ± 0,0018 * IST*ACQ -0,0030 ± 0,0049 -0,0013 ± 0,0018 -0,0008 ± 0,0015 Q2 0,42 0,57 0,54 R2 0,53 0,67 0,62 FA12 FA18U FA16 IST 0,2910 ± 0,0558 * 0,1497 ± 0,0310 * 0,1743 ± 0,0334 * ACQ -0,0303 ± 0,0558 -0,0153 ± 0,0310 -0,0178 ± 0,0334 ACQ*ACQ 0,0726 ± 0,0566 * 0,0376 ± 0,0314 * 0,0438 ± 0,0339 * IST*ACQ -0,0547 ± 0,0490 * -0,0281 ± 0,0272 * -0,0327 ± 0,0293 * Q2 0,71 0,68 0,71 R2 0,80 0,78 0,80 FA23 SERO L5HT IST 0,0362 ± 0,0084 * 0,0507 ± 0,0184 * 0,0012 ± 0,0018 ACQ -0,0549 ± 0,0084 * -0,0101 ± 0,0184 -0,0060 ± 0,0018 * ACQ*ACQ -0,0341 ± 0,0085 * 0,0085 ± 0,0186 -0,0047 ± 0,0018 * IST*ACQ -0,0194 ± 0,0074 * -0,0107 ± 0,0161 -0,0017 ± 0,0016 * Q2 0,90 0,40 0,70 R2 0,92 0,53 0,73 SER CIT FA17 IST 0,0114 ± 0,0039 * 0,0310 ± 0,0104 * 0,2151 ± 0,0426 * ACQ -0,0006 ± 0,0039 -0,0069 ± 0,0104 -0,0232 ± 0,0426 ACQ*ACQ 0,0033 ± 0,0040 0,0046 ± 0,0106 0,0530 ± 0,0432 * IST*ACQ -0,0020 ± 0,0035 -0,0067 ± 0,0092 -0,0406 ± 0,0374 * Q2 0,44 0,43 0,70 R2 0,56 0,57 0,79 AKIX2 AKI1 CHO IST 0,1508 ± 0,0347 * 0,1248 ± 0,0481 * 0,0164 ± 0,0045 * ACQ 0,0006 ± 0,0347 -0,0024 ± 0,0481 -0,0330 ± 0,0045 * ACQ*ACQ 0,0514 ± 0,0352 * 0,0401 ± 0,0488 -0,0223 ± 0,0046 * IST*ACQ -0,0243 ± 0,0305 -0,0209 ± 0,0422 -0,0108 ± 0,0039 * Q2 0,62 0,39 0,90 R2 0,74 0,51 0,93 FA11 IST 0,1936 ± 0,0364 * ACQ -0,0236 ± 0,0364 ACQ*ACQ 0,0454 ± 0,0369 * IST*ACQ -0,0372 ± 0,0319 * Q2 0,72 R2 0,81

S16 Supplementary material S5: Scaled and centered PLS coefficients including 95% confidence intervals for all responses in the [M-57]+ fragment / low m/z-fragment-ratio mass

S17 spectrometry model.

S18 ALA ALAX GLY IST -0,0447 ± 0,0120 * -0,0407 ± 0,0180 * -0,0700 ± 0,0081 * ACQ 0,0630 ± 0,0120 * 0,0640 ± 0,0180 * 0,0597 ± 0,0081 * IST*IST -0,0082 ± 0,0124 -0,0101 ± 0,0186 -0,0078 ± 0,0084 ACQ*ACQ -0,7950 ± 0,0124 * -0,8033 ± 0,0186 * -0,7673 ± 0,0084 * IST*ACQ 0,0034 ± 0,0106 -0,0023 ± 0,0159 0,0021 ± 0,0072 Q2 1,00 0,99 1,00 R2 1,00 1,00 1,00 THR3 PHE T4HP3 IST -0,0930 ± 0,0064 * -0,2035 ± 0,0327 * -0,1407 ± 0,0069 * ACQ 0,0032 ± 0,0064 -0,0137 ± 0,0327 -0,0021 ± 0,0069 IST*IST 0,0026 ± 0,0066 0,0137 ± 0,0338 0,0030 ± 0,0071 ACQ*ACQ 0,0003 ± 0,0066 0,0003 ± 0,0338 0,0019 ± 0,0071 IST*ACQ 0,0031 ± 0,0057 0,0192 ± 0,0289 0,0065 ± 0,0061 * Q2 0,85 0,71 0,88 R2 0,97 0,85 0,98 MET SER TRP IST -0,2286 ± 0,0200 * -0,1287 ± 0,0165 * -0,3970 ± 0,0648 * ACQ -0,0113 ± 0,0200 -0,0058 ± 0,0165 -0,0542 ± 0,0648 IST*IST 0,0046 ± 0,0207 0,0125 ± 0,0171 0,0340 ± 0,0669 ACQ*ACQ 0,0124 ± 0,0207 -0,0026 ± 0,0171 0,0619 ± 0,0669 IST*ACQ 0,0195 ± 0,0177 * 0,0079 ± 0,0146 0,0944 ± 0,0571 * Q2 0,83 0,77 0,76 R2 0,95 0,90 0,86 FA12 FA16 FA17 IST -0,2679 ± 0,0382 * -0,0941 ± 0,0274 * -0,1060 ± 0,0267 * ACQ -0,0025 ± 0,0382 -0,0041 ± 0,0274 -0,0027 ± 0,0267 IST*IST 0,0283 ± 0,0394 0,0271 ± 0,0283 0,0142 ± 0,0275 ACQ*ACQ -0,0105 ± 0,0394 -0,0034 ± 0,0283 -0,0038 ± 0,0275 IST*ACQ 0,0036 ± 0,0337 0,0128 ± 0,0242 0,0136 ± 0,0235 Q2 0,74 0,49 0,56 R2 0,88 0,65 0,70 VAL PRO PEP IST -0,0622 ± 0,0055 * -0,0176 ± 0,0016 * -0,0922 ± 0,0296 * ACQ 0,0616 ± 0,0055 * -0,0002 ± 0,0016 -0,0082 ± 0,0296 IST*IST -0,0030 ± 0,0057 -0,0018 ± 0,0016 * -0,0002 ± 0,0306 ACQ*ACQ -0,7698 ± 0,0057 * 0,0012 ± 0,0016 -0,0210 ± 0,0306 IST*ACQ 0,0013 ± 0,0048 0,0013 ± 0,0014 -0,0175 ± 0,0261 Q2 1,00 0,85 0,40 R2 1,00 0,95 0,60

Supplementary material S5: Scaled and centered PLS coefficients including 95% confidence intervals for all responses in the [M-57]+ fragment / low m/z-fragment-ratio mass spectrometry model. (continued)

S19 CYS LYS 2KBA IST -0,1242 ± 0,0052 * -0,0156 ± 0,0006 * -0,0136 ± 0,0346 ACQ -0,0020 ± 0,0052 0,0008 ± 0,0006 * 0,0494 ± 0,0346 * IST*IST -0,0053 ± 0,0054 -0,0001 ± 0,0007 0,0212 ± 0,0357 ACQ*ACQ 0,0044 ± 0,0054 0,0001 ± 0,0007 -0,7500 ± 0,0357 * IST*ACQ 0,0010 ± 0,0046 0,0001 ± 0,0006 0,0050 ± 0,0305 Q2 0,94 0,92 0,98 R2 0,99 0,99 0,99 HIS FA11 SERO IST -0,0173 ± 0,0017 * -0,1591 ± 0,0492 * -0,0025 ± 0,0008 * ACQ 0,0018 ± 0,0017 * -0,0123 ± 0,0492 0,0004 ± 0,0008 IST*IST -0,0018 ± 0,0018 0,0439 ± 0,0509 -0,0005 ± 0,0008 ACQ*ACQ 0,0017 ± 0,0018 -0,0124 ± 0,0509 0,0004 ± 0,0008 IST*ACQ 0,0018 ± 0,0015 * 0,0163 ± 0,0434 0,0003 ± 0,0007 Q2 0,86 0,45 0,53 R2 0,94 0,62 0,62 FA18U FA23 MAL IST -0,1182 ± 0,0309 * -0,0384 ± 0,0098 * -0,1608 ± 0,0101 * ACQ -0,0016 ± 0,0309 -0,2269 ± 0,0098 * -0,0050 ± 0,0101 IST*IST 0,0201 ± 0,0319 0,0071 ± 0,0101 0,0006 ± 0,0104 ACQ*ACQ -0,0089 ± 0,0319 -0,1694 ± 0,0101 * 0,0034 ± 0,0104 IST*ACQ 0,0126 ± 0,0272 0,0205 ± 0,0086 * 0,0080 ± 0,0089 Q2 0,54 0,98 0,87 R2 0,69 0,99 0,97 DHAP1 DHAP2 GA3P IST -0,0519 ± 0,0122 * -0,0668 ± 0,0099 * -0,0556 ± 0,0216 * ACQ 0,0023 ± 0,0122 0,0018 ± 0,0099 0,0215 ± 0,0216 IST*IST 0,0080 ± 0,0126 0,0029 ± 0,0102 0,0099 ± 0,0224 ACQ*ACQ -0,0088 ± 0,0126 -0,0093 ± 0,0102 -0,0228 ± 0,0224 * IST*ACQ 0,0050 ± 0,0108 -0,0014 ± 0,0087 0,0037 ± 0,0191 Q2 0,59 0,74 0,45 R2 0,73 0,87 0,56 AKIX1 AKIX2 AKI1 IST -0,0338 ± 0,0179 * -0,0206 ± 0,0196 * -0,0539 ± 0,0099 * ACQ 0,0622 ± 0,0179 * 0,0592 ± 0,0196 * 0,0571 ± 0,0099 * IST*IST -0,0054 ± 0,0184 0,0064 ± 0,0202 0,0051 ± 0,0103 ACQ*ACQ -0,7874 ± 0,0184 * -0,7621 ± 0,0202 * -0,7505 ± 0,0103 * IST*ACQ 0,0089 ± 0,0157 0,0106 ± 0,0173 0,0043 ± 0,0088 Q2 0,99 0,99 1,00 R2 1,00 1,00 1,00

Supplementary material S5: Scaled and centered PLS coefficients including 95% confidence intervals for all responses in the [M-57]+ fragment / low m/z-fragment-ratio mass spectrometry model. (continued)

S20 L5HT CHO MEST IST -0,0623 ± 0,0480 * -0,1627 ± 0,0335 * -0,0187 ± 0,0024 * ACQ -0,7009 ± 0,0480 * -0,6116 ± 0,0335 * 0,0020 ± 0,0024 IST*IST -0,0170 ± 0,0496 -0,0373 ± 0,0346 * 0,0030 ± 0,0024 * ACQ*ACQ -0,5575 ± 0,0496 * -0,3831 ± 0,0346 * -0,0010 ± 0,0024 IST*ACQ 0,0206 ± 0,0423 0,0954 ± 0,0295 * 0,0000 ± 0,0021 Q2 0,96 0,96 0,80 R2 0,98 0,99 0,90 CIT 3PGA AKG IST -0,2669 ± 0,0284 * -0,0501 ± 0,0055 * -0,0922 ± 0,0070 * ACQ -0,0231 ± 0,0284 0,0028 ± 0,0055 -0,0030 ± 0,0070 IST*IST -0,0144 ± 0,0293 0,0032 ± 0,0056 0,0000 ± 0,0072 ACQ*ACQ 0,0016 ± 0,0293 -0,0034 ± 0,0056 0,0000 ± 0,0072 IST*ACQ 0,0195 ± 0,0250 0,0027 ± 0,0048 0,0036 ± 0,0062 Q2 0,81 0,81 0,84 R2 0,93 0,93 0,96